文/陳建立 &宋倫 &郝紅元 &姚勁挺 &孫友寶 &黃濤宏

使用島津ATLAS-USIS自動(dòng)液液萃取與LCMSMS聯(lián)用測定唾液中5種毒品含量 // 本文建立了一種使用島津ATLAS-USIS自動(dòng)液液萃取裝置與島津超快速三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀LCMS-8045聯(lián)用測定唾液中甲基苯丙胺、甲卡西酮、3,4-亞甲基二氧甲基苯丙胺、美沙酮和阿普唑侖含量的方法。該方法具有自動(dòng)化程度高、分析速度快、靈敏度高、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)，可用于唾液中這5種毒品含量的測定。

近年來毒品的濫用呈明顯增長的趨勢，其中，甲基苯丙胺(MAMP)，甲卡西酮，3,4-亞甲基二氧甲基苯丙胺(MDMA)，美沙酮和阿普唑侖屬于常見的毒品種類，由于其嚴(yán)重的社會(huì)和個(gè)人危害性，各國政府已經(jīng)采取了許多措施來打擊吸毒、販毒等活動(dòng)。尿液、汗液、唾液、精液及毛發(fā)等生物樣品均可作為檢測的目標(biāo)，這些樣品中的毒品含量檢測是確認(rèn)是否吸毒的重要司法依據(jù)，其鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要。這些樣品基質(zhì)組成通常比較復(fù)雜，干擾成分多，待檢測組分含量較低，通常需要對樣品進(jìn)行必要的前處理，常見的前處理方法有固相萃取、固相微萃取、液-液萃取等，其步驟復(fù)雜且耗時(shí)費(fèi)力。因此開發(fā)自動(dòng)化程度高、快速、準(zhǔn)確、高效的前處理和檢測方法具有重要意義。

島津ATLAS-USIS自動(dòng)前處理裝置可對唾液、尿液、血液等樣品自動(dòng)進(jìn)行液-液萃取制備樣品，復(fù)溶后可以進(jìn)行液質(zhì)聯(lián)用分析或氣質(zhì)聯(lián)用分析，自動(dòng)化程度高，大量節(jié)省人力物力。本文利用島津ATLAS-USIS自動(dòng)前處理裝置，結(jié)合島津超快速三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀LCMS-8045建立了唾液中5種毒品含量的高自動(dòng)化、高靈敏度的快速檢測方法。

圖1 島津ATLAS-USIS系統(tǒng)（左）和LCMS-8045（右）

實(shí)驗(yàn)部分

儀器

本實(shí)驗(yàn)使用ATLAS-USIS自動(dòng)前處理裝置及島津超高效液相色譜儀LC-30A與三重四極桿質(zhì)譜儀LCMS-8045聯(lián)用系統(tǒng)（如圖1所示）。具體配置為LC-30AD×2輸液泵、DGU-20A5在線脫氣機(jī)、SIL-30AC自動(dòng)進(jìn)樣器、CTO-30A柱溫箱、CBM-20A系統(tǒng)控制器、LCMS-8045三重四極桿質(zhì)譜儀，LabSolutions Ver. 5.86色譜工作站。Column（2.1 mm I.D.×100 mm L., 2 μm）

流 動(dòng) 相：A相-0.2%甲酸水溶液，B相-甲醇

流速：0.35 mL/min

柱溫：40℃

進(jìn)樣量：10 μL

洗脫方式：梯度洗脫，B相初始濃度為10%, 洗脫程序見表1.

表1 梯度洗脫程序

2.質(zhì)譜條件

離子化模式： ESI(+)

DL溫度 ： 250℃

接口溫度： 300℃

加熱氣：空氣 10.0 L/min

加熱模塊溫度：400℃

霧化氣：氮?dú)?.0 L/min

干燥氣：氮?dú)?0.0 L/min

碰撞氣：氬氣

掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)

駐留時(shí)間：30 ms

MRM參數(shù)：見表2

圖2 0.5ng/mL標(biāo)準(zhǔn)樣品MRM色譜圖

表2 MRM優(yōu)化參數(shù)

表3 校準(zhǔn)曲線參數(shù)（權(quán)重1/C2）

表4 檢出限和定量限

分析條件

1. 液相條件

色譜柱：Shim-pack GIST C18

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

將1 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)樣品（甲醇溶解）儲(chǔ)備液以流動(dòng)相逐級(jí)稀釋得到濃度分別為 0.01、0.02、0.05、0.10、0.50、1.00、5.00、10.00、50.00ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

樣品前處理方法

（1）取準(zhǔn)確體積的1 mg/mL標(biāo)樣儲(chǔ)備液，加到空白唾液中，依次配制得到濃度分別為10.00、1.00、0.10ng/mL的基質(zhì)加標(biāo)溶液，每個(gè)濃度平行取樣6份，用ATLAS-USIS自動(dòng)前處理裝置的MainSeq 2程序進(jìn)行前處理，將前處理得到的樣品用流動(dòng)相定容到5 mL，0.22 μm濾膜過濾后上機(jī)分析（注：ATLAS-USIS的MainSeq 2程序處理樣品時(shí)，取3 mL唾液，用4 mL乙酸乙酯萃取，然后取3 mL上清液進(jìn)行烘干處理，最后手動(dòng)用流動(dòng)相將烘干剩余物定容到5 mL）；

（2）取準(zhǔn)確體積的1 mg/mL標(biāo)樣儲(chǔ)備液，加到經(jīng)ATLAS-USIS處理過的空白唾液中，依次配制得到濃度分別為10.00、1.00、0.10 ng/mL的基質(zhì)加標(biāo)溶液，0.22 μm濾膜過濾后上機(jī)分析以考察基質(zhì)效應(yīng)。

圖3 校準(zhǔn)曲線

結(jié)果與討論

標(biāo)準(zhǔn)樣品的MRM色譜圖

標(biāo)準(zhǔn)樣品的MRM色譜圖如圖2所示。

線性范圍

將濃度為 0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、5.00、10.00、20.00、50.00 ng/mL5 種目標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)工作液，按1.2中的分析條件上機(jī)分析，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，外標(biāo)法建立校準(zhǔn)曲線，結(jié)果如圖3所示，線性方程、線性范圍和相關(guān)系數(shù)見表3。

檢出限和定量限

對濃度為0.02 ng/mL溶液進(jìn)樣分析，以ASTM法計(jì)算噪聲，以噪聲的3倍作為最低檢出限（即S/N=3，LOD表示），以噪聲的10倍作為最低定量限（即S/N=10，LOQ表示），則儀器對5種目標(biāo)物的LOD和LOQ結(jié)果如表4所示。

精密度實(shí)驗(yàn)

將ATLAS-USIS前處理裝置處理得到的樣品用1.2的方法進(jìn)行分析，考察儀器的重復(fù)性，目標(biāo)物在不同濃度下的保留時(shí)間和峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在0.02～0.13% 和 0.73～7.84% 之 間，結(jié)果表明儀器具有良好的精密度如表5所示。

表5 ATLAS-USIS處理樣品的保留時(shí)間和峰面積重復(fù)性結(jié)果（n=6）

表6 ATLAS-USIS前處理裝置回收率結(jié)果

回收率實(shí)驗(yàn)

在空白唾液中添加5種目標(biāo)物，按照1.4-(2)用ATLAS-USIS對樣品處理后進(jìn)樣分析，計(jì)算回收率，結(jié)果如表6所示，在不同濃度下5種目標(biāo)物的回收率在68.9～93.1%之間。

基質(zhì)效應(yīng)

分別配制低、中、高三份不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品加標(biāo)液，以相同濃度樣品加標(biāo)液所得峰面積同標(biāo)準(zhǔn)溶液所得峰面積的比值換算成百分比作為基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行考察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表7，由表7可知在不同濃度下5種目標(biāo)物基質(zhì)效應(yīng)結(jié)果在90.2～113.7%之間，表明基質(zhì)效應(yīng)對目標(biāo)物檢測的干擾較小。

表7 基質(zhì)效應(yīng)考察

結(jié)論

本文建立了一種使用ATLASUSIS自動(dòng)前處理裝置及島津超高效液相色譜儀LC-30A和三重四極桿質(zhì)譜儀LCMS-8045聯(lián)用測定唾液中甲基苯丙胺(MAMP)、甲卡西酮、3,4-亞甲基二氧甲基苯丙胺(MDMA)、美沙酮和阿普唑侖含量的方法。以外標(biāo)法定量，校準(zhǔn)曲線線性良好，線性相關(guān)系數(shù)不低于0.9979。對低、中、高不同濃度的樣品平行測試6次，保留時(shí)間和峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在0.02～0.13%和0.73～7.84%之間，儀器精密度良好，檢出限和定量限分別為0.001-0.006 ng/mL和0.003-0.020 ng/mL。該方法具有自動(dòng)化程度高、分析速度快、靈敏度高、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)，可用于唾液中這5種毒品含量的測定。