文/Isabelle M?ller

在制藥和食品工業(yè)以及其他不同工業(yè)領(lǐng)域中，HPLC高效液相色譜檢測(cè)分析技術(shù)被廣泛用于目標(biāo)化合物或者雜質(zhì)的定性、定量分析。近幾年來(lái)由于檢測(cè)效率和檢驗(yàn)分析能力的原因，UHPLC超高效液相色譜檢測(cè)分析技術(shù)已經(jīng)進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的日常工作中來(lái)了。

這兩種技術(shù)的區(qū)別在于系統(tǒng)最大壓力的不同。由于UHPLC超高效液相色譜檢測(cè)分析技術(shù)有著很高的壓力穩(wěn)定性,因此它可以在更短的時(shí)間內(nèi)完成類似于高效液相色譜分析的任務(wù)。這種高端儀器設(shè)備主要是在科研領(lǐng)域中使用，以便能夠盡快的設(shè)計(jì)出新的檢驗(yàn)分析方法。在臨床檢驗(yàn)分析中也用到了UHPLC超高效液相色譜分析技術(shù)，以便通過(guò)快速的檢測(cè)分析來(lái)提高檢驗(yàn)效率、提高儀器設(shè)備的利用率。

然而在許多常規(guī)分析中仍然使用普通的HPLC高效液相色譜儀；這主要是因?yàn)樗谫|(zhì)量監(jiān)控和質(zhì)量保證中非常堅(jiān)固耐用、維護(hù)保養(yǎng)費(fèi)用低廉。在有著上述兩種液相色譜系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室中，一方面是將HPLC高效液相色譜法的檢驗(yàn)操作方法移植到UHPLC超高效液相色譜法中，旨在增加檢驗(yàn)分析時(shí)的通量；另一方面又將專門為UHPLC超高效液相色譜法研制開(kāi)發(fā)的、更加穩(wěn)健的操作方法移植到HPLC高效液相色譜法中。

然而，不同系統(tǒng)之間的方法轉(zhuǎn)換不僅僅只是縮短了檢驗(yàn)分析的時(shí)間,而且還有許多參數(shù)是方法轉(zhuǎn)換過(guò)程中需要修改，例如流速、時(shí)間程序和色譜柱尺寸等，在HPLC與UHPLC之間的方法轉(zhuǎn)換中這些參數(shù)都必須修改。另外，當(dāng)您使用的色譜儀是不同生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品時(shí)，這些參數(shù)也必須重新修改，不能一成不變的照搬。如果方法轉(zhuǎn)換不成功，則會(huì)出現(xiàn)不同的洗脫結(jié)果、不同的檢出率和不同的相對(duì)保留時(shí)間 – 簡(jiǎn)而言之：檢驗(yàn)分析的結(jié)果沒(méi)有可比性（參見(jiàn)圖1）。到底哪些參數(shù)是方法轉(zhuǎn)換時(shí)必須考慮的參數(shù)呢？

圖1 以頭孢菌素類抗生素為例：從HPLC簡(jiǎn)簡(jiǎn)單單的轉(zhuǎn)換到UHPLC時(shí)存在的問(wèn)題。

圖2：Labsolutions軟件中的方法轉(zhuǎn)換工具

色譜柱尺寸和檢驗(yàn)分析條件

從HPLC轉(zhuǎn)換到UHPLC最明顯的變化是色譜柱的不同。超高效液相色譜儀的色譜柱較短、內(nèi)徑較細(xì)、粒徑較小。但這還不是全部不同之處：在調(diào)整了色譜柱的規(guī)格尺寸之后還要調(diào)整檢測(cè)分析的分離條件。適合于HPLC高效液相色譜法的最佳參數(shù)不能全部適用于UHPLC超高效液相色譜法；同樣適合于UHPLC超高效液相色譜法的最佳參數(shù)也并不能全部適用于HPLC高效液相色譜法。

在兩種色譜系統(tǒng)之間的方法轉(zhuǎn)換時(shí)首先要注意下列參數(shù)：

■流速;

■時(shí)間程序（梯度、閥和事件的切換等等）；

■系統(tǒng)的死區(qū)容積；

《通知》要求，各級(jí)自然資源主管部門分解下達(dá)新增建設(shè)用地計(jì)劃，要把批而未供和閑置土地?cái)?shù)量作為重要測(cè)算指標(biāo)，逐年減少批而未供、閑置土地多和處置不力地區(qū)的新增建設(shè)用地計(jì)劃安排。要明確各地區(qū)處置批而未供和閑置土地具體任務(wù)和獎(jiǎng)懲要求，對(duì)兩項(xiàng)任務(wù)均完成的省份，國(guó)家安排下一年度計(jì)劃時(shí)，將在因素法測(cè)算結(jié)果基礎(chǔ)上，再獎(jiǎng)勵(lì)10%新增建設(shè)用地計(jì)劃指標(biāo)；任一項(xiàng)任務(wù)未完成的，核減20%新增建設(shè)用地計(jì)劃指標(biāo)。

■探測(cè)器的數(shù)據(jù)采集速率；

■注射量；

■系統(tǒng)的最大壓力。

重新編寫(xiě)時(shí)間程序是必不可少的工作之一，尤其是在梯度分析中。只是縮短分析時(shí)間而不對(duì)梯度的時(shí)間程序做相應(yīng)的調(diào)整會(huì)明顯的改變分離效果。在規(guī)定的分離條件下，相對(duì)保留時(shí)間和洗脫順序常常是規(guī)定好的，因此為了成功的實(shí)現(xiàn)方法轉(zhuǎn)換就必須調(diào)整時(shí)間程序。

兩種色譜法之間所有相關(guān)參數(shù)的調(diào)整匹配用手動(dòng)方式轉(zhuǎn)換，是一件非常費(fèi)時(shí)費(fèi)力的復(fù)雜事情。為了避免這些麻煩、減少困難，一些液相色譜系統(tǒng)的供應(yīng)商提供了成功實(shí)現(xiàn)方法轉(zhuǎn)換的參數(shù)換算程序、甚至（U）HPLC超高效-高效液相色譜系統(tǒng)專用的轉(zhuǎn)換方法。

可靠的雙向方法轉(zhuǎn)換

Shimadzu公司研發(fā)生產(chǎn)的Nexera-i MT方法轉(zhuǎn)換系統(tǒng)與Labsolutions軟件相互結(jié)合，是一種特殊的超高效-高效液相色譜法的轉(zhuǎn)換系統(tǒng)，其配用的軟件是在HPLC和UHPLC兩種系統(tǒng)之間雙向的計(jì)算轉(zhuǎn)移條件的軟件。它有兩條獨(dú)立的流路，一條應(yīng)用于HPLC高效液相色譜儀連接，另一條用于與超高效液相色譜儀連接；因此可以實(shí)現(xiàn)無(wú)縫互換。

將HPLC與UHPLC在一個(gè)單元中組合起來(lái)帶來(lái)了許多好處。首先是可以在一個(gè)系統(tǒng)中成功的實(shí)現(xiàn)方法轉(zhuǎn)換，只需要驗(yàn)證一個(gè)色譜設(shè)備就可以了。這當(dāng)然也減少了實(shí)驗(yàn)室的空間占用、減少了儀器設(shè)備的維護(hù)保養(yǎng)需求。另外，這一系統(tǒng)可以使用不同的實(shí)驗(yàn)套件來(lái)調(diào)整系統(tǒng)的容積，這就大大的方便了不同生產(chǎn)廠家色譜儀之間的方法轉(zhuǎn)換了。

利用Labsolutions軟件附帶的方法參數(shù)的換算程序和方法轉(zhuǎn)換工具（參見(jiàn)圖2）可以方便的實(shí)現(xiàn)新、舊（U）HPLC系統(tǒng)的轉(zhuǎn)換。在新舊系統(tǒng)之間的轉(zhuǎn)換時(shí)，只要打開(kāi)現(xiàn)用HPLC或者UHPLC方法的窗口，輸入新、舊色譜柱的規(guī)格尺寸所需的最終流速就可以了。軟件會(huì)自動(dòng)的計(jì)算出其他所有參數(shù)，計(jì)算的結(jié)果可以直接作為新方法保存下來(lái)，無(wú)需人工手動(dòng)一個(gè)個(gè)輸入?yún)?shù)。

LP本刊提示

方法轉(zhuǎn)換

方法轉(zhuǎn)換的原因是多方面的：轉(zhuǎn)換到UHPLC超高效液相色譜法是會(huì)縮短檢測(cè)分析的時(shí)間，轉(zhuǎn)換到HPLC高效液相色譜法時(shí)確保了常規(guī)分析的穩(wěn)定性。手工調(diào)整檢測(cè)分析參數(shù)的方法是費(fèi)時(shí)費(fèi)力的，而且相當(dāng)復(fù)雜。利用軟件工具將現(xiàn)有的方法轉(zhuǎn)換的到新的（U）HPLC系統(tǒng)中去是現(xiàn)在最安全的、易于用戶使用的，而且也是最省時(shí)省力的替代方案。利用特殊的組合系統(tǒng)，例如將兩個(gè)單獨(dú)的UHPLC系統(tǒng)與和HPLC系統(tǒng)用Nexera-i MT組合在一起就不需要再對(duì)兩套系統(tǒng)獨(dú)立驗(yàn)證了，而且這一方法還可以方便地在HPLC系統(tǒng)和UHPLC系統(tǒng)之間進(jìn)行雙向切換。

方法轉(zhuǎn)換的實(shí)例

■頭孢菌類抗生素的快速分析：頭孢菌素是口服或者注射劑量的β-內(nèi)酰胺類抗生素。在本例中，首先用HPLC高效液相色譜法對(duì)11種頭孢菌素進(jìn)行了分離，然后在方法轉(zhuǎn)換工具的幫助下測(cè)定UHPLC超高效液相色譜分離中的最佳參數(shù)。圖3將色譜圖和它們使用的分離方法一同表示出來(lái)了。通過(guò)HPLC到UHPLC的方法轉(zhuǎn)換，在相同的洗脫模式下分離時(shí)間縮短了三倍。在HPLC每分析一次，分離需要的時(shí)間為65分鐘，而在UHPLC分離則可以在17分鐘內(nèi)得到相同的分離結(jié)果。

圖3 以頭孢菌素分離為例，從HPLC轉(zhuǎn)換到UHPLC的最佳轉(zhuǎn)換

圖4 以磺胺類藥物分析為例從UHPLC轉(zhuǎn)換到HPLC的最佳轉(zhuǎn)換

■常規(guī)應(yīng)用磺胺類藥物分析：磺胺類藥物是一組合成抗菌素，用于治療感染和化療等其他疾病。本例是將UHPLC方法轉(zhuǎn)換到常規(guī)的HPLC方法中去。根據(jù)新的色譜柱尺寸，利用方法轉(zhuǎn)換工具將九種磺胺類藥物的UHPLC方法轉(zhuǎn)換成在HPLC高效液相色譜法中。各自的色譜圖和分析分離條件如圖4所示。轉(zhuǎn)換到粒徑較大、尺寸較長(zhǎng)的色譜柱后，分離時(shí)間也從超高效分離時(shí)的5分鐘延長(zhǎng)到了大約20分鐘，但分離效果幾乎是一樣的。