黃津津, 姚 婷, 王友升

(北京工商大學(xué)北京食品營(yíng)養(yǎng)與人類健康高精尖創(chuàng)新中心,北京 100048)

葡萄屬漿果類果實(shí),營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高,深受消費(fèi)者喜愛(ài),但其在采摘、運(yùn)輸和貯藏過(guò)程中易受微生物侵染而發(fā)生腐爛,嚴(yán)重影響葡萄品質(zhì)[1]。采摘后的葡萄腐爛損失高達(dá)總產(chǎn)量的20%以上[2]。據(jù)報(bào)道,灰霉使果實(shí)腐爛,造成鮮食葡萄毀滅性的病變[3-4];另外,灰霉是以分生孢子和菌核存在被害部位,再侵染花穗,在多雨陰濕的花期,該病害極易侵染葡萄植株[5-7]。莖點(diǎn)霉侵染葉柄、葉片和果實(shí),使葡萄果實(shí)出現(xiàn)淡褐色斑點(diǎn),導(dǎo)致果實(shí)呈水浸狀軟化腐爛,是引起葡萄黑腐病的主要病原菌。果生炭疽菌主要危害接近成熟的果粒,造成果實(shí)腐爛變軟,失水干縮脫落,也可危害葉片[3]。目前,對(duì)引起葡萄采后病害的其他病原菌微生物,尤其是葡萄源對(duì)其他果實(shí)的致病性,國(guó)內(nèi)外鮮有報(bào)道。

利用不同物種間rDNA ITS區(qū)序列構(gòu)建進(jìn)化樹(shù),可確定微生物屬內(nèi)種間的親緣關(guān)系[8],研究從采后貯藏期間發(fā)病的葡萄及葡萄葉上分離到10株絲狀真菌,結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察和真菌rDNA ITS區(qū)序列分析結(jié)果,確定病原菌種屬地位,并在4種不同果實(shí)上進(jìn)行接種實(shí)驗(yàn),分析不同病原菌的致病力,發(fā)現(xiàn)引起葡萄、圣女果、蘋果和梨果實(shí)采后病害的新病原微生物,可對(duì)真菌種間關(guān)系及病害防治研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株

絲狀真菌814#、815#和880#分離于采后貯藏過(guò)程中自然發(fā)病的葡萄果實(shí),菌株 794#、797#、798#、811#、902#、903#和 1397#分離于葡萄葉。

1.1.2 培養(yǎng)基

馬鈴薯培養(yǎng)基(potato dextrose agar)和麥芽浸粉培養(yǎng)基(malt extract agar)的配制參考文獻(xiàn)[9]。

1.1.3 主要試劑

十二烷基磺酸鈉(SDS)、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、乙二胺四乙酸鈉(EDTA),購(gòu)自Amresco公司;DNA分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)2×Taq PCR MasterMix.、MarkerⅦ,購(gòu)自天根生化科技(北京)有限公司;PCR引物 ITS-4(5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3')和ITS-5(5'-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3'),由Invitrogen公司合成。

1.2 儀器與設(shè)備

MG96+型PCR儀,杭州朗基科學(xué)儀器有限公司;Axio Image A1型顯微鏡,德國(guó)Zeiss公司;A2型生物安全柜,美國(guó)Thermo公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 病原菌的分離、純化及回接

按照參考文獻(xiàn)[10]的方法進(jìn)行。通過(guò)組織分離法對(duì)病害葡萄中的微生物進(jìn)行分離,將發(fā)病的葉子和果實(shí)經(jīng)過(guò)體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇處理后,取發(fā)病葉子和果實(shí)病、健交界處組織,將葉子發(fā)病一面放于PDA固體培養(yǎng)基上,25℃培養(yǎng)3 d。取菌落外沿菌塊,分別用三點(diǎn)轉(zhuǎn)接到PDA和ME固體培養(yǎng)基平板上,25℃培養(yǎng)。挑選健康無(wú)損傷的葡萄葉子和葡萄果實(shí),用75%乙醇將表面消毒,用無(wú)菌接種針刺孔,取純化后的菌塊接種至傷口處,分別在葉子的正反面及果實(shí)的刺傷處接種菌塊,觀察果實(shí)接種處是否出現(xiàn)相應(yīng)病癥,并在病斑處再次分離該病原菌,比較分離到的病原菌與接種病原菌的菌落形態(tài)。

1.3.2 病原菌形態(tài)學(xué)鑒定

純化得到生長(zhǎng)于PDA培養(yǎng)基上的菌落,從菌落外沿取菌塊,分別轉(zhuǎn)接到PDA和ME培養(yǎng)基上,25℃培養(yǎng)14 d,于7、14 d觀察菌落形態(tài)、色澤等。對(duì)培養(yǎng)期間長(zhǎng)出的孢子進(jìn)行顯微觀察[11],將插片培養(yǎng)的蓋玻片置于乳酸苯酚棉藍(lán)染色液中,觀察菌落產(chǎn)生分生孢子及分生孢子梗的形狀、色澤,分生孢子隔膜等性狀,查閱相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行對(duì)比,初步確定病原菌的種屬。

1.3.3 病原菌分子生物學(xué)鑒定

基因組DNA的提取及ITS區(qū)PCR擴(kuò)增與序列測(cè)定采用改良后SDS-氯化芐法提取待鑒定菌株的基因組DNA[12]。以真菌rDNA ITS區(qū)的通用引物ITS4和ITS5作為PCR擴(kuò)增引物,通過(guò)PCR擴(kuò)增出ITS區(qū)。 25μL 2×Taq PCR Master Mix、ITS4和 ITS5兩條正反向引物各4μL、5μL基因組模板、12μL ddH2O,將體系混勻。在PCR儀中94℃,3 min預(yù)變性;94℃,30 s變性;51℃,30 s退火;72℃,45 s延伸;72℃,10 min再延伸;30個(gè)循環(huán)。PCR產(chǎn)物由生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行基因測(cè)序,將結(jié)果在NCBI上進(jìn)行序列比對(duì),在Genebank中查找同源序列,將10株真菌rDNA ITS區(qū)序列與同源序列進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析,并且構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)。

1.3.4 病原菌在其他果實(shí)上的致病力分析

挑選健康無(wú)損傷的果實(shí),用去離子水沖洗,自然晾干后用75%乙醇將表面消毒,無(wú)菌接種針刺孔,取純化后的菌塊接種至傷口處,觀察果實(shí)接種處是否出現(xiàn)相應(yīng)病癥,并在病斑處再次分離病原菌,比較分離得到的病原菌與接種病原菌的菌落形態(tài)。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄源絲狀真菌的分離與回接結(jié)果

采自不同品種的葡萄和葡萄葉發(fā)病癥狀如圖1,在PDA培養(yǎng)基上對(duì)其進(jìn)行病原菌分離。由圖1a1～j1可知,分別從自然發(fā)病的葡萄和葡萄葉子的發(fā)病部位分離得到絲狀真菌 814#、815#、880#和794#、797#、798#、811#、902#、903#、1397#。 其中,將分離得到的菌株純化后回接到葡萄和葡萄葉傷口處,在接種部位均出現(xiàn)相應(yīng)病癥(圖1a2～j2),并能從該病害部位再次分離得到相應(yīng)病原菌。

2.2 葡萄源絲狀真菌的形態(tài)觀察結(jié)果

2.2.1 菌落形態(tài)

圖1 10株絲狀真菌分離與回接病癥Fig.1 Isolation and reinoculated symptoms of ten strains

觀察菌株的菌落形態(tài)發(fā)現(xiàn),10株絲狀真菌在25℃條件下生長(zhǎng)均較旺盛(見(jiàn)圖2、圖3)。在培養(yǎng)7 d后,814#、815#菌株的菌絲均鋪滿PDA和ME平板,菌落形態(tài)一致,表面光滑,質(zhì)地緊密,邊緣規(guī)則,菌絲較短(圖 2 a1、a2、b1、b2);菌株 880#在 PDA 培養(yǎng)基上菌絲較短,呈現(xiàn)青色,而在ME培養(yǎng)基上菌落呈現(xiàn)白色,菌落邊緣整齊(圖2 c1、c2);菌株794#在PDA培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)較快,產(chǎn)生大量孢子,且在2種培養(yǎng)基上均產(chǎn)生同心輪紋(圖2 d1、d2);菌株797#、902#、903#在PDA培養(yǎng)基上產(chǎn)生大量粉色孢子,菌落呈圓形,邊緣整齊,可見(jiàn)同心輪紋(圖2 e1、e2、h1、h2、i1、i2);菌株 798#在 PDA 培養(yǎng)基上菌絲較短,菌落邊緣呈現(xiàn)白色,中間顏色為青色(圖2 f1、f2);菌株811#在ME培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)較快,菌絲上出現(xiàn)晶瑩水滴,在PDA培養(yǎng)基上菌絲較光滑(圖2 g1、g2);菌株1397#在PDA和ME培養(yǎng)基上均生長(zhǎng)較快,菌絲在PDA培養(yǎng)基上呈現(xiàn)白色,在ME培養(yǎng)基上呈現(xiàn)淡黃色,且較疏松(圖2 j1、j2)。培養(yǎng)14d后,814#、815#菌落產(chǎn)生色素,在PDA培養(yǎng)基上呈黑色,在ME培養(yǎng)基上呈灰色(圖 3 a1、a2、b1、b2);880#在 2 種培養(yǎng)基上菌落顏色加深,表面出現(xiàn)凸起(圖3 c1、c2);菌株794#在PDA培養(yǎng)基上菌絲呈現(xiàn)黑色,孢子鋪滿平板,在ME培養(yǎng)基上呈現(xiàn)褐色,生出大量孢子,2種培養(yǎng)基上菌絲形狀相似,但PDA培養(yǎng)基的菌落直徑較小(圖 3 d1、d2);菌株 797#、902#、903#菌落顏色加深,菌絲呈無(wú)色、短小的茸毛狀(圖 3 e1、e2、h1、h2、i1、i2);菌株798#在 PDA 和 ME上菌落顏色加深,表面出現(xiàn)凸起(圖3 f1、f2);菌株811#在PDA培養(yǎng)基上菌落邊緣粗糙,菌落顏色變深,在ME培養(yǎng)基上菌落鋪滿平板且有菌核生成(圖3 g1、g2);菌株1397#生長(zhǎng)旺盛,鋪滿平板,白色菌絲顏色稍有加深(圖3 j1、j2)。

圖2 10株絲狀真菌培養(yǎng)7 d的菌落形態(tài)Fig.2 Colony morphology of ten strains after 7 d culture

圖3 10株絲狀真菌培養(yǎng)14 d的菌落形態(tài)Fig.3 Colony morphology of ten strains after 14 d culture

圖4 10株絲狀真菌的顯微形態(tài)觀察Fig.4 Microscopic morphology of ten strains

2.2.2 菌絲形態(tài)

不同菌株的菌絲形態(tài)如圖4。由圖4可知,菌株814#的菌絲呈無(wú)色至淺褐色,分生孢子著生,呈圓形或橢圓形,褐色的具有孔口的單腔分生孢子器上,分生孢子單生,直徑在10μm左右(圖4 a1、a2);菌株815#和794#的分生孢子梗初期無(wú)色,隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)變成褐色,分生孢子頂端開(kāi)始為黑色圓形,直徑在40μm左右,后期孢子囊破裂,大量分生孢子產(chǎn)出,此時(shí)孢子囊呈現(xiàn)褐色,分生孢子為圓形,直徑在5 μm 左右(圖4 b1、b2、d1、d2);菌株880#在7 d 時(shí)并未產(chǎn)生孢子,菌絲呈淺褐色,有較多分支(圖4c1、c2);菌株797#的分生孢子梗初期無(wú)色,有分支,孢子呈現(xiàn)橢圓體,分生孢子為雙細(xì)胞,有分隔,直徑約15 μm(圖4 e1、e2);菌株798#的分生孢子梗呈深褐色,分支較多,梗基部腳孢直或者彎曲,有孢囊,分生孢子橢圓形或圓形,淡褐色(圖4f1、f2);菌株811#的分生孢子梗呈無(wú)色至深褐色,分支較多,未產(chǎn)生分生孢子(圖4g1、g2);菌株902#的分生孢子梗呈無(wú)色至墨綠色,分支較多,分生孢子單生,褐色,數(shù)量較少,倒棍棒形或橢圓形,直徑約30μm,有多個(gè)縱橫隔膜,有長(zhǎng)喙(圖4h1、h2);菌株903#未產(chǎn)生孢子,菌絲淺褐色,有較少分支(圖4i1、i2);菌株1397#菌絲呈無(wú)色至淺綠色,分生孢子著生,呈圓形,直徑在8μm左右(圖 4j1、j2)[11-13]。

2.3 葡萄源絲狀真菌基因組DNA的提取和PCR擴(kuò)增驗(yàn)證

從葡萄及葡萄葉中分離的10株絲狀真菌的基因組DNA PCR擴(kuò)增后的電泳條帶結(jié)果如圖5,條帶清晰,目的片段均在600 bp左右,與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)相符。

圖5 10株絲狀真菌的ITS區(qū)rDNA電泳檢測(cè)圖譜Fig.5 Agarose gel electrophoresis results of ITSrDNA sequence of ten strains

從葡萄及葡萄葉中分離的10株絲狀真菌的ITS區(qū)rDNA基因PCR擴(kuò)增片段的序列在NCBI上比對(duì)得到同源序列,利用MEGA6軟件構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)如圖6。可以看出,10株絲狀真菌中,菌株814#與莖點(diǎn)霉Phoma sp.(KM979918.1)在同一分枝上,且通過(guò)Bootstraps的驗(yàn)證表明它們具有較高的置信度,支持率可達(dá)95%(圖6a)。菌株815#與刺孢曲霉Aspergillus aculeatus(FJ629320.1)在同一分枝上,且通過(guò)Bootstraps的驗(yàn)證表明它們具有較高的置信度,支持率可達(dá)100%(圖6b)。菌株880#與灰葡萄孢Botrytis cinerea(KM016533.1)在同一分枝上(圖6c)。菌株794#與日本曲霉Aspergillusjaponicus(FJ878653.1)在同一分枝上,且通過(guò)Bootstraps的驗(yàn)證表明它們具有較高的置信度,支持率可達(dá)100%(圖6d)。菌株797#與粉紅單端孢Trichothecium roseum(KT359587.1)在同一分枝上,且通過(guò)Bootstraps的驗(yàn)證表明,它們具有較高的置信度,支持率可達(dá)100%(圖6e)。菌株798#與大蒜盲種葡萄孢Botrytis porri(AJ716292.1)在同一分枝上,通過(guò)Bootstraps的驗(yàn)證表明,它們具有較高的置信度,支持率可達(dá)96%(圖6f)。菌株811#與果生炭疽菌 Colletotrichum fructicola(KC566789.1)在同一分枝上,通過(guò)Bootstraps的驗(yàn)證表明,它們具有較高的置信度,支持率可達(dá)100%(圖6g)。菌株902#與鏈格孢菌Alternaria eichhorniae(KC146356.1)在同一分枝上,通過(guò)Bootstraps的驗(yàn)證表明,它們具有較高的置信度,支持率可達(dá)100%(圖6h)。菌株903#與芬芳鐮孢菌Fusarium redolens(KX610323.1)在同一分枝上,通過(guò) Bootstraps的驗(yàn)證表明,它們具有較高的置信度,支持率可達(dá)100%(圖6i)。菌株1397#與脈孢菌Neurospora terricola(FR774522.1)在同一分枝上,通過(guò) Bootstraps的驗(yàn)證表明,它們具有較高的置信度,支持率可達(dá)99%(圖6j)。

結(jié)合形態(tài)特征(圖2、圖4)與《真菌鑒定手冊(cè)》中相應(yīng)霉菌描述比較,本研究中分離到的菌株814#、815#、880#、794#、797#、798#、811#、902#、903#和1397#依次確定為莖點(diǎn)霉 Phoma sp.(KM979918.1)、刺孢曲霉 Aspergillus aculeatus(FJ629320.1)、灰 葡 萄 孢 Botrytis cinerea(KM016533.1)、日本曲霉 Aspergillus japonicus(FJ878653.1)、粉紅單端孢 Trichothecium roseum(KT359587.1)、大蒜盲種葡萄孢 Botrytis porri(AJ716292.1)、果生炭疽菌 Colletotrichum fructicola(KC566789.1)、鏈格孢菌 Alternaria eichhorniae(KC146356.1)、芬芳鐮孢菌 Fusarium redolens(KX610323.1)和脈孢菌 Neurospora terricola(FR774522.1)。

圖6 以ITS區(qū)rDNA基因序列為分子標(biāo)記的10株絲狀真菌菌株系統(tǒng)進(jìn)化分析Fig.6 Phylogentic tree of ten strains based on ITSrDNA sequence

2.4 葡萄源病原菌對(duì)不同果實(shí)致病力的比較

將菌株 814#、815#、880#、794#、797#、798#、811#、902#、903#和1397#接種到4種果實(shí)上,觀察發(fā)病情況(見(jiàn)圖7)。在25℃保持一定濕度的條件下,接種菌株814#的2種漿果果實(shí)均發(fā)病,且隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加,病斑直徑逐漸擴(kuò)大,6 d后,葡萄的病斑直徑達(dá)1 cm,但此病原菌并未引起蘋果和梨發(fā)病(圖7a1～a4)。接種菌株815#、794#的2種漿果果實(shí)在第6天出現(xiàn)腐爛,果實(shí)表面產(chǎn)生孢子,在蘋果和梨上出現(xiàn)褐變,果實(shí)大面積腐爛,由此可知,從葡萄和葡萄葉上分離得到的菌株815#、794#同樣可以使其他水果發(fā)病(圖7b1～b4,d1～d4)。將菌株880#回接到4種果實(shí)上,2種漿果果實(shí)在2 d后發(fā)病,病原菌在果實(shí)表面鋪展開(kāi)來(lái),隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加,病斑直徑逐漸擴(kuò)大,在第6天幾乎覆蓋整個(gè)果實(shí),產(chǎn)生孢子,并使蘋果和梨發(fā)生褐變(圖7 c1～c4)。接種菌株797#的果實(shí)病原菌生長(zhǎng)緩慢,培養(yǎng)6 d后的病斑直徑只有0.5 cm左右,相同條件下致病力較弱(圖 e1～e4)。接種菌株798#的4種果實(shí)在第2天就出現(xiàn)明顯的發(fā)病癥狀,病原菌在果實(shí)表面鋪展開(kāi)來(lái),隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加,病原菌直徑逐漸擴(kuò)大,培養(yǎng)6 d后,病原菌幾乎覆蓋整個(gè)果實(shí),并在2種漿果果實(shí)上產(chǎn)生孢子,在蘋果和梨上出現(xiàn)褐腐且病斑直徑較大(圖7f1～f4)。接種菌株811#的果實(shí)第6天在2種漿果上均出現(xiàn)白色菌絲,刺傷周圍的組織出現(xiàn)松軟變爛,而在蘋果和梨上發(fā)病較慢,蘋果出現(xiàn)褐變,梨表面出現(xiàn)深黑色褐變,由此可知,811#可以使其發(fā)病,但致病力相對(duì)較弱(圖7g1～g4)。接種菌株902#的2種漿果果實(shí)在第2天出現(xiàn)發(fā)病癥狀,病原菌在果實(shí)表面鋪展開(kāi)來(lái),隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加,病原菌直徑逐漸擴(kuò)大,第6天時(shí),病斑直徑達(dá)1 cm,菌落由無(wú)色變?yōu)楹诨疑?蘋果和梨上均出現(xiàn)褐變(圖7h1～h4)。接種菌株903#的果實(shí)在第2天出現(xiàn)發(fā)病癥狀,隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加,病原菌直徑逐漸擴(kuò)大,培養(yǎng)6 d后,病斑直徑達(dá)1 cm,蘋果上的病斑直徑較梨小,梨上出現(xiàn)明顯的白色菌絲(圖7i1～i4)。接種菌株1397#的葡萄、蘋果和梨均未發(fā)病,圣女果有明顯發(fā)病癥狀,在接種6 d后,病斑直徑可達(dá)1 cm左右,菌絲呈現(xiàn)橙黃色(圖7j1～j4)。

圖7 10株絲狀真菌回接不同果實(shí)在25℃時(shí)的病癥Fig.7 Symptoms of reinululated fruits of ten strains at 25℃

3 討 論

本文從葡萄果實(shí)上分離到3株絲狀真菌,分別為莖點(diǎn)霉(Phoma sp.)、刺孢曲霉(A.aculeatus)、灰葡萄孢(B.cinerea),其中 Phoma sp.、B.cinerea與Serra等[14]和Hamid等[15]報(bào)道相一致;從葡萄葉上分離到7株絲狀真菌,分別為日本曲霉(A.japonicas)、粉紅單端孢(T.roseum)、大蒜盲種葡萄孢(B.porri)、果生炭疽菌(C.fructicola)、鏈格孢菌(A.eichhorniae)、芬芳鐮孢菌(F.redolens)、脈孢菌(N.terricola)。T.roseum在國(guó)內(nèi)外均有報(bào)道,它不僅是弱寄生真菌,還是菌寄生真菌。C.fructicola對(duì)果實(shí)可造成嚴(yán)重危害,還可引起葡萄花穗的腐爛,1981年美國(guó)首次對(duì)該菌進(jìn)行了報(bào)道[16]。

將10株絲狀真菌分別接種到葡萄、圣女果、蘋果和梨上,其中T.roseum可使4種果實(shí)均發(fā)病[17],但未見(jiàn)其能使梨發(fā)病的報(bào)道;B.cinerea可使4種果實(shí)均發(fā)病,但未見(jiàn)其能使圣女果和梨發(fā)病的報(bào)道[18];C.fructicola可使4種果實(shí)均發(fā)病[19],但未見(jiàn)其能使葡萄和圣女果發(fā)病的報(bào)道;A.eichhorniae、F.redolens可以使4種果實(shí)均發(fā)病,但未見(jiàn)其能使葡萄、圣女果和梨發(fā)病的報(bào)道;且 A.japonicas、A.aculeatus、C.fructicola、A.eichhorniae、F.redolens和N.terricola在國(guó)內(nèi)外均未見(jiàn)在葡萄上發(fā)病的報(bào)道,目前關(guān)于A.japonicas和A.aculeatus侵染蘋果的報(bào)道較少,而本研究發(fā)現(xiàn)A.japonicus對(duì)蘋果致病力較強(qiáng),A.aculeatus致病力較弱。

4 結(jié) 論

1)從葡萄果實(shí)上分離到3株絲狀真菌,分別為莖點(diǎn)霉(Phoma sp.)、刺孢曲霉(A.aculeatus)、灰葡萄孢(B.cinerea)。從葡萄葉上分離到7株絲狀真菌,分別為日本曲霉(A.japonicas)、粉紅單端孢(T.roseum)、大蒜盲種葡萄孢(B.porri)、果生炭疽菌(C.fructicola)、鏈格孢菌(A.eichhorniae)、芬芳鐮孢菌(F.redolens)、脈孢菌(N.terricola)。

2)文章分離到的日本曲霉(A.japonicas)、刺孢曲霉(A.aculeatus)、果生炭疽菌(C.fructicola)、鏈格孢菌(A.eichhorniae)、芬芳鐮孢菌(F.redolens)和脈孢菌(N.terricola)目前未見(jiàn)從葡萄分離得到的相關(guān)報(bào)道,為新發(fā)現(xiàn)菌株。

3) 絲狀真菌 B.cinerea、A.japonicus、A.aculeatus、T.roseum、B.porri、C.fructicola、A.eichhorniae、F.redolens均可使葡萄、圣女果、蘋果和梨4種果實(shí)發(fā)病,其中 B.cinerea、A.japonicus、B.porri和 F.redolens致病力較強(qiáng),而Phoma sp.和N.terricola只能使葡萄和圣女果發(fā)病。