鄭敏 劉亞絨 徐濤

【摘 要】目前，隨著人們對(duì)血液制品的關(guān)注度越來(lái)越高，保障其安全性成為血液制品企業(yè)首要做到的重要內(nèi)容，并且需要采取措施解決血液制品生產(chǎn)過(guò)程中的病毒?；诖耍恼陆榻B了幾種血液制品病毒滅活/去除方法，希望給相關(guān)人員提供參考意見(jiàn)。

【關(guān)鍵詞】血液制品；病毒滅活；病毒去除；方法

目前，血液制品的種類(lèi)在分離純化工藝的發(fā)展下不斷增多，為了提高血液制品的應(yīng)用率，根據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的相關(guān)規(guī)定，采取有效的血液制品病毒滅活/去除方法如物理法和化學(xué)法，在一定程度上提高了血液制品的安全性，同時(shí)，也為血液制品企業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)效益。

一、血液制品中的幾種病毒

血液制品因其不可替代的療效和安全性在維護(hù)人們的生命健康中發(fā)揮著重要的作用，保障血液制品的病毒安全性是血液制品安全與質(zhì)量控制的關(guān)鍵。目前，可經(jīng)血/血液制品傳播的病毒有甲型肝炎病毒（HAV）、乙型肝炎病毒（HBV）、人免疫缺陷病毒（HIV）、人類(lèi)細(xì)小病毒（B19），巨細(xì)胞病毒（CMV）以及人類(lèi)朊病毒。因此，為提高血液制品的安全性，需要在血漿病原體中進(jìn)行篩查并且對(duì)原料血漿檢疫期進(jìn)行有效管理，不斷加強(qiáng)血液制品病毒滅活/去除的方法，從而實(shí)現(xiàn)有效的血液制品管理，并降低或是避免經(jīng)血液途徑傳播的疾病，保證血液制品的質(zhì)量。

二、血液制品病毒滅活/去除的方法

目前，對(duì)血液制品的病毒進(jìn)行滅活和去除的基本方法有物理法和化學(xué)法，其中物理法主要是熱處理法，包括濕熱法（巴斯德法）、干熱法（60℃72h，80℃72h）、蒸汽加熱法（將濕潤(rùn)的凍干產(chǎn)品暴露于60℃、1119mPa的熱蒸汽中進(jìn)行病毒滅活10h）以及納米膜過(guò)濾等方法；而化學(xué)法主要是低pH值孵放法、有機(jī)溶劑/表面活性劑法（S/D法）等。以下是對(duì)血液制品病毒滅活/去除的方法的具體分析。

（一）物理法

1.濕熱法

濕熱法也稱(chēng)巴斯德法，該方法的基本原理是在適宜的溫度下，加快對(duì)病毒結(jié)構(gòu)的破壞速率，并且該速率應(yīng)大于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的破壞速率，由此實(shí)現(xiàn)血液制品病毒的有效滅活/去除。目前，該方法被廣泛應(yīng)用在生產(chǎn)靜脈注射免疫球蛋白（IVIG）、因子Ⅷ、因子Ⅸ以及纖維蛋白原等方面。值得注意的是需要滿(mǎn)足一定的條件，即無(wú)穩(wěn)定劑、低鹽、酸性的環(huán)境下進(jìn)行。另外，在近50年的臨床使用結(jié)果及近來(lái)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均證實(shí)，白蛋白在溶液狀態(tài)下經(jīng)60℃、10h加熱處理，即巴氏消毒后，不僅能滅活乙肝病毒（HBV），也能滅活丙肝病毒（HCV）和人免疫缺陷病毒（HIV），使白蛋白成為在病毒安全方面最可靠的一種血液制品。

2.干熱法

血液制品病毒滅活/去除物理法中的干熱滅活法，就是將凍干后的制劑再進(jìn)行加熱處理，對(duì)血液制品中的病毒進(jìn)行干熱滅活的方法。一般情況下常用的干熱法為：60℃～80℃、10h～72h加熱法以及80℃、72h加熱法。另外，在對(duì)FⅧ凍干濃制劑和凝血酶原復(fù)合物進(jìn)行熱處理時(shí)，需要使用80℃、72h干熱法，因?yàn)樵?0世紀(jì)80年代初期就已證實(shí)其他熱處理法無(wú)法實(shí)現(xiàn)對(duì)其的有效滅活。當(dāng)然除了對(duì)FⅧ凍干濃制劑和凝血酶原復(fù)合物的病毒有效滅活，還對(duì)HBV、HCV、HIV等能夠?qū)崿F(xiàn)其獨(dú)特的療效。

3.納米膜過(guò)濾法

納米膜過(guò)濾病毒去除法的基本原理為：使用在15～45nm之間的濾膜對(duì)血液制品溶液進(jìn)行過(guò)濾，并利用篩分原理在納米膜過(guò)濾中將尺寸較大的病毒或其他病原體留在納米膜上，而小于濾膜孔徑的蛋白產(chǎn)繼續(xù)留在溶液中。納米膜過(guò)濾法最早被應(yīng)用在20世紀(jì)90年代初、中期，到目前為止納米膜過(guò)濾法已經(jīng)發(fā)展成為一種較為成熟、有效、以及穩(wěn)定的病毒去除方法。目前，在相關(guān)病毒去除專(zhuān)家的深入研究中，將納米膜過(guò)濾法與巴氏消毒法進(jìn)行結(jié)合，并以豬細(xì)小病毒作為模擬病毒，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過(guò)孔徑為20nm的納米濾膜后病毒數(shù)量滴度下降了4log，由此證明納米膜過(guò)濾結(jié)合巴氏消毒法對(duì)病毒滅活的有效性，并且能夠投入新的免疫球蛋白制品病毒去除工作，還在一定程度上提高了目標(biāo)蛋白產(chǎn)品的安全性，使蛋白生物活性回收率能夠達(dá)到90%～95%。

（二）化學(xué)法

1.低pH值孵放法

低pH值孵放法的基本原理是在pH值低于4的環(huán)境條件下，使病毒表面的細(xì)胞抗原電荷發(fā)生改變，由于蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生不可逆變性，使得病毒喪失與細(xì)胞受體結(jié)合的能力，從而使得病毒無(wú)法進(jìn)入細(xì)胞，更對(duì)細(xì)胞無(wú)法侵染。另外，在低pH值孵放法實(shí)施時(shí)需要滿(mǎn)足的滅活條件為pH值是4且溫度為24℃，以此來(lái)實(shí)現(xiàn)血液制品病毒的有效滅活/去除。

2.有機(jī)溶劑/表面活性劑（S/D）法

有機(jī)溶劑/表面活性劑S/D法最早應(yīng)用于20世紀(jì)80年代中期，因其有效的滅活/去除血液制品病毒的特目前仍在沿用。有機(jī)溶劑/表面活性劑（S/D）法的基本原理是：根據(jù)有機(jī)溶劑和非離子表面活性劑的混合物能夠破壞脂包膜病毒的類(lèi)脂膜的特點(diǎn)，應(yīng)用此方法加快類(lèi)脂從病毒表面脫落速度，并使病毒失去其黏附能力，有效避免病毒感染細(xì)胞。舉一個(gè)應(yīng)用S/D法進(jìn)行病毒滅活的例子，在高純度的凝血因子中應(yīng)用S/D法進(jìn)行病毒滅活時(shí)，為實(shí)現(xiàn)有效滅活病毒的目的，需要以0.3%的TNBP和1%的Triton-X100為S/D試劑，并且在22℃條件下對(duì)凝血因子制品中的牛痘病毒、單純皰疹病毒、辛德畢斯病毒等模擬脂包膜病毒進(jìn)行有效的滅活。另外，S/D法也可以用于凝血因子制品、蛋白酶抑制劑、人免疫球蛋白等血液制品的脂包膜病毒的滅活。

三、幾種病毒滅活方法的滅活效果比較

通過(guò)對(duì)各種病毒滅活方法的基本原理的具體分析，得出其對(duì)血液制品病毒滅活/去除的有效性，表1是對(duì)這幾種病毒滅活方法滅活效果比較。

以脂包膜病毒和非脂包膜病毒為例，對(duì)其進(jìn)行病毒滅活效果比較，由表可知物理滅活方法既對(duì)脂包膜病毒具有良好的滅活效果，也在非脂包膜病毒的滅活中起到一定的作用；而化學(xué)滅活方法只對(duì)脂包膜病毒滅活具有良好的效果，對(duì)非脂包膜病毒則沒(méi)有滅活效果。

四、結(jié)語(yǔ)

綜上所述，為保證血液制品的安全性，應(yīng)當(dāng)對(duì)血液制品病毒的有效滅活/去除環(huán)節(jié)格外重視。同時(shí)，針對(duì)病毒本身具有的不易去除的特點(diǎn)，采取適當(dāng)、有效的病毒滅活/去除方式以達(dá)到高效滅活/去除病毒的目的。另外，隨著經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，在血液制品企業(yè)需要不斷更新病毒去除/滅活工藝，從整體上實(shí)現(xiàn)更好的病毒去除/滅活效果。

【參考文獻(xiàn)】

[1]陳柯君，李健，李茹冰.淺析血液制品病毒滅活的研究進(jìn)展[A].廣東省藥學(xué)會(huì).2016年廣東省藥師周大會(huì)論文集[C].廣東省藥學(xué)會(huì)，2015：7.

[2]尹惠瓊，馬玉媛，劉明，等.血液制品病毒滅活/清除技術(shù)平臺(tái)的建立與應(yīng)用[C].中國(guó)輸血協(xié)會(huì)輸血大會(huì)論文專(zhuān)集.2010.

[3]蘭蓉，陸萍，錢(qián)開(kāi)誠(chéng).血細(xì)胞成分的病毒滅活和去除[J].國(guó)際輸血及血液學(xué)雜志，2001，24（1）：51-53.