包蟲(chóng)病是棘球蚴病的俗稱，是棘球絳蟲(chóng)的中絳期，寄生于羊、牛等家畜及多種野生動(dòng)物和人的肝、肺等器官內(nèi)引起的人獸共患寄生蟲(chóng)病，為我國(guó)優(yōu)先防治的二類動(dòng)物疫病。河北省承德市接壩地區(qū)特殊的飼養(yǎng)管理方式及氣候條件為該病的流行提供了有利條件。包蟲(chóng)病危害嚴(yán)重、防治困難。保護(hù)易感動(dòng)物，對(duì)中間宿主進(jìn)行免疫，是防治包蟲(chóng)病的重要措施[1]。為了評(píng)估包蟲(chóng)病基因工程亞單位疫苗在該地區(qū)應(yīng)用的安全性和免疫效果，進(jìn)行了本試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)對(duì)象

選擇接壩地區(qū)4個(gè)牧場(chǎng)（編號(hào)A、B、C、D）8周齡左右羔羊，共479只。牧場(chǎng)飼養(yǎng)方式為自然放牧。

1.2 試驗(yàn)分組

將每場(chǎng)的羔羊隨機(jī)分組：免疫組308只、對(duì)照組171只（表1）。免疫組除注射疫苗外，其他條件與對(duì)照組完全一致。

表1 各牧場(chǎng)試驗(yàn)羔羊分組情況 單位：只

1.3 試驗(yàn)疫苗

羊棘球蚴（包蟲(chóng)）病基因工程亞單位疫苗（主要成分為羊棘球蚴EG95抗原），由重慶澳龍生物制品有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為2017013-1，生產(chǎn)日期為20171114，有效期為1年。

1.4 免疫程序與方法

8周齡左右進(jìn)行首次免疫，首次免疫后間隔1個(gè)月加免1次。按照疫苗瓶簽注明的頭份，用疫苗專用稀釋液稀釋，頸部皮下注射1 mL/只。

1.5 安全性評(píng)價(jià)

免疫后對(duì)免疫羔羊的精神狀態(tài)及注射部位局部變化等進(jìn)行仔細(xì)觀察，持續(xù)2 d，確定有無(wú)疫苗反應(yīng)及反應(yīng)的輕重程度。

1.6 抗體檢測(cè)

免疫組分別于首次免疫前、加強(qiáng)免疫前，首次免疫后2、6和9個(gè)月，對(duì)照組分別于試驗(yàn)前和試驗(yàn)后9個(gè)月，全部采血收集血清，用羊棘球蚴（包蟲(chóng)）病ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（批號(hào)20180110）進(jìn)行檢測(cè)，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作及陰陽(yáng)性判定。

2 結(jié)果

2.1 疫苗安全性

免疫組個(gè)別羊有輕微的疫苗反應(yīng)，表現(xiàn)為精神萎頓，飲食欲減退，注射部位輕微腫脹，但很快恢復(fù)正常。

2.2 免疫效果檢測(cè)

免疫組：首次免疫前平均抗體陽(yáng)性率為2.27%，1個(gè)月后（加強(qiáng)免疫前）平均抗體陽(yáng)性率上升到87.16%；首次免疫后2、6和9個(gè)月的抗體陽(yáng)性率分別為99.32%、93.49%和86.46%。對(duì)照組：首次免疫前抗體陽(yáng)性率（感染抗體）與免疫組近似，為2.34%，9個(gè)月后，抗體陽(yáng)性率上升至7.93%（表2）。4個(gè)牧場(chǎng)免疫效果檢測(cè)具體結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 免疫組和對(duì)照組抗體檢測(cè)結(jié)果

采用SPSS 22.0軟件，對(duì)試驗(yàn)開(kāi)展9個(gè)月后4個(gè)牧場(chǎng)對(duì)照組的羊包蟲(chóng)病感染抗體陽(yáng)性率進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)P值均大于0.05，無(wú)顯著性差異。

3 分析與討論

免疫羊雖對(duì)本疫苗有輕微的免疫應(yīng)激反應(yīng)，但這可能是因抓羊和免疫注射刺激導(dǎo)致的，因此可以認(rèn)為疫苗的免疫副作用較小。本研究為了驗(yàn)證疫苗的安全性及免疫效果，選擇了8周齡左右的羔羊。這是因?yàn)榇穗A段羔羊感染包蟲(chóng)病的概率較低，有利于正確評(píng)價(jià)疫苗的免疫效果[2]。因本級(jí)實(shí)驗(yàn)室不具備做蟲(chóng)卵攻擊試驗(yàn)的條件，所以本次試驗(yàn)以抗體滴度來(lái)驗(yàn)證疫苗的保護(hù)效果。有報(bào)道稱，抗體滴度高低與疫苗保護(hù)強(qiáng)弱之間存在明顯正相關(guān)關(guān)系[3]。因此，抗體滴度能夠反映出疫苗的保護(hù)效果。

表3 4個(gè)牧場(chǎng)的免疫抗體陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果單位：%

免疫抗體檢測(cè)結(jié)果顯示，免疫后抗體陽(yáng)性率快速直線上升，加強(qiáng)免疫后1個(gè)月內(nèi)，仍繼續(xù)上升，但幅度變小，免疫9個(gè)月后，仍保持較高的抗體水平（圖1），說(shuō)明疫苗能快速誘導(dǎo)羊機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù)抗體，且加強(qiáng)免疫后，能維持較長(zhǎng)時(shí)間。根據(jù)試劑盒說(shuō)明，樣品OD值介于0.3～0.6之間，判為保護(hù)力低。免疫組加強(qiáng)免疫前的抗體合格率雖然達(dá)到了87.16%，但抗體水平較低的樣品占到55%，所以首免后間隔1個(gè)月進(jìn)行加強(qiáng)免疫十分必要。

圖1 抗體合格率變化趨勢(shì)

對(duì)照組在試驗(yàn)開(kāi)展9個(gè)月后，包蟲(chóng)病感染抗體陽(yáng)性率上升為7.93%，與前期所做流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)相符[4]。4個(gè)牧場(chǎng)對(duì)照組包蟲(chóng)病感染抗體陽(yáng)性率無(wú)顯著差異，說(shuō)明本研究做到了試驗(yàn)對(duì)象選定及分組的隨機(jī)性。

本研究結(jié)果表明羔羊免疫后可以獲得應(yīng)有的保護(hù)，但由于時(shí)間有限，未能形成程序化的免疫程序，這有待今后繼續(xù)研究。

4 結(jié)論

試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，該包蟲(chóng)病基因工程亞單位疫苗具有良好的安全性和免疫效果，按照疫苗說(shuō)明書(shū)中的免疫程序?qū)Ω嵫蛉哼M(jìn)行免疫，9個(gè)月后動(dòng)物個(gè)體仍維持較高的抗體水平。試驗(yàn)結(jié)果表明，該疫苗對(duì)羊包蟲(chóng)病具有較好保護(hù)力，可以在包蟲(chóng)病流行區(qū)推廣應(yīng)用。