◎ 楊穗珊，謝作蓉，林寶英

（海南省食品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，海南 ?？?570311）

副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）為革蘭氏陰性桿菌，是一種嗜鹽性細(xì)菌。含有該菌的食物可導(dǎo)致食物中毒，常見(jiàn)于魚(yú)、蝦、蟹、貝類(lèi)和海藻等海產(chǎn)品及鹽漬食品中，自1951年藤野等報(bào)告該菌以來(lái)，許多國(guó)家相繼有病例報(bào)道，至今已成為許多沿海國(guó)家重要食物中毒重要病原菌之一，在中國(guó)位居食源性疾患的前3位[1]。

能力驗(yàn)證是證明實(shí)驗(yàn)室能力的一種有效技術(shù)手段，是對(duì)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)能力和管理狀況的客觀的考核方法，是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制的有效補(bǔ)充方式。通過(guò)參加能力驗(yàn)證，對(duì)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制情況和實(shí)驗(yàn)人員水平技能進(jìn)行考核和判定，能最有效地消除偏差，提高檢驗(yàn)人員檢測(cè)水平，保證檢測(cè)數(shù)據(jù)達(dá)到檢驗(yàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[2]。海南省食品檢驗(yàn)檢測(cè)中心實(shí)驗(yàn)室于2018年5月參加了FAPAS組織的盲樣編號(hào)為M230d21的副溶血性弧菌能力驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1 材料

FAPAS發(fā)來(lái)的2個(gè)魚(yú)肉盲樣，編號(hào)分別為M230d21A和M230d21B。

1.2 主要培養(yǎng)基和試劑

3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂、3%氯化鈉堿性蛋白胨水、TCBS、3%氯化鈉三糖鐵瓊脂、氧化酶試紙、副溶血性弧菌生化鑒定盒，采購(gòu)自環(huán)凱微生物科技有限公司。弧菌顯色培養(yǎng)基，采購(gòu)于上海欣中生物公司。副溶血性弧菌核酸檢測(cè)試劑盒、細(xì)菌基因組DNA快速提取試劑盒，購(gòu)自廣州迪澳生物科技有限公司。GN細(xì)菌鑒定卡，采購(gòu)于生物梅里埃。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品來(lái)源

依據(jù)FAPAS作業(yè)指導(dǎo)書(shū)要求，在每個(gè)盲樣中加入20 mL 3% NaCl堿性蛋白胨水作為25 g待測(cè)原樣。

1.3.2 副溶血性弧菌檢驗(yàn)

按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 4789.7-2013《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 副溶血性弧菌檢驗(yàn)》[3]對(duì)兩個(gè)樣品進(jìn)行檢測(cè)。取GB 4789.7-2013步驟中3%氯化鈉堿性蛋白胨水，（36±1）℃培養(yǎng)8～18 h后的培養(yǎng)物進(jìn)行副溶血性弧菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增實(shí)驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

樣品在經(jīng)過(guò)增菌培養(yǎng)后轉(zhuǎn)種于TCBS培養(yǎng)基和弧菌顯色培養(yǎng)基，M230d21A不生長(zhǎng)。M230d21B在弧菌顯色培養(yǎng)基上有淡紫色典型可疑菌落生長(zhǎng)，TCBS培養(yǎng)基上呈現(xiàn)圓形表面光滑的綠色菌落，分別挑取3個(gè)可疑菌落進(jìn)行純化，并對(duì)純化后的可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色，染色結(jié)果顯色為革蘭氏陰性，無(wú)芽孢。

2.1 初步鑒定結(jié)果

氧化酶試驗(yàn)結(jié)果顯示為陽(yáng)性。3%氯化鈉三糖鐵瓊脂穿刺反應(yīng)顯示底層變黃不變黑，無(wú)氣泡，斜面顏色不變，有動(dòng)力。

2.2 確定鑒定結(jié)果

用梅里埃全自動(dòng)微生物生化鑒定儀VITEK2鑒定出的結(jié)果為副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus，Probability:99%）。用副溶血性弧菌生化試劑盒鑒定的結(jié)果見(jiàn)表1，鑒定結(jié)果為副溶血性弧菌。

表1 樣品M230d21B副溶血性弧菌干制生化試劑盒鑒定結(jié)果表

2個(gè)樣品增菌物的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增的結(jié)果見(jiàn)圖1，M230d21A號(hào)樣品未檢出副溶血性弧菌，M230d21B號(hào)樣品增菌物檢出副溶血性弧菌。

圖1 副溶血性弧菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增結(jié)果圖

3 討論

本次能力驗(yàn)證采用了常規(guī)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法和環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增的快速檢測(cè)方法，兩種方法檢出的結(jié)果一致，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法時(shí)間較長(zhǎng)操作較為繁瑣，人為影響因素也較大，生化鑒定易出現(xiàn)假陰性的結(jié)果[4]。環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法較為靈敏，時(shí)間短，節(jié)省人力，可考慮作為大型會(huì)議保障的快速篩查的檢測(cè)手段。海南島是國(guó)際旅游勝地，大型會(huì)議較多，海產(chǎn)品豐富，副溶血性弧菌作為一種海洋食源性致病菌，近年來(lái)已成為我國(guó)沿海地區(qū)的首要食源性致病菌。通過(guò)參加此次FAPAS的能力驗(yàn)證，不但提高了實(shí)驗(yàn)室市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，更進(jìn)一步加強(qiáng)了實(shí)驗(yàn)人員對(duì)副溶血性弧菌的檢驗(yàn)技能，促進(jìn)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)?zāi)芰Φ牟粩嗵嵘?，同時(shí)也是對(duì)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制程序的一種補(bǔ)充。