孟 莉 向紹杰 劉小虎 賈 冬 賈天柱

1.遼寧省中醫(yī)藥研究院，遼寧沈陽 110034；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧大連 116600

化胃舒顆粒由人參、藿香、黃芪、甘草等中藥組成，具有和胃降逆、益氣養(yǎng)陰之功效，常用于治療癌癥患者使用化療藥物后因損傷脾胃造成的不良反應(yīng)，如惡心、食欲不振、腹脹、嘔吐等癥[1-2]。研究表明，在腫瘤發(fā)生的同時也伴隨著機(jī)體的免疫力低下，中藥對腫瘤機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)作用是較為重要的抗癌機(jī)理之一，機(jī)體的免疫系統(tǒng)具有限制腫瘤細(xì)胞生長的能力，通過生物反應(yīng)調(diào)節(jié)改變宿主對腫瘤的生物反應(yīng)[3-5]。因此在治療腫瘤過程中，調(diào)動、增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫學(xué)機(jī)制在腫瘤的防治過程中占有重要的地位。本文旨在通過實驗對化胃舒顆粒在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能方面的作用進(jìn)行研究，為進(jìn)一步研究其作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 昆明種小鼠，SPF級，雄性，體重（20±2）g，購于遼寧長生生物技術(shù)有限公司，動物質(zhì)量合格證號：SCXK（遼）2010-0001。

1.1.2 試驗藥物 化胃舒顆粒（遼寧省中醫(yī)藥研究院藥學(xué)室，生產(chǎn)批號：112404），復(fù)方環(huán)磷酰胺片（天津金世制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字：H12021006，生產(chǎn)批號：2110501），復(fù)方天仙膠囊（通化白山藥業(yè)股份有限公司，Z10880008，生產(chǎn)批號：1108011）。

1.1.3 試劑 2，4-二硝基氯苯（DNCB）（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥材供應(yīng)站，批號：991223），丙酮（天津市百世化工有限公司，批號：20050405），小鼠CD4（CD4+）酶聯(lián)免疫檢測試劑盒（美國RD公司，批號：201210），小鼠 CD8（CD8+）酶聯(lián)免疫檢測試劑盒（美國RD公司，批號：201210）。

1.1.4 儀器 多功能酶標(biāo)儀，ELx800 光吸收酶標(biāo)儀，美國寶特（BIO-TEK）公司生產(chǎn)。YLS-Q4耳腫打耳器，山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院生產(chǎn)；FA2004分析天平，上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 動物分組和小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型的制作 取體重18～22g昆明種雄性小鼠84只，禁食不禁水17小時，隨機(jī)分7組，分別為空白對照組，模型對照組、復(fù)方環(huán)磷酰胺片（環(huán)磷酰胺52mg/kg）組、復(fù)方天仙膠囊（0.58g/kg）組、化胃舒顆粒低（7.90g生藥/kg）、中（15.80g生藥/kg）、高（31.60g生藥 /kg）組，每組12只。實驗前1日，在小鼠背部去毛，面積約4cm2，實驗當(dāng)日除空白對照組外，其余各組小鼠于去毛區(qū)涂以7% DNCB液100μL致敏1次[6-9]，空白對照組涂以基質(zhì)溶液（丙酮/大豆油=4：1)100μL?？瞻讓φ战M和模型對照組等容積蒸餾水灌胃，各組每天給藥1次，連續(xù)21d。給藥第5天后，除空白對照組外，于其余各組小鼠右耳內(nèi)側(cè)涂1%DNCB丙酮液10μL激發(fā)，每隔3天激發(fā)1次，左耳涂抹等量基質(zhì)，空白對照組左右耳均涂抹等量的基質(zhì)。分別于第4次激發(fā)后72h處死小鼠。

1.2.2 耳重量差的測定 激發(fā)后72h，將小鼠離斷頸椎處死，立即剪下雙側(cè)耳廓備檢。在左右耳同一部位打孔迅速用天平稱重，計算耳腫脹率。耳腫脹率（%）=（右耳重-左耳重）/左耳重×100%。

1.2.3 血液中CD4+和CD8+含量的測定 激發(fā)后72h將小鼠摘眼球取血，放置2h后，3000r離心5min，取上層血清，分別用酶標(biāo)儀測定小鼠血清中CD4+和CD8+的含量，比較各組間小鼠血清中CD4+和CD8+的含量差異的顯著性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

實驗數(shù)據(jù)采用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型耳腫脹的影響

與空白對照組比較，模型對照組小鼠耳腫脹率明顯高于空白對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），說明造模成功；化胃舒顆粒高劑量組（31.60g生藥/kg）小鼠耳腫脹率高于模型對照組，與模型對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 化胃舒顆粒對小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型耳腫脹的影響（x ± s，n=12）

2.2 對小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型CD4+、CD8+含量的影響

造模后各給藥組小鼠血清中CD4+含量均高于空白對照組和模型對照組，各給藥組小鼠血清中CD4+含量，與空白對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）?；甘骖w粒中劑量組（15.80生藥/kg）和高劑量組（31.60g生藥/kg）小鼠血清中CD4+的含量，與模型對照組比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜ 0.05）。

造模各給藥組小鼠血清中CD8+含量均高于空白對照組和模型對照組。與空白對照組相比，模型對照組可增加CD4+/CD8+比值，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），各給藥組除復(fù)方環(huán)磷酰胺片組可降低CD4+/CD8+比值外，其余各給藥組略有增加兩者比值的趨勢。見表2。

3 討論

2，4-二硝基氯苯（DNCB）致小鼠耳腫脹實驗是用于測定機(jī)體細(xì)胞免疫功能最常用的體內(nèi)試驗方法。其本質(zhì)屬于遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（第Ⅳ型）。當(dāng)機(jī)體被一些細(xì)菌（如結(jié)核分枝桿菌、布魯菌）、病毒、或真菌等顯性或隱性感染，或接觸一些小分子物質(zhì)、半抗原物質(zhì)，當(dāng)與體內(nèi)組織蛋白接合成為完全抗原時機(jī)體就會產(chǎn)生針對這些抗原物質(zhì)的特異性致敏淋巴細(xì)胞。當(dāng)有相應(yīng)抗原再次進(jìn)入機(jī)體，局部的致淋巴細(xì)胞會釋放多種淋巴因子，經(jīng)24～72h后導(dǎo)致以單核細(xì)胞浸潤為主的炎癥，表現(xiàn)為皮膚紅腫硬結(jié)，這種反應(yīng)稱為遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)[10-11]。由于小鼠耳朵比較薄，血管豐富但結(jié)構(gòu)致密，引起水腫后不能有效擴(kuò)散，于是在局部形成腫塊，通過雙耳重量差異反映水腫的程度，即炎癥嚴(yán)重程度。該反應(yīng)可作判斷機(jī)體細(xì)胞免疫功能的指標(biāo)之一。參與遲發(fā)型性超敏反應(yīng)的主要細(xì)胞之一為T細(xì)胞，而CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞是T細(xì)胞的兩個亞群[3]。CD4+T細(xì)胞也叫輔助性T細(xì)胞（Helper T cells，Th），具有協(xié)助體液免疫和細(xì)胞免疫的功能；CD8+T細(xì)胞也叫抑制性 T 細(xì)胞（Suppressor T cells，Ts），具有抑制細(xì)胞免疫及體液免疫的功能[12-15]；它們的含量能直接反應(yīng)人體的免疫功能，但是通常受人體生理情況不同而變化較大，而CD4+和CD8+的比值相對比較穩(wěn)定。

表2 化胃舒顆粒對小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型CD4+ 、CD8+含量的影響（x ± s，n=12）

化胃舒顆粒對DNCB致小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型的影響結(jié)果表明，遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型小鼠的耳腫脹度明顯高于空白對照組（P＜0.05），說明模型成立，小鼠服用化胃舒顆粒后耳腫脹度明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），說明化胃舒顆粒能增強(qiáng)DNCB致小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)。血液中的CD4+和CD8+T細(xì)胞的含量與對照組均有所提高，CD4+/CD8+比值僅略高于對照組，且體現(xiàn)出一定的劑量關(guān)系。提示化胃舒顆粒具有提高遲發(fā)型超敏反應(yīng)小鼠的機(jī)體免疫力的作用。