蔣玉蘭 ，張海華 ，潘俊嫻 ，呂楊俊 ，劉 均 ，朱躍進(jìn) ，張士康 **

（1.中華全國(guó)供銷(xiāo)合作總社杭州茶葉研究院，浙江 杭州 310016；2.浙江省茶資源跨界應(yīng)用技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 310016）

長(zhǎng)根菇（Oudemansiella radicata），又名長(zhǎng)根金線菌 （Collybia radicata），隸屬于真菌界 （Eumycetes） 擔(dān)子菌門(mén) （Basidiomycota） 層菌綱 （Hymenomycetes） 傘菌目 （Agaricales） 白蘑科 （Tricholoma taceae） 小奧德蘑屬（Oudemansiella），是珍稀的食（藥） 用真菌之一[1]。長(zhǎng)根菇作為1種木腐菌，其分解木質(zhì)纖維的能力很強(qiáng)，生產(chǎn)中栽培主料有雜木屑、棉籽殼、甘蔗渣、玉米芯等農(nóng)副產(chǎn)物，栽培輔料有麩皮、米糠、玉米粉等[2]，自然環(huán)境中常見(jiàn)于油茶樹(shù)林[3]。關(guān)于茶園栽培食用菌的研究，國(guó)內(nèi)外能查到的文獻(xiàn)資料非常有限，為數(shù)不多的研究主要集中在云南、福建、貴州的茶園和食用菌復(fù)合栽培技術(shù)方面，楊國(guó)育[4]等研究了在云南大葉種茶園套種香菇大山18號(hào)和黑木耳云耳1號(hào)，結(jié)果表明茶樹(shù)和食用菌復(fù)合種植模式可顯著提高茶園經(jīng)濟(jì)效益。茶園套種食用菌可以提高土壤肥力，改善土壤物理性狀，促進(jìn)茶樹(shù)生長(zhǎng)，提高茶葉品質(zhì)，防治水土流失，而且經(jīng)濟(jì)效益明顯高于純茶園[5]。

目前，茶產(chǎn)業(yè)中以名優(yōu)茶為主的產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)增值幾乎觸頂，但茶園修剪枝、茶葉加工以及精深加工副產(chǎn)物等茶資源卻未得到充分利用，食用菌產(chǎn)業(yè)受制于日益增高的林木資源和勞動(dòng)力價(jià)格，生產(chǎn)效益空間面臨緊縮。鑒于茶產(chǎn)業(yè)和食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展面臨的突出問(wèn)題，結(jié)合國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究，課題組設(shè)計(jì)“茶+食用菌”的生態(tài)循環(huán)課題，集成“茶園-食用菌-茶園”的資源循環(huán)技術(shù)，在以茶渣為基料栽培食用菌、菌種篩選[6]、茶枝替代部分木屑栽培長(zhǎng)根奧德蘑[7]等方面取得很多研究成果。本文以課題組前期工作為基礎(chǔ)，進(jìn)一步研究茶基料栽培長(zhǎng)根菇技術(shù)，以期為茶資源充分增值轉(zhuǎn)化，降低食用菌生產(chǎn)原料成本或增加原料可選擇性，提高茶農(nóng)、菇農(nóng)經(jīng)濟(jì)效益提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

長(zhǎng)根菇母種菌種由杭州華丹農(nóng)產(chǎn)品有限公司提供；木屑、棉籽殼、麩皮等原料均購(gòu)于杭州市下城區(qū)石橋鄉(xiāng)食用菌場(chǎng)菌種站；碳酸鈣、糖均為市售；安吉白葉1號(hào)茶樹(shù)修剪枝由浙江安吉宋茗白茶有限公司等提供；栽培基地由杭州華丹農(nóng)產(chǎn)品有限公司提供；PDA培養(yǎng)基等試劑購(gòu)自浙江美迪康貿(mào)易公司。切碎機(jī)（MQF-500型），購(gòu)自福建省古田縣順利食用菌機(jī)械制造廠；粉碎機(jī)（MQ-400型），購(gòu)自遵化市力豐機(jī)械廠；拌料機(jī)（WF-70型）、裝袋機(jī)（WP型）、常壓蒸汽滅菌鍋（WSG-320型），購(gòu)自福建省古田縣順利機(jī)械制造有限責(zé)任公司；接種箱（ZLK.2716型），購(gòu)自北京卓樂(lè)康科技有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 長(zhǎng)根菇栽培種制作

長(zhǎng)根菇母種（圖1所示），來(lái)源于組織分離培養(yǎng)的野生標(biāo)本，采用PDA試管培養(yǎng)基培養(yǎng)。配方：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂15 g～20 g，自來(lái)水1 000 mL，自然pH。培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，放在37℃恒溫箱培養(yǎng)24 h，無(wú)菌生長(zhǎng)的可使用。

長(zhǎng)根菇原種和栽培種（圖1所示），采用統(tǒng)一配方，具體為棉籽殼45%、木屑33%、麩皮20%、碳酸鈣1%和糖1%。具體操作如下：定量稱量配方中的主輔料，先將主料棉籽殼（預(yù)濕）和木屑充分混勻，加水?dāng)嚢?，再依次混入麩皮、糖和碳酸鈣，控制水分含量在65%左右，充分?jǐn)嚢杌旌?，使用裝袋機(jī)裝入聚乙烯菌種袋（直徑10 cm、高度25 cm，菌袋為圓柱體狀） 中，于常壓105℃蒸汽滅菌12 h，冷卻，接種PDA母種，在溫度25℃、相對(duì)濕度60%～70%、黑暗條件下培養(yǎng)，至菌絲完全覆蓋培養(yǎng)基表面熟化后即可使用。

1.2.2 茶樹(shù)修剪枝處理

圖1 長(zhǎng)根菇母種、原種和栽培種（從左至右）Fig.1 The mother culture,mother seed and cultivated species of Oudemansiella radicata(from left to right)

茶樹(shù)枝條按照茶園正常管理程序修剪，事前關(guān)注天氣情況，選擇1周或5 d內(nèi)天氣無(wú)雨為宜，枝條修剪長(zhǎng)度以茶園管理實(shí)際需要為準(zhǔn)，一次修枝，整齊疊放，用繩或布條單獨(dú)捆綁，每捆鮮重40 kg～50 kg，于陽(yáng)光下曝曬以實(shí)現(xiàn)快速干燥，干燥后保存于通風(fēng)、干燥的倉(cāng)庫(kù)內(nèi)待用，保存中忌雨水，并且倉(cāng)庫(kù)底部需墊放墊板以防茶枝霉變。茶枝經(jīng)自然曬干后進(jìn)行規(guī)格統(tǒng)一的粉碎處理，過(guò)孔徑5 mm～15 mm的篩網(wǎng)后所得茶枝粉碎料裝袋，并置于通風(fēng)干燥倉(cāng)庫(kù)中保存待用。

對(duì)茶枝進(jìn)行農(nóng)殘、主要危害重金屬（鉛、鎘、鉻、銅）等安全指標(biāo)評(píng)價(jià)（GB/T23204-2008），同時(shí)進(jìn)行粗蛋白 （GB/T6432-1994）、粗纖維 （GB/T8310-2013）、有機(jī)碳（重鉻酸鉀氧化容量法[8]）、有機(jī)氮（NY/T2017-2011）、木質(zhì)素（Klason法[9]）、茶多酚（GB/T 8313-2008） 和鋅[10]7個(gè)主要營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)測(cè)定，計(jì)算茶基料的C/N比值。

1.2.3 茶基料栽培長(zhǎng)根菇菌袋制作與接種

參照表1配方制作茶基料菌袋，共進(jìn)行5批次試驗(yàn)，各批次的每個(gè)配方分別制作菌袋800個(gè)，并于同一時(shí)間制袋、滅菌、接種，于同一地點(diǎn)相同環(huán)境下培養(yǎng)。根據(jù)生產(chǎn)季節(jié)安排菌袋制作，先將棉籽殼于自然溫度下浸泡預(yù)濕8 h，然后依次混入木屑、茶枝粉碎料、麩皮、糖和碳酸鈣，加水后充分?jǐn)嚢柚梁?5%、pH 6.5左右，裝料至聚乙烯菌袋（直徑17 cm、高度34 cm） 中，控制每袋濕料約1.0 kg左右，袋裝完成后在常壓105℃蒸汽滅菌12 h，冷卻至自然溫度后，在潔凈接種室內(nèi)接種等量長(zhǎng)根菇栽培種。

表1 茶基料栽培長(zhǎng)根菇的菌袋配方Tab.1 Formulation of fungi bags for Oudemansiella radicata grown on culture with tea by-products

1.2.4 發(fā)菌管理

接種結(jié)束后轉(zhuǎn)移至發(fā)菌室發(fā)菌，控制發(fā)菌室條件為溫度20℃～25℃、空氣相對(duì)濕度60%～70%、暗光。7 d～10 d后翻堆檢查1次菌袋，如發(fā)現(xiàn)雜菌污染，及時(shí)將其清理，同時(shí)將菌袋上下位置互換。發(fā)菌15 d以后菌絲生長(zhǎng)速度加快，呼吸旺盛，可適當(dāng)松動(dòng)袋口套圈棉塞以增加供氧。40 d～50 d菌絲長(zhǎng)滿全袋，再經(jīng)25 d后熟期，在室外最低氣溫達(dá)到15℃以上時(shí)，可進(jìn)行出菇管理。在發(fā)菌室發(fā)菌期間，隨時(shí)觀察并記錄菌絲發(fā)育情況，待菌絲開(kāi)始萌發(fā)后，從各配方菌袋中隨機(jī)挑選菌絲潔白、生長(zhǎng)良好的菌袋，記錄菌絲生長(zhǎng)，待菌絲萌發(fā)至菌袋環(huán)頸處時(shí)開(kāi)始劃線，并每隔5 d劃線1次，同時(shí)記錄菌絲萌發(fā)、菌絲長(zhǎng)滿1/2菌袋所需時(shí)間，以及菌絲長(zhǎng)滿菌袋所需時(shí)間。

1.2.5 出菇管理和生物學(xué)效率

待菌絲長(zhǎng)滿菌袋后進(jìn)行覆土出菇，將菌袋轉(zhuǎn)移至基地大棚內(nèi)進(jìn)行室內(nèi)出菇管理，大棚室內(nèi)覆土出菇參數(shù)：溝深30 cm，將脫袋菌袋立于溝中，用土填埋，并覆土厚3 cm～5 cm，調(diào)節(jié)大棚內(nèi)的溫度、濕度以及光照等條件，并維持土壤濕度在80%以上，隨時(shí)記錄大棚內(nèi)溫度、濕度等條件和整個(gè)出菇期的產(chǎn)量，計(jì)算生物學(xué)效率。同時(shí)記錄因雜菌污染、破袋等引起的淘汰菌袋數(shù)量，計(jì)算淘汰率。生物學(xué)效率為食用菌鮮重除以培養(yǎng)基料干重乘以100%。菌袋淘汰率（P） 公式為：

式中：n1表示破袋菌袋、污染雜菌菌袋數(shù)量；n表示試驗(yàn)菌袋總數(shù)。

1.2.6 茶基料栽培長(zhǎng)根菇穩(wěn)定性試驗(yàn)

確定適宜的茶基料配比后，進(jìn)行2個(gè)批次的小試生產(chǎn)以確定配方的生產(chǎn)穩(wěn)定性，每批次制作菌袋10 000個(gè)，采用表1中T0配方作為對(duì)照，菌袋制作、接種、發(fā)菌和覆土出菇方法同上，其中滅菌條件調(diào)整為常壓115℃蒸汽滅菌15 h。

對(duì)采收的長(zhǎng)根菇子實(shí)體營(yíng)養(yǎng)成分和主要農(nóng)殘進(jìn)行分析，具體參照檢測(cè)方法為：農(nóng)殘（毒死蟑、樂(lè)果、敵敵畏、百菌清）測(cè)定參照NY/T761-2008；粗纖維含量測(cè)定參照GB/T5009.10-2013；粗蛋白含量測(cè)定參照GB/T5009.5-2013；總糖含量測(cè)定參照GB/T15672-2009；鎘含量測(cè)定參照 GB/T5009.15-2014；總灰分含量測(cè)定參照GB/T12532-2008；水溶性灰分含量測(cè)定參照GB/T5009.4-2016；鐵含量測(cè)定參照GB5009.90-2017； 鋅 含 量 測(cè) 定 參 照 GB5009.14-2017；硒含量測(cè)定參照GB5009.93-2017；鈣含量測(cè)定參照 GB5009.92-2017。

1.3 數(shù)據(jù)處理

同一試驗(yàn)的觀察記錄結(jié)果，以不同批次作為重復(fù)，單一批次作為1個(gè)樣本，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，以樣本平均值表示。同一樣品的化學(xué)檢測(cè)均重復(fù)3次，取平均值作為結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 茶樹(shù)修剪枝安全和營(yíng)養(yǎng)成分分析結(jié)果

茶樹(shù)修剪枝安全和營(yíng)養(yǎng)成分分析結(jié)果見(jiàn)表2。

由表2可知，茶枝農(nóng)殘和主要危害性重金屬檢測(cè)結(jié)果均符合《NYT1935-2010食用菌栽培基質(zhì)質(zhì)量安全要求》，因此可作為食用菌栽培基質(zhì)。

根據(jù)長(zhǎng)根菇生長(zhǎng)對(duì)有機(jī)碳、有機(jī)氮、粗纖維、木質(zhì)素等主要營(yíng)養(yǎng)需求，并且考慮茶多酚的抑菌可能性，茶枝相關(guān)成分的測(cè)定結(jié)果如表2所示。茶枝中粗纖維和粗蛋白含量均較高，其中木質(zhì)素含量占粗纖維含量的37%，說(shuō)明茶枝的營(yíng)養(yǎng)具有適宜長(zhǎng)根菇生長(zhǎng)的可能性；茶多酚含量較低，不足2%，且現(xiàn)有研究表明茶多酚主要作用是抑制細(xì)菌生長(zhǎng)[11]，推論茶枝中的茶多酚對(duì)長(zhǎng)根菇菌種的生長(zhǎng)負(fù)面影響可能較??；茶枝中含有鋅27.3 mg·kg-1，而人體吸收利用鋅后具有增強(qiáng)智力的功效，而此部分鋅能夠被長(zhǎng)根菇吸收利用并貯藏；茶枝C/N為14.58，略低于長(zhǎng)根菇生長(zhǎng)所需的約為20的C/N，因此需通過(guò)使用其他高C/N的原輔料進(jìn)行調(diào)配。

表2 茶枝農(nóng)殘、主要重金屬和營(yíng)養(yǎng)成分檢測(cè)結(jié)果（干基）Tab.2 Detection results of pesticide residues,major heavy metals and nutritional ingredients of tea branches（dry base）

2.2 不同配方茶基料對(duì)長(zhǎng)根菇菌絲發(fā)育的影響

采用不同配方茶基料栽培長(zhǎng)根菇，進(jìn)行室內(nèi)發(fā)菌管理，長(zhǎng)根菇發(fā)菌及菌絲生長(zhǎng)情況如圖2所示。不同配方的茶基料菌袋對(duì)菌絲發(fā)育的影響見(jiàn)圖3。

圖2 室內(nèi)發(fā)菌和菌絲生長(zhǎng)情況Fig.2 Conditions of development and growth of mycelium indoor

圖3 茶基料菌袋不同配方對(duì)菌絲發(fā)育的影響Fig.3 Effects of different formulations of fungi bags with tea byproducts on mycelium development

從圖3中可以看出，T0、T1、T2、T3、T4配方菌絲萌發(fā)用時(shí)基本一致，為3 d；T0、T1和T2配方菌絲長(zhǎng)滿菌袋頂面用時(shí)一致，為7 d，T3和T4配方菌絲長(zhǎng)滿菌袋頂面比T0配方晚2 d～3 d；T1、T2、T3、T4配方菌絲長(zhǎng)滿1/2菌袋用時(shí)均比對(duì)照配方T0長(zhǎng)；T1、T2、T3、T4配方菌絲滿袋用時(shí)比T0配方遲。對(duì)發(fā)菌過(guò)程整體觀察發(fā)現(xiàn)，與T0配方相比，T1配方和T2配方菌絲生長(zhǎng)情況與T0配方基本相同，菌絲生長(zhǎng)速度快，菌絲粗壯、濃密、潔白；T3、T4配方菌絲生長(zhǎng)較慢，菌絲形態(tài)與對(duì)照組基本相同。覆土15 d左右出現(xiàn)咖啡色菇蕾，見(jiàn)圖4。

圖4 長(zhǎng)根菇子實(shí)體Fig.4 Fruiting bodies of Oudemansiella radicata

從圖4可以看出，子實(shí)體生長(zhǎng)發(fā)育良好，每潮采收后及時(shí)清理菇體殘留，用土補(bǔ)平，休養(yǎng)3 d后增濕促進(jìn)下潮菇形成。

2.3 長(zhǎng)根菇生物學(xué)效率及品質(zhì)分析

采用室內(nèi)出菇的方式，茶枝對(duì)長(zhǎng)根菇生物學(xué)效率的影響見(jiàn)表3。

表3 茶枝對(duì)長(zhǎng)根菇生物學(xué)效率的影響Tab.3 Effect of tea branches on the biological efficiency of Oudemansiella radicata

從表3中可以看出，與對(duì)照配方T0相比，T1、T2、T3配方生物學(xué)效率均比對(duì)照組有所提高，T2配方生物學(xué)效率最高達(dá)83%，T4配方生物學(xué)效率較低，為51%。同時(shí)記錄因雜菌污染、破袋等引起的淘汰袋數(shù)量，計(jì)算淘汰率。生產(chǎn)小試中長(zhǎng)根菇菌絲生長(zhǎng)和出菇情況見(jiàn)表4。

由表4可以看出，T2配方無(wú)論生物學(xué)效率還是淘汰率方面均較T0配方有優(yōu)勢(shì)，在菌絲長(zhǎng)勢(shì)和生長(zhǎng)時(shí)間上相當(dāng)，且2批次試驗(yàn)結(jié)果差異不大，說(shuō)明T2配方可作為生產(chǎn)配方備選。對(duì)長(zhǎng)根菇子實(shí)體營(yíng)養(yǎng)成分及主要農(nóng)殘安全指標(biāo)進(jìn)行了分析，結(jié)果見(jiàn)表5。

表4 生產(chǎn)小試中長(zhǎng)根菇菌絲生長(zhǎng)和出菇情況Tab.4 The fruiting and growth of Oudemansiella radicata mycelium during production test

表5 長(zhǎng)根菇子實(shí)體營(yíng)養(yǎng)成分及主要農(nóng)殘情況（干基）Tab.5 Nutritional ingredients of Oudemansiella radicata fruiting body and its major agricultural residues(dry basis)

從表5結(jié)果來(lái)看，T2配方和T0配方獲得的長(zhǎng)根菇子實(shí)體的主要農(nóng)殘（毒死蟑、樂(lè)果、敵敵畏、百菌清）均在方法檢出限以內(nèi)，符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求，再次驗(yàn)證了栽培基料的質(zhì)量安全性。從營(yíng)養(yǎng)成分分析結(jié)果看，粗蛋白、粗纖維和總灰分以T2配方高，總糖以T0配方高，這些營(yíng)養(yǎng)成分的差異推測(cè)主要是因?yàn)榛喜町愃?，進(jìn)一步推測(cè)茶基料的應(yīng)用可以影響長(zhǎng)根菇子實(shí)體的營(yíng)養(yǎng)組分結(jié)構(gòu)。

3 小結(jié)

通過(guò)測(cè)定茶枝農(nóng)殘和主要危害性重金屬安全指標(biāo)，為茶基料作為長(zhǎng)根菇栽培基質(zhì)輔料把好安全第一關(guān)。進(jìn)一步分析茶枝營(yíng)養(yǎng)成分，較高含量的粗纖維和粗蛋白為茶基料栽培長(zhǎng)根菇提供了可能性。根據(jù)其他學(xué)者研究結(jié)果表明，本研究所選用的茶枝中茶多酚含量不足2%，可能不會(huì)抑制長(zhǎng)根菇菌絲生長(zhǎng)?？紤]到茶基料菌袋中的碳源、氮源和礦物質(zhì)元素對(duì)長(zhǎng)根菇菌絲生長(zhǎng)及發(fā)育的影響，通過(guò)調(diào)整棉籽殼、麩皮、糖及碳酸鈣等原輔料，使得菌袋中C/N約為20，滿足長(zhǎng)根菇的營(yíng)養(yǎng)需求。以同一試驗(yàn)的不同批次作為重復(fù)，觀察記錄菌絲生長(zhǎng)和發(fā)育情況，結(jié)合長(zhǎng)根菇的生物學(xué)效率和菌袋淘汰率，確定T2配方即茶枝替代率10%為最佳長(zhǎng)根菇生長(zhǎng)的茶基料配方。進(jìn)行了2批次、每批次10 000袋茶基料栽培長(zhǎng)根菇穩(wěn)定性生產(chǎn)試驗(yàn)，并對(duì)長(zhǎng)根菇子實(shí)體進(jìn)行了營(yíng)養(yǎng)成分和主要農(nóng)殘安全指標(biāo)分析，進(jìn)一步推測(cè)茶基料的應(yīng)用會(huì)影響長(zhǎng)根菇子實(shí)體的營(yíng)養(yǎng)組分結(jié)構(gòu)。雖然本研究得出茶園中茶和長(zhǎng)根菇生態(tài)循環(huán)栽培模式具有可行性，但因農(nóng)業(yè)生產(chǎn)季節(jié)性關(guān)系，技術(shù)熟化尚待后續(xù)大量工作的支撐，產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用任重道遠(yuǎn)，有待繼續(xù)努力。