李新正，肖曙光，黃安群，陳理盾，宋玉萍，張桂枝，黃炎坤

(河南牧業(yè)經(jīng)濟學院 動物科技學院，河南 鄭州 450046)

禽曲霉菌病是一種嚴重危害家禽生產(chǎn)的真菌性疾病[1]，近年來因免疫抑制性疾病頻發(fā)以及臨床中大量使用抗生素引起曲霉菌感染頻發(fā)，導致家禽死亡率增加。同時發(fā)病后機體產(chǎn)生霉菌毒素，引起免疫器官萎縮，免疫細胞數(shù)量減少，使機體抵抗體力下降，產(chǎn)生免疫失敗[2]，易感其他疾病，且引起肝臟、腎臟機能受損，影響生長發(fā)育，降低養(yǎng)殖效益。曲霉菌病主要病原有煙曲霉、黃曲霉和黑曲霉等[3-4]。雞感染曲霉菌病后，因霉菌的增殖產(chǎn)生大量毒素，如黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮毒素、嘔吐毒素、T-2毒素及付馬毒素等[5]，這些毒素引起肝實質細胞壞死，變性，膽管上皮細胞及纖維細胞增生，形成再生結節(jié)和脂肪肝，剖檢可見肝臟腫脹，黃染，呈斑駁狀，質脆易碎。并能引起腎臟腫脹，尿酸鹽沉積等，同時肝功能和腎功能出現(xiàn)異常，如血液中谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、谷氨酰轉肽酶、堿性磷酸酶活性降低；球蛋白、白蛋白、非蛋白氮、肝糖原降低，尿素尿酸含量增加。因此研究曲霉菌感染對血液理化指標影響，對判斷該病感染程度和該病的防控具有十分重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 14日齡健康海蘭褐蛋公雞80只，由鄭州某種雞場提供；新城疫低毒力活疫苗(IV系)購自哈藥集團生物疫苗有限有限公司(生產(chǎn)批號201659，生產(chǎn)日期：20160921)；曲霉菌孢子，由本實驗室從病禽體內分離培養(yǎng)并鑒定為煙曲霉菌，培養(yǎng)制成孢子懸液。

1.1.2 儀器設備 Monarch全自動生化分析儀(美國實驗儀器公司)，Coulter JT-IR血細胞分析儀。

1.2 試驗方法

1.2.1 煙曲霉菌孢子懸液制備 用金屬接種環(huán)挑取煙曲霉菌接種于沙氏瓊脂培養(yǎng)基上，37 ℃培養(yǎng)3 d，30 ℃培養(yǎng)3 d，用10 mL含有0.1%吐溫的PBS液沖洗瓊脂表面并收集孢子懸液，用8層無菌紗布過濾，將過濾后的懸液用含0.1%吐溫的PBS液清洗2次，然后轉入離心管中，3 500 r/min離心15 min，去除上清液，在顯微鏡下用血細胞計數(shù)板計數(shù)，調整孢子懸液濃度為1.0×108/mL。

1.2.2 試驗分組 將14日齡80只海蘭褐商品代公雛雞，隨機分成2組，試驗組從14日齡開始用制好的霉菌孢子懸液嗉囊注射1 mL，1次/d，連續(xù)注射3 d，接種后正常飼養(yǎng)管理，每日觀察精神狀態(tài)、采食、糞便和有無呼吸困難等癥狀并進行記錄。對照組不接種。兩組的飼養(yǎng)管理措施和條件、衛(wèi)生防疫措施均相同。

1.2.3 飼養(yǎng)管理與免疫 采用網(wǎng)上平養(yǎng)方式，前三周舍溫控制在32～35 ℃，雞舍內濕度60%～65%。雞自由采食，自由飲水，正常免疫，對照組和試驗組雞1日齡注射馬立克氏疫苗，7日齡新城疫疫苗點眼滴鼻，14日齡傳染性法氏囊疫苗飲水。按雞場的管理程序進行飼養(yǎng)管理。

1.2.4 稱重與采血 21日齡從試驗組選擇典型臨床癥狀雞和對照組各抽取10只雞，空腹稱重，心臟采血5 mL置于含抗凝劑采血管和不含抗凝劑采血管中。凝血管待凝血后，3 000 r/min離心10 min，取上清液于-20 ℃保存，抗凝血放入4 ℃冰箱中待檢。

1.2.5 測定項目 血液生理指標項目：紅細胞總數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HGB)、白細胞總數(shù)(WBC)、中間細胞數(shù)量(MID)、淋巴細胞數(shù)量(LYM)、粒細胞數(shù)量(GRA)、淋巴細胞比率(LR)、中間細胞比率(MXD)、單核細胞比率和血小板數(shù)量(PLT)。

血液生化指標項目：總膽紅素(TBIL)、間接膽紅素(IBIL)、直接膽紅素(DB)、谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、谷氨酰轉肽酶(r-GT)和尿酸(UA)。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)用SPSS15.0軟件進行t檢驗，數(shù)據(jù)均采用Mean±SD表示。

2 結果與分析

2.1 曲霉菌感染對雞只生長速度的影響

由表1可知，兩組間差異極顯著(P<0.01)，試驗組比對照組雞體重減少18%，說明曲霉菌感染影響雞生長發(fā)育。

表1 曲霉菌感染對雞只生長速度的影響Table 1 The influence of aspergillus infection on chicken growth

注:肩標小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。下同。
Note: Values with different lowercase superscripts show significant difference, different capital superscripts show extremely significant difference.The same below.

2.2 曲霉菌感染對血液生理指標的影響

由表2可知，試驗組白細胞總數(shù)、淋巴細胞數(shù)明顯高于對照組，且差異顯著(P<0.05)；紅細胞、血紅蛋白濃度明顯低于對照組且差異顯著(P<0.05)；試驗組淋巴細胞比率、中間細胞比率、中間細胞、粒細胞、血小板含量明顯高于對照組，且差異極顯著(P<0.01)；而血紅蛋白含量明顯低于對照組，且差異極顯著(P<0.01)。

表2 曲霉菌感染對血液生理指標的影響Table 2 The influence of aspergillus infection on blood physiological indexes

2.3 曲霉菌感染對血液生化指標指數(shù)的影響

由表3可知，試驗組谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、堿性磷酸酶、氨酰轉肽酶、總膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素及尿酸指標均高于對照組，差異顯著(P<0.05)；而血清中總蛋白、白蛋白、球蛋白數(shù)量低于對照組且差異顯著(P<0.05)。

表3 曲霉菌感染對血液生化指標指數(shù)的影響Table 3 The influence of aspergillus infection on blood biochemical indexes

3 討 論

曲霉菌感染雛雞，引起急性肺水腫且產(chǎn)生煙曲霉毒素，使體溫升高，采食量下降，精神委頓、嗜睡，呼吸困難，拉稀等癥狀[6]，除導致死亡率增高外，嚴重影響到雛雞生長發(fā)育。試驗組體重比對照組低18%，且差異顯著，說明曲霉菌感染，直接影響雛雞生長發(fā)育。

曲霉菌感染可引起發(fā)熱，采食量減少，羽毛松亂，拉稀，引起貧血[7]。試驗中試驗組紅細胞、血紅蛋白明顯低于對照組，說明曲霉菌感染引起貧血，這與試驗中雛雞感染曲霉菌體重差異相一致。

肝臟是家禽最大的腺體，是最重要的消化器官和機體新陳代謝的樞紐，肝臟的生理功能包括解毒功能、代謝功能、造血功能、分泌功能和免疫功能等[8]，實驗表明，曲霉菌感染引起雛雞血清中谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、堿性磷酸酶、氨酰轉肽酶、總膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素濃度增高，總蛋白、球蛋白、白蛋白明顯降低，說明曲霉菌感染可引起肝臟損傷和壞死，這與臨床曲霉病病例剖檢肝臟腫脹、出血、顏色發(fā)黃相一致。

腎臟是動物的主要泌尿器官和排泄器官[9]，曲霉菌感染可引起腎臟腫脹，尿酸鹽在腎臟排泄受阻，形成花斑腎，其中血清中尿酸含量是反映腎功能的主要指標[6]。試驗表明試驗組尿酸明顯增高，說明曲霉菌感染對腎臟損傷嚴重。