朱榮生，王懷中，齊 波，胡順營，孫 潔，孫守禮，王建才，位 賓，呼紅梅*

(1.山東省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，山東 濟南 250100；2.山東省畜禽疫病防治與繁育重點實驗室，山東 濟南 250100；3.青島農(nóng)業(yè)大學動物科學技術(shù)學院，山東 青島 266109；4.山東冠縣畜牧局，山東 冠縣 252500；5.山東省沂南縣畜牧技術(shù)推廣站，山東 沂南 221760；6.濟南海華生物科技有限公司，山東 濟南 250108)

仔豬斷奶應(yīng)是一個平緩的、循序漸進的過程，一般應(yīng)超過17周[1]。隨著生豬養(yǎng)殖集約化、規(guī)?；膶嵤?，將仔豬斷奶時間提至7～28日齡[2]。早期斷奶導致仔豬的生活環(huán)境與食物來源短期內(nèi)發(fā)生劇烈變化，引起的應(yīng)激可使腸屏障功能受損，腸道通透性增加，腸道中細菌易位加劇，增加腸道中過敏原進入機體的機率[3]。大約10%的仔豬在斷奶后48 h幾乎不采食，其他大多數(shù)仔豬采食量也很低[3]。斷奶后采食量降低使得仔豬小腸絨毛萎縮[4-6]，對傳染性疾病的易感率增加[4]。

腐植酸是自然界中廣泛存在的大分子有機物質(zhì)，可增強動物腸胃消化功能。腐植酸可吸附腸道炎性物質(zhì)和有毒物質(zhì)，對腸道黏膜有收斂作用。腐植酸含有的醌基參與機體的氧化還原過程，促進細胞增殖，加速生長[7]。研究表明，飼糧中添加1%的腐殖酸鈉對生長育肥豬的促生長效果與抗生素相當[8]。腐殖酸鈉發(fā)酵飼料可提高仔豬日增重，降低腹瀉率，而且明顯減少糞便中硫化氫的氣味[9]。核苷酸是一種具有生物活性的物質(zhì)，在代謝、結(jié)構(gòu)和監(jiān)測等方面發(fā)揮重要作用，在免疫系統(tǒng)功能維持和降低氧化應(yīng)激方面也發(fā)揮著重要作用[10-11]。在快速生長和應(yīng)激期間補充核苷酸對仔豬生長性能和健康有益[12]。斷奶豬飼糧中添加核苷酸可緩解斷奶應(yīng)激，增加采食量[13-14]，飼糧中添加0.5～2.0 g/kg核苷酸可使日增重、日采食量顯著增加3.14%～11.07%，5.58%～15.50%，料重比顯著降低3.16%～4.24%[15]，腹瀉率由15.63%降至1.53%，死亡率由4.69%降至1.56%[14]。腐殖酸鈉與核苷酸是兩種綠色飼料添加劑，利于緩解斷奶應(yīng)激，增加采食量，促進養(yǎng)分的消化吸收，同時也是潛在的抗生素替代品。目前多數(shù)研究集中在單一物質(zhì)對家畜生長性能、免疫水平、腹瀉率的影響，而對于腸組織形態(tài)的研究未見報道。因此，本試驗旨在研究飼糧中添加腐殖酸鈉和核苷酸對斷奶仔豬生長性能、血液生化指標、腸道形態(tài)發(fā)育和腸道消化代謝酶活性的影響，為二者在斷奶仔豬營養(yǎng)的應(yīng)用研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗豬的選擇與飼養(yǎng)

試驗在菏澤某原種豬繁育有限公司進行。選擇出生日期相近，體重為8.4 kg左右的健康杜洛克×長白×大約克(DLY)三元21日齡斷奶仔豬160頭，隨機分為2組，每組80頭，每組10個重復(fù)，每個重復(fù)8頭。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗豬在基礎(chǔ)飼糧中添加3.0 kg/t腐殖酸鈉和1.5 kg/t核苷酸。預(yù)試期5 d，試驗期38 d，試驗期間自由采食、飲水，按照豬場常規(guī)管理規(guī)程和正常免疫程序進行?；A(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)成分見表1。

1.2 試驗材料

腐殖酸鈉和核苷酸均由濟南某生物科技有限公司提供。腐殖酸鈉、核苷酸純度均為50%以上，其余部分均為載體。

1.3 檢測指標

1.3.1 生長性能指標 試驗第1天和第38天晨飼前逐頭稱重。在試驗期間，每天9:00～10:00、17:00～18:00觀察仔豬排糞情況，記錄腹瀉個體。以個體為單位記錄豬只死亡和淘汰情況，發(fā)現(xiàn)死淘豬及時結(jié)料并稱重。根據(jù)每日記錄的給料量、剩余料、損耗料，以重復(fù)為單位計算平均日采食量、料重比及腹瀉率，同時計算個體日增重。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis)

注：①預(yù)混料為每千克飼糧提供：VA 8200 IU，VD32100 IU，VE 30.5 mg，VK32.8 mg，VB25.2 mg，VB62.1 mg，VB120.11 mg，生物素 0.10 mg，葉酸0.96 mg，D-泛酸 17.2 mg，煙酸 20.1 mg，氯化膽堿 702 mg，抗氧化劑100 mg，F(xiàn)e (硫酸亞鐵) 820 mg，I (碘化鉀) 0.85 mg，Ca 0.86%， AP 0.35%，Lys 0.07%。②代謝能為計算值，其余為實測值。
Note: ①The premix provided the following per kg of diets：VA 8 200 IU，VD32 100 IU，VE 30.5 mg，VK32.8 mg，VB25.2 mg，VB62.1 mg，VB120.11 mg，biotin 0.10 mg，folic acid 0.96 mg，D-pantothenic acid 17.2 mg，nicotinic acid 20.1 mg，choline chloride702 mg，antioxidant 100 mg，F(xiàn)e (as ferrous sulfate) 820 mg，I (as potassium iodide) 0.85 mg，Ca 0.86%， AP 0.35%，Lys 0.07%.②ME was calculated value and others were measured.

1.3.2 血液生化指標 于試驗第38 d晨飼前試驗豬空腹稱重后，逐頭前腔靜脈采血10 mL，放入非抗凝離心管中靜置15 min，3 000 r/min離心10 min分離血清，至于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

使用日立7180生化分析儀測定血清中尿素氮、葡萄糖、總膽固醇、總蛋白、球蛋白、磷酸肌酸激酶、二胺氧化酶和IgA、IgG、IgM含量。試劑盒購自四川邁克生物科技股份有限公司，操作步驟按照試劑盒說明書進行。

1.3.3 腸組織形態(tài)學檢測及黏膜相關(guān)免疫細胞統(tǒng)計 試驗第38 d晨飼前試驗豬空腹稱重后，每組隨機選擇3頭進行屠宰，取十二指腸、空腸、回腸制作石蠟切片，蘇木精-伊紅染色(HE染色)、阿利新藍-高碘酸雪夫氏(AB-PAS)染色、甲苯胺藍染色后，于10×20倍顯微鏡下拍照，應(yīng)用Image-Pro Plus 6.0軟件測量腸絨毛長度、隱窩深度、黏膜厚度、腸壁厚度，統(tǒng)計杯狀細胞、柱狀細胞、淋巴細胞、肥大細胞數(shù)。具體檢測方法是：(1)取每根腸管橫斷面，統(tǒng)計觀察5根最長且排列整齊的絨毛，統(tǒng)計單位面積柱狀細胞數(shù)量和分布；(2)取每根腸管橫斷面，統(tǒng)計觀察5根最長且排列整齊的絨毛，計數(shù)每100個腸黏膜上皮柱狀細胞間淋巴細胞、杯狀細胞數(shù)量和分布；(3)統(tǒng)計觀察每根腸管橫斷面的腸壁全層，包括黏膜及黏膜下層、肌層及漿膜層中每100個柱狀細胞間的肥大細胞、淋巴細胞數(shù)量和分布；

1.3.4 空腸食糜消化酶活性檢測 試驗第38 d晨飼前試驗豬空腹稱重后，屠宰后取空腸食糜，采用比色法測定脂肪酶、胰蛋白酶、淀粉酶、麥芽糖酶、乳糖酶、蔗糖酶活性。試劑盒購自南京建成生物工程研究所，操作步驟按照說明書進行。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 19.0軟件的one-way ANOVA程序進行分析，P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著，結(jié)果均以“平均值±標準誤(SEM)”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 腐殖酸鈉和核苷酸對仔豬生長性能的影響

由表2可見，組間試驗豬初始體重相近，無顯著差異(P>0.05)。38 d試驗期結(jié)束后試驗組結(jié)束體重略高于對照組，增加2.82%(P>0.05)。與對照組相比，試驗組日采食量和日增重分別增加3.01%(P>0.05)和7.36%(P>0.05)，料重比降低1.71%(P>0.05)，腹瀉率顯著減少55.85%(P<0.05)。由此可見，飼糧中添加腐植酸鈉和核苷酸可增加仔豬日采食量、日增重，降低料重比，顯著降低腹瀉率。

2.2 腐植酸鈉和核苷酸對仔豬血清生化指標的影響

由表3可見，與對照組相比，試驗組仔豬血清中二胺氧化酶和磷酸肌酸激酶活性分別顯著降低31.91%和32.16%(P<0.05)。試驗組仔豬血清中尿素氮、葡萄糖含量雖然與對照組間差異不顯著，但是略有降低(P>0.05)。試驗組仔豬血清中總蛋白、球蛋白、IgA、IgG、IgM含量與對照組間差異不顯著(P>0.05)，但是球蛋白含量提高5.59%。由此可見，飼糧中添加腐植酸鈉和核苷酸可顯著顯著降低仔豬血清中二胺氧化酶和磷酸肌酸激酶活性，降低腸組織通透性。

表2 飼糧中添加腐植酸鈉和核苷酸對豬生長性能的影響(n=80)Table 2 Effect of adding sodium humate and nucleotides in diet on growth performance of weaning piglets

注:同行數(shù)據(jù)肩標小寫字母不同者，表示差異顯著(P<0.05)。
Note: Values with different small letter superscripts in the same row mean significant difference (P<0.05).The same below.

表3 飼糧中添加腐植酸鈉和核苷酸對仔豬血液生化指標的影響(n=80)Table 3 Effect of adding sodium humate and nucleotides in diet on serum biochemical indices of weaning piglets

2.3 腐植酸鈉和核苷酸對仔豬腸組織發(fā)育形態(tài)的影響

由表4可見，十二指腸、空腸、回腸絨毛高度依次降低，空腸絨毛高度比十二指腸減少10.65%，回腸絨毛高度比十二指腸減少24.93%，空腸和回腸的隱窩深度大于十二指腸，V/C(絨毛高度/隱窩深度)比值的變化趨勢與絨毛高度一致。與對照組相比，試驗組仔豬十二指腸、空腸、回腸絨毛高度增加5.49%～7.85%(P>0.05)，隱窩深降低8.61%～11.10%(P>0.05)，V/C比值提高17.03%～21.32%(P>0.05)。十二指腸、空腸、回腸黏膜厚度呈遞減趨勢，空腸腸壁最薄，其次是回腸，十二指腸最厚。與對照組相比，試驗組仔豬十二指腸、空腸、回腸腸壁厚度增加8.52%～21.76%(P>0.05)，黏膜厚度增加5.14%～11.33%(P>0.05)。

試驗組仔豬十二指腸、空腸、回腸杯狀細胞、柱狀細胞、淋巴細胞、肥大細胞數(shù)量均高于對照組，從十二指腸至回腸，杯狀細胞和肥大細胞逐漸增多，淋巴細胞逐漸減少。與對照組相比，試驗組仔豬十二指腸杯狀細胞、柱狀細胞、淋巴細胞和肥大細胞數(shù)增加0.47%～ 23.11%(P>0.05)。試驗組仔豬空腸淋巴細胞顯著增加32.59%(P<0.05)。試驗組仔豬回腸杯狀細胞、柱狀細胞、淋巴細胞和肥大細胞數(shù)增加3.42%～25.45%(P>0.05)。

表4 飼糧中添加腐植酸鈉和核苷酸對仔豬腸組織形態(tài)的影響(n=3)Table 4 Effect of adding sodium humate and nucleotides in diet on intestinal mucosal morphology of weaning piglets

由此可見，飼喂飼糧中添加腐殖酸鈉和核苷酸可增加腸絨毛高度、V/C比值、腸壁厚度、黏膜厚度，以及杯狀細胞、柱狀細胞、淋巴細胞和肥大細胞數(shù)量，降低隱窩深度，顯著增加空腸淋巴細胞數(shù)量。

2.4 腐殖酸鈉和核苷酸對仔豬腸食糜中酶活性的影響

由表5可見，試驗豬仔豬腸食糜脂肪酶、胰蛋白酶、淀粉酶、麥芽糖酶、乳糖酶、蔗糖酶活性均高于對照組。與對照組相比，試驗豬仔豬腸道食糜脂肪酶、胰蛋白酶、淀粉酶、麥芽糖酶、乳糖酶和蔗糖酶活性分別提高5.76%、41.67%、23.74%、57.24%、7.98%、50.91%，其中蔗糖酶活性增加顯著(P<0.05)，其他酶活性提高不顯著(P>0.05)。

表5 飼糧中添加腐殖酸鈉和核苷酸對仔豬空腸食糜酶活性的影響(n=3)Table 5 Effect of adding sodium humate and nucleotides in diet on digestive enzyme activities of jejunal chyme in weaning piglets

2.5 腐殖酸鈉和核苷酸對仔豬養(yǎng)殖效益影響

每頭豬收益計算時，生豬出欄價格和管理、疫苗、水電等成本按2017年4月份豬價格網(wǎng)上山東省濟南市的統(tǒng)計數(shù)據(jù)計算。70日齡仔豬價格38元/kg，管理、疫苗、水電等成本每頭豬80元。豬增重收益(元/頭)=(結(jié)束體重-開始體重)×生豬出欄價格-飼料成本，豬凈收益(元/頭)=豬增重收益-管理等成本80元/頭。

由表6可見，飼喂添加腐植酸鈉、核苷酸飼糧可使每頭豬的凈收益增加34.05元，如果年出欄10000頭，可增益34.05萬元。從養(yǎng)豬生產(chǎn)工藝的角度來看，增加胴體重可以帶來類似的經(jīng)濟效益，這是因為獲得較重的胴體并不需要增加設(shè)備成本，但能夠獲得更多的豬肉可供銷售。本研究結(jié)果表明，飼喂添加腐殖酸鈉和核苷酸飼糧試驗豬的胴體重增加1.18kg，增加幅度達到7.36%。研究表明，豬胴體重每增加10%，每kg胴體重的生產(chǎn)成本能降低0.4元。飼喂添加腐殖酸鈉和核苷酸飼糧試驗豬每頭生產(chǎn)成本降低0.29元。由此可見，飼喂同時添加腐殖酸鈉和核苷酸飼糧豬可增益34.34元。

表6 飼糧中添加腐植酸鈉和核苷酸對仔豬養(yǎng)殖效益影響(n=80)Table 6 Effect of adding sodium humate and nucleotides in diet on culture benefit of weaning piglets

3 討 論

3.1 腐殖酸鈉、核苷酸對仔豬生長性能的影響

研究表明，飼糧中添加腐殖酸鈉可提高仔豬日增重 ，顯著降低腹瀉率[9，16]。仔豬飼糧中添加0.5‰～2.0‰核苷酸可使日增重、日采食量顯著增加3.14%～11.07%，5.58%～15.50%，料重比顯著降低3.16%～4.24%[15]，腹瀉率由15.63%降低至1.53%，死亡率由4.69%降至1.56%[14]。而具有生物活性的核苷酸在快速生長和應(yīng)激期間可增加仔豬采食量[12]。本試驗結(jié)果表明，飼糧中添加腐植酸鈉和核苷酸提高了仔豬的日采食量、日增重，腹瀉發(fā)生率顯著降低55.85%(P<0.05)，而且每頭豬可增收34.34元，這與蔣安文等[17]、潘軍等[9]、王玉峰等[8]和趙必遷等[16]的研究結(jié)果一致。

3.2 腐植酸鈉和核苷酸對仔豬血清生化指標的影響

仔豬斷奶后采食量降低可使小腸絨毛萎縮[4-6]，小腸屏障功能紊亂，易感傳染性疾病，嚴重影響仔豬生長性能和健康水平[4]，從而使組織器官的細胞膜受損，改變相應(yīng)酶活性。血清總蛋白是動物體內(nèi)蛋白質(zhì)的一種重要來源，可用來修補組織、提供能量。血清總蛋白反映了飼糧中的蛋白質(zhì)水平及動物對蛋白質(zhì)的吸收代謝程度，總蛋白含量高說明蛋白質(zhì)合成代謝速度快。球蛋白是由漿細胞分泌的，其在血清中的含量可反映出機體的抗應(yīng)激能力。IgA、IgG、IgM是3種免疫球蛋白，由骨髓來源的淋巴細胞分泌，可參與體液免疫，它們在血清中含量可反映機體免疫力的強弱[18]。二胺氧化酶是哺乳動物小腸粘膜上層絨毛中具有高度活性的細胞內(nèi)酶，在組胺和多胺代謝中起作用，腸黏膜受損時二胺氧化酶進入血液。血液中二胺氧化酶活性可反映腸道機械屏障的完整性和損傷程度[19]。研究發(fā)現(xiàn)，腐植酸鈉可提高生長豬的免疫水平，Ea玫瑰花環(huán)形成率明顯提高[20]。本研究結(jié)果表明，飼糧添加腐植酸鈉和核苷酸可使仔豬血清中二胺氧化酶和磷酸肌酸激酶活性分別顯著降低31.91%和32.16%(P<0.05)，血清中葡萄糖略有降低，球蛋白含量略有增加。二胺氧化酶和球蛋白含量降低表明試驗組仔豬腸道通透性降低，腸道屏障功能增強，葡萄糖含量降低則在一定程度上表明飼糧中添加的腐植酸鈉和核苷酸可減緩仔豬應(yīng)激。

3.3 腐植酸鈉和核苷酸對仔豬腸組織形態(tài)的影響

本試驗研究結(jié)果表明，飼糧中添加腐植酸鈉和核苷酸可使仔豬十二指腸、空腸、回腸絨毛高度增加5.49%～7.85%%(P>0.05)，隱窩深度減少8.61%～11.10%(P>0.05)。這表明飼糧中添加腐植酸鈉和核苷酸增加了腸組織吸收面積，這可能是由于腸上皮細胞有絲分裂增加，或細胞凋亡降低，抑或是二者共同作用造成的[21-23]。本試驗研究發(fā)現(xiàn)，十二指腸、空腸、回腸腸壁厚度、黏膜厚度呈遞減趨勢，分別對照組增加8.52%～21.76%(P>0.05)和5.14%～11.33%(P>0.05)。這可能主要是由于腸上皮細胞、黏膜細胞和免疫細胞的快速增生，使得腸壁和黏膜厚度增加，同時還可增強腸絨毛的活力，促進營養(yǎng)成分消化吸收[24]。

腸上皮細胞是仔豬抵抗飼料毒素和外來致病菌的第一道防線，其表面含有毒素和細菌的受體，并且包含具有免疫功能的淋巴細胞和杯狀細胞[25-28]。杯狀細胞通過特異性和非特異性免疫機制參與調(diào)節(jié)腸道免疫功能，通過分泌的酸性物質(zhì)到達黏膜表面，從而形成屏障保護層[29]。肥大細胞具有抗感染免疫功能，通過自身分泌的細胞因子參與獲得性免疫[24，30，31]，因此淋巴細胞、杯狀細胞、肥大細胞在仔豬腸道免疫的調(diào)節(jié)中起重要作用。本試驗研究結(jié)果表明，飼糧中添加腐植酸鈉和核苷酸增加了仔豬十二指腸、空腸和回腸杯狀細胞、柱狀細胞、淋巴細胞、肥大細胞數(shù)量，這說明增加飼糧中腐植酸鈉和核苷酸的添加增強了仔豬腸道免疫功能。有可能是因為腐植酸鈉和核苷酸抑制了淋巴細胞、杯狀細胞和肥大細胞的凋亡，促進其增殖，從而提升免疫性能。本試驗結(jié)果顯示，飼糧中添加腐殖酸鈉和核苷酸可增加腸絨毛高度，降低隱窩深度，提高V/C比值，增加腸壁和黏膜厚度，增加腸組織中杯狀細胞、柱狀細胞、淋巴細胞、肥大細胞數(shù)量，雖然差異水平不顯著，但提高幅度較大，這有可能與本試驗樣本較少有關(guān)。

3.4 腐植酸鈉和核苷酸對仔豬腸內(nèi)容物的影響

王彩霞等[32]研究發(fā)現(xiàn)，腐植酸鈉可提高羊瘤胃微生物合成，促進消化代謝。本試驗研究結(jié)果表明，飼糧中添加腐植酸鈉和核苷酸顯著提高了腸道食糜中蔗糖酶活性，脂肪酶、胰蛋白酶、淀粉酶、麥芽糖酶、乳糖酶活性在數(shù)值上有增加的趨勢。這表明腐植酸鈉和核苷酸可在一定程度上提高消化酶活性，從而可增加營養(yǎng)物質(zhì)消化率，促進生長性能的增加。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，飼糧中添加腐殖酸鈉和核苷酸可顯著提高仔豬采食量、日增重，顯著降低腹瀉率，增加腸絨毛高度、V/C比值和腸壁、黏膜厚度，回腸內(nèi)容物中蔗糖酶活性顯著增加，同時血液中球蛋白含量增加，二胺氧化酶含量顯著降低，增強腸道屏障功能。飼糧添加腐殖酸鈉和核苷酸可使仔豬收益增加34.34元/頭，效益顯著。