房大廣

(承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心臟外科，河北 石家莊 067000)

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(冠心病)，主要危險(xiǎn)因素有性別、年齡、肥胖、飲食習(xí)慣、生活環(huán)境、血脂代謝異常、血壓升高、糖尿病、遺傳因素等，近年來(lái)，大量研究發(fā)現(xiàn)高同型半胱氨酸(Hcy)血癥也是冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素〔1,2〕。體內(nèi)Hcy水平受多種因素影響亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因多態(tài)性阻礙Hcy的代謝過(guò)程，使體內(nèi)Hcy水平升高〔3,4〕，補(bǔ)充葉酸可以安全有效地降低血漿Hcy水平〔5〕。本文對(duì)MTHFR基因多態(tài)性與冠心病及血漿Hcy水平的關(guān)系及葉酸治療對(duì)血漿Hcy水平的影響進(jìn)行研究。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇徐州市中心醫(yī)院2015年1月至2016年12月老年冠心病患者200例作為冠心病組，年齡和性別與冠心病組匹配的老年健康體檢者200例作為健康對(duì)照組，冠心病組年齡(67.24±5.46)歲，男104例，女96例；對(duì)照組年齡(67.18±5.73)歲，男101例，女99例。冠心病組患者隨機(jī)分為葉酸治療組和常規(guī)治療組，每組100例。所有研究對(duì)象簽署知情同意書(shū)。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者同意參與研究，資料完整；健康對(duì)照組血液生化檢查、心臟超聲、心電圖檢查結(jié)果均正常，無(wú)冠心病證據(jù)。排除標(biāo)準(zhǔn)：近期有糖皮質(zhì)激素應(yīng)用史，近期有抗生素及免疫抑制劑應(yīng)用史，患嚴(yán)重肝腎疾病者，患惡性腫瘤者，患內(nèi)分泌代謝性疾病者，患感染性疾病者，患結(jié)締組織疾病者，患免疫系統(tǒng)疾病者，拒絕參與研究者。試劑和儀器：MTHFR基因檢測(cè)試劑盒和血液基因組DNA提取試劑盒(美國(guó)Sigma公司)，MTHFR基因型分析軟件(Baio公司)。

1.2研究方法 冠心病組患者入院后給予硝酸酯類、抗凝、β受體阻滯劑、抗血小板及抗凝等藥物進(jìn)行常規(guī)治療，其中葉酸治療組患者在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上給予葉酸(5 mg/d，口服)，共治療8 w。

1.3檢測(cè)方法 冠心病患者入院第二天抽取清晨空腹血進(jìn)行MTHFR基因型測(cè)定和血漿Hcy水平測(cè)定，治療8 w后抽取清晨空腹血進(jìn)行血漿Hcy測(cè)定；健康對(duì)照組體檢時(shí)抽取清晨空腹血進(jìn)行MTHFR基因型測(cè)定和血漿Hcy水平測(cè)定。根據(jù)血液DNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)提取血液DNA，根據(jù)MTHFR基因檢測(cè)試劑盒采用 PCR芯片雜交法測(cè)定MTHFR基因型，采用MTHFR基因型分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。采用熒光偏振法測(cè)定血漿Hcy水平。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0軟件，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，兩組均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組均數(shù)比較采用方差分析，組內(nèi)兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1MTHFR基因型 MTHFR基因型酶切后電泳結(jié)果顯示三種結(jié)果：CC基因型、CT基因型、TT基因型。CC基因型為野生純合子型，為201 bp單一條帶；CT基因型為突變雜合子基因型，為一個(gè)177 bp條帶和一個(gè)201 bp條帶；TT基因型為突變型純合子基因型，為177 bp條帶。

2.2冠心病組和健康對(duì)照組MTHFR基因多態(tài)性分布 冠心病組T等位基因、C等位基因分布和健康對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，冠心病組T等位基因比例高于健康對(duì)照組；冠心病組TT、CT和CC基因型和健康對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，冠心病組TT基因型比例高于對(duì)照組。見(jiàn)表1。

表1 冠心病組和健康對(duì)照組MTHFR等位基因和基因型分布〔n(%),n=200〕

2.3冠心病組和健康對(duì)照組血漿Hcy水平比較 冠心病組患者血漿Hcy水平〔(15.24±2.15)μmol/L〕顯著高于健康對(duì)照組〔(9.32±1.24)μmol/L，t=34.254,P=0.000〕。

2.4冠心病患者中不同性別血漿Hcy水平比較 冠心病患者中男性血漿Hcy水平〔(17.31±2.24)μmol/L〕顯著高于女性〔(14.02±2.13)μmol/L，t=23.154,P=0.000〕。

2.5冠心病患者中高血壓患者和非高血壓患者血漿Hcy水平比較 冠心病患者高血壓組血漿Hcy水平〔(17.28±2.30)μmol/L〕顯著高于非高血壓組〔(13.54±1.21)μmol/L，t=21.647,P=0.000〕。

2.6冠心病組中不同MTHFR基因型患者血漿Hcy水平比較 冠心病組不同MTHFR基因型患者血漿Hcy水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中TT基因型血漿Hcy水平〔(19.24±7.02)μmol/L〕顯著高于CT基因型〔(14.93±6.64)μmol/L〕和CC基因型〔(12.54±6.02)μmol/L，P<0.05〕，CT基因型血漿Hcy水平顯著高于CC基因型(P<0.05)。

2.7葉酸治療前后不同MTHFR基因型血漿Hcy水平變化情況 除葉酸治療組TT基因型治療后血漿Hcy水平和治療前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)以外，其余冠心病各亞組治療后血漿Hcy水平均較治療前略下降，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 葉酸治療前后不同MTHFR基因型血漿Hcy水平變化

3 討 論

Hcy是半胱氨酸和蛋氨酸代謝過(guò)程的中間產(chǎn)物，為含硫基氨基酸，在體內(nèi)的存在形式有三種，絕大部分通過(guò)二硫鍵和血漿白蛋白結(jié)合，少數(shù)以Hcy-半胱氨酸二硫化合物或自身二聚體形式存在，極少數(shù)以游離巰基形式存在。當(dāng)Hcy代謝過(guò)程受到阻礙，其生成和代謝平衡狀態(tài)被打破，體內(nèi)的Hcy聚集過(guò)多，可形成高Hcy血癥。高Hcy血癥是動(dòng)脈血管疾病的危險(xiǎn)因素，Hcy水平與冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度有關(guān)，是冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素〔6～8〕。血漿Hcy水平受多種酶、酶作用底物、輔助因子的調(diào)節(jié)，影響血漿Hcy代謝的因素很多，年齡、性別、甲狀腺功能低下等疾病、葉酸等維生素?cái)z入不足等營(yíng)養(yǎng)因素、遺傳因素等是影響Hcy代謝的常見(jiàn)因素，血漿Hcy水平升高損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，使血管平滑肌細(xì)胞異常增生，體內(nèi)的纖溶和凝血平衡狀態(tài)被打破，脂質(zhì)代謝障礙，從而使心血管疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加。MTHFR遺傳缺陷也阻礙Hcy代謝過(guò)程，升高血漿Hcy水平〔9，10〕。MTHFR基因型分為TT、CT、CC三種基因型，MTHFR基因多態(tài)性使MTHFR活性下降，TT和CT基因型活性下降，TT基因型的活性最低，最容易引起高Hcy血癥的形成。MTHFR基因多態(tài)性引起的高Hcy水平使機(jī)體處于血栓前狀態(tài)，從而增加冠心病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)〔11，12〕。本研究發(fā)現(xiàn)，老年冠心病患者血漿Hcy水平升高，血漿Hcy水平和性別及高血壓有關(guān)，MTHFR基因多態(tài)性和老年冠心病及其血漿Hcy水平有關(guān)，老年冠心病患者TT基因型比例高，TT基因型冠心病患者血漿Hcy水平高于其他基因型，考慮MTHFR基因多態(tài)性可能通過(guò)升高血漿Hcy水平，從而增加冠心病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

葉酸是降低血漿Hcy水平最有效、安全、便宜的方法，在腦梗死患者的治療中被普遍應(yīng)用。食用葉酸比較安全，葉酸可以預(yù)防結(jié)直腸癌，減少冠心病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，減少唇腭裂畸形、神經(jīng)管畸形、癡呆等的發(fā)病率，減少妊娠期并發(fā)癥，葉酸對(duì)血漿Hcy水平也有重要影響作用，可降低血漿Hcy水平〔13～15〕。本研究表明葉酸可以降低老年冠心病患者血漿Hcy水平，其中對(duì)TT基因型血漿Hcy水平的作用最顯著。

綜上所述，高Hcy水平是冠心病的危險(xiǎn)因素，MTHFR基因型影響Hcy水平，TT基因型血漿Hcy水平最高，葉酸能夠降低血漿Hcy水平，其中TT基因型對(duì)葉酸的治療效果最敏感。