韓靜靜，田丹丹，高玉星，肖春霞

（西北農(nóng)林科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，陜西 楊凌 712100）

VE又名生育酚，是生物體內(nèi)的天然抗氧化劑，廣泛分布于谷物、種子、果蔬和動(dòng)物產(chǎn)品中，具有清除自由基[1]、維持哺乳動(dòng)物及禽類生育[2-3]、調(diào)節(jié)免疫[4]、抑制血小板凝集和黏附[5]等功能。但VE不溶于水，遇堿不穩(wěn)定，對(duì)氧氣、光照敏感，易被氧化，并且某些金屬離子如Fe2＋可加速其氧化[6]。此外，Reboul等[7]發(fā)現(xiàn)VE的生物利用率不穩(wěn)定，容易受到食物基質(zhì)、食品加工過(guò)程等的影響，因此限制了其在食品、藥品和化妝品等領(lǐng)域中的應(yīng)用。隨著研究的深入，一系列生育酚衍生物如生育酚醋酸酯（tocopheryl acetate，TA）、生育酚煙酸酯（tocopheryl nicotinate，TN）、生育酚琥珀酸酯（α-tocopheryl succinate，α-TOS）等被陸續(xù)報(bào)道。這些衍生物均是VE的游離羥基與醋酸、煙酸、琥珀酸的羧基酯化形成的酯類衍生物，由于VE的活潑羥基被保護(hù)，這些衍生物具有更好的穩(wěn)定性，而親水性羧基基團(tuán)則增加了其水溶性。此外，這些衍生物還表現(xiàn)出良好的生物活性，這可能是由于新引入的酸酐結(jié)構(gòu)導(dǎo)致了VE功能的變化[8]。Badraoui等[9]通過(guò)體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)證明，TA能抑制氧化應(yīng)激損傷，并能誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡。Schlieper等[10]發(fā)現(xiàn)TN具有改善心律不齊的功效。Prasad等[11]研究發(fā)現(xiàn)，與TA、TN相比，α-TOS對(duì)黑色素瘤細(xì)胞生長(zhǎng)分化的抑制作用更明顯。此外，α-TOS對(duì)結(jié)腸癌[12]、乳腺癌[13]、胃癌[14]等多種惡性腫瘤細(xì)胞的增殖有良好的抑制作用。Rego等[15]比較了TN和α-TOS對(duì)視網(wǎng)膜細(xì)胞氧化的抑制作用，結(jié)果表明后者作用更為明顯。大量文獻(xiàn)表明，在眾多生育酚衍生物中α-TOS的生物活性較為突出[11-15]。近年來(lái)，一種新的生育酚衍生物——生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯（tocopheryl polyethylene glycol 1000 succinate，TPGS）的綠色合成研究備受關(guān)注[16]，TPGS是α-TOS的游離羧基與大量聚乙二醇酯化而成，親水性聚乙二醇極大地改善了TPGS的水溶性，由于其兩親性質(zhì)，可作為增溶劑、乳化劑、穩(wěn)定劑等使用[17-18]。Thi等[19]以TPGS為載體制備了不溶性藥物的傳遞體系，可延長(zhǎng)藥物在血液及組織中的循環(huán)時(shí)間。Nguyen等[20]報(bào)道TPGS包裹紫杉醇可增加其體外攝取率，使其更容易進(jìn)入固態(tài)瘤中心。Zhu Xianbing等[21]發(fā)現(xiàn)槲皮素經(jīng)TPGS包裹，增加了其水溶性及抗紫外線損傷能力，并提高了其在皮膚表皮層和真皮層的存留量。TPGS已被美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)為安全的藥用輔料[22]，但關(guān)于TPGS的生物活性鮮有報(bào)道。

本研究對(duì)比了VE、α-TOS、TPGS對(duì)自由基誘導(dǎo)的生物大分子氧化損傷的保護(hù)作用，以及對(duì)人肝癌細(xì)胞（HepG2細(xì)胞）增殖的抑制作用，旨在比較研究VE不同衍生物之間生物活性的差異，探討其內(nèi)在機(jī)理，為VE及其衍生物在食品中的廣泛應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

VE、α-TOS、TPGS（結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1） 成都艾科化學(xué)技術(shù)有限公司；牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA） 上海澤龍生物工程有限公司；2,2’-偶氮二異丁基脒二鹽酸鹽（2,2’-azobis-2-methylpropanimidamide,dihydrochloride，AAPH）、鯡魚精DNA（herring sperm DNA，hsDNA）、亞油酸（linoleic acid，LA）、偶氮二異庚腈（2,2’-azobis(2,4-dimethyl)valeronitrile，AMVN）、3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴鹽（3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，MTT） 美國(guó)Sigma公司；2,4-二硝基苯肼（2,4-dinitrophenyl hydrazine，DNPH）、二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO） 美國(guó)Amresco公司；三氯乙酸 天津市博迪化工有限公司；硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid，TBA） 國(guó)藥集團(tuán)藥業(yè)股份有限公司；考馬斯亮藍(lán) 北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司；五水硫酸銅、30%過(guò)氧化氫、七水合硫酸亞鐵、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、無(wú)水乙醇、甲醇、冰乙酸均為分析純。

圖1 VE（A）、α-TOS（B）和TPGS（C）的結(jié)構(gòu)式Fig. 1 Structures of VE (A), α-TOS (B) and TPGS (C)

HepG2細(xì)胞購(gòu)自上海生命科學(xué)研究院，用含有10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 μg/mL鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基在37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)。

1.2 儀器與設(shè)備

電泳儀（電泳供電裝置）、凝膠成像系統(tǒng) 美國(guó)伯樂(lè)公司；UV-2450型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) 日本Shimadzu公司；BP211D型精密電子天平 德國(guó)Startorius公司；HH-2型恒溫水浴鍋 江蘇省金壇市環(huán)宇科學(xué)儀器廠；Max M2型多功能微孔板檢測(cè)儀 美國(guó)Molecular公司。

1.3 方法

1.3.1 Cu2＋/H2O2誘導(dǎo)BSA氧化、羰基化的測(cè)定

在BSA終質(zhì)量濃度為0.8 mg/mL的反應(yīng)體系中，先加入不同濃度的VE、α-TOS和TPGS使其終濃度分別為10、50、100、500、1 000 μmol/L（均用甲醇溶解），空白組以等體積的磷酸鹽緩沖液代替，模型組以等體積的甲醇代替，漩渦振蕩混勻，置于37 ℃水浴中預(yù)處理10 min。然后加入Cu2＋/H2O2反應(yīng)體系（空白組不加），并將所有反應(yīng)組用磷酸鹽緩沖液定容至500 μL，使Cu2＋和H2O2的終濃度分別為100 μmol/L和2.5 mmol/L，37 ℃水浴反應(yīng)60 min。反應(yīng)結(jié)束后，采用考馬斯亮藍(lán)R-250染色法檢測(cè)BSA氧化損傷程度，采用DNPH比色法檢測(cè)BSA羰基化程度[23]。

1.3.2 AAPH誘導(dǎo)BSA氧化、羰基化的測(cè)定

蛋白模型和VE、α-TOS、TPGS處理方法同1.3.1節(jié)，預(yù)處理結(jié)束后加入AAPH（空白組不加），使其終濃度為50 mmol/L，置于37 ℃水浴反應(yīng)5 h。反應(yīng)結(jié)束后，采用考馬斯亮藍(lán)R-250染色法檢測(cè)BSA氧化損傷程度，采用DNPH比色法檢測(cè)BSA羰基化程度[23]。

1.3.3 自由基誘導(dǎo)LA過(guò)氧化的測(cè)定

采用Fe2＋/VC反應(yīng)體系產(chǎn)生的羥自由基（·OH）[24]、AMVN熱分解產(chǎn)生的烷氧自由基（ROO·）[25]誘導(dǎo)LA發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)。

在LA（甲醇助溶）終濃度為1 mmol/L的反應(yīng)體系中，先分別加入不同濃度的VE、α-TOS和TPGS使其終濃度分別為10、50、100、500、1 000 μmol/L（均用甲醇溶解），空白組以等體積的磷酸鹽緩沖液代替，模型組以等體積的甲醇代替，混勻后加入Fe2＋/VC或AMVN（空白組不加），將所有反應(yīng)組用磷酸鹽緩沖液定容至1 mL，使反應(yīng)體系中Fe2＋、VC、AMVN的終濃度分別為50 μmol/L和1、10 mmol/L。Fe2＋/VC體系37 ℃水浴避光反應(yīng)24 h，AMVN體系反應(yīng)12 h。反應(yīng)結(jié)束后，以硫代巴比妥酸反應(yīng)產(chǎn)物（thiobarbituric acid reactive substances，TBARS）濃度表示LA脂質(zhì)過(guò)氧化水平[26]。

1.3.4 AAPH誘導(dǎo)DNA氧化損傷的測(cè)定

在hsDNA終質(zhì)量濃度為2 mg/mL的反應(yīng)體系中，先加入不同濃度的VE、α-TOS和TPGS使其終濃度分別為10、50、100、500、1 000 μmol/L（均用甲醇溶解），空白組以等體積的磷酸鹽緩沖液代替，模型組以等體積的甲醇代替，再加入AAPH溶液（空白組不加），并用磷酸鹽緩沖液將所有反應(yīng)組定容至1 mL，使AAPH的終濃度為40 mmol/L，混勻后37 ℃水浴反應(yīng)12 h。反應(yīng)結(jié)束后采用TBA法檢測(cè)DNA氧化損傷程度[27]。

1.3.5 MTT法測(cè)定細(xì)胞活力

將HepG2細(xì)胞接種于96 孔板中，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜，使細(xì)胞貼壁。分別加入不同濃度（10、20、30、40、50 μmol/L）的VE、α-TOS和TPGS，空白組不加。每組設(shè)置8 個(gè)平行，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h。棄上清液，每孔加入100 μL終質(zhì)量濃度為0.5 mg/mL的MTT溶液，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，4 h后棄去培養(yǎng)液，每孔加入100 μL DMSO，置于搖床上低速振蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解。使用多功能微孔板檢測(cè)儀測(cè)定各孔在570 nm波長(zhǎng)處的OD值，并根據(jù)下式計(jì)算細(xì)胞存活率。

1.4 數(shù)據(jù)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 VE、α-TOS和TPGS對(duì)自由基誘導(dǎo)蛋白質(zhì)損傷的影響

2.1.1 VE、α-TOS和TPGS對(duì)Cu2＋/H2O2誘導(dǎo)BSA氧化降解的影響

圖2 VE、α-TOS和TPGS對(duì)Cu2＋/H2O2誘導(dǎo)BSA氧化降解的影響Fig. 2 Effects of VE, α-TOS and TPGS on Cu2+/H2O2-induced BSA oxidative degradation

Fe2＋、Fe3＋、Cu2＋、Mn2＋、Ni2＋等金屬離子可以催化H2O2分解，產(chǎn)生氧化活性更高的·OH，·OH能與所有氨基酸反應(yīng)[28]，因此本實(shí)驗(yàn)采用Cu2＋/H2O2反應(yīng)體系誘導(dǎo)BSA氧化損傷，探討VE、α-TOS和TPGS對(duì)自由基誘導(dǎo)BSA氧化降解的抑制作用。從圖2A可以看出，VE對(duì)Cu2＋/H2O2誘導(dǎo)的BSA氧化降解沒(méi)有明顯規(guī)律性。而α-TOS、TPGS均濃度依賴性地抑制了BSA的氧化降解，在500、1 000 μmol/L濃度下，α-TOS和TPGS的抑制作用顯著。由圖2D可知，相同濃度下（500 μmol/L），與VE、α-TOS相比，TPGS對(duì)Cu2＋/H2O2誘導(dǎo)的BSA氧化降解的抑制作用最明顯，與模型組相比差異極顯著（P＜0.01）。

2.1.2 VE、α-TOS和TPGS對(duì)AAPH誘導(dǎo)BSA氧化降解的影響

AAPH是一種水溶性的偶氮類化合物，通過(guò)均裂產(chǎn)生ROO·，在37 ℃和中性pH值條件下能穩(wěn)定地產(chǎn)生自由基[29]。如圖3所示，VE、α-TOS和TPGS均能顯著抑制AAPH誘導(dǎo)的BSA氧化降解，在10～500 μmol/L濃度范圍內(nèi)呈濃度依賴性，并且在500 μmol/L時(shí)最強(qiáng)，在1 000 μmol/L時(shí)有所減弱，但與模型組相比仍有極顯著差異（P＜0.01）。圖3D表明，相同濃度（500 μmol/L）處理時(shí)，TPGS的抑制作用最明顯，且與空白組相比沒(méi)有顯著差異，即500 μmol/L的TPGS很好地抑制了AAPH誘導(dǎo)的BSA氧化降解。

2.1.3 VE、α-TOS和TPGS對(duì)Cu2＋/H2O2誘導(dǎo)BSA羰基化的影響

如圖4所示，BSA本身羰基化程度很低，在Cu2＋/H2O2作用下發(fā)生明顯的羰基化修飾。加入VE、α-TOS和TPGS后，BSA羰基化程度明顯受到抑制，且抑制作用隨濃度的升高而增強(qiáng)。由圖4D可知，相同濃度（500 μmol/L）的VE、α-TOS和TPGS均能顯著抑制BSA羰基的產(chǎn)生，但TPGS抑制作用最明顯。

圖3 VE、α-TOS和TPGS對(duì)AAPH誘導(dǎo)BSA氧化降解的影響Fig. 3 Effects of VE, α-TOS and TPGS on AAPH -induced BSA oxidative degradation

圖4 VE、α-TOS和TPGS對(duì)Cu2＋/H2O2誘導(dǎo)BSA羰基化的影響Fig. 4 Effect of VE, α-TOS and TPGS on Cu2+/H2O2-induced carbonylation of BSA

2.1.4 VE、α-TOS和TPGS對(duì)AAPH誘導(dǎo)BSA羰基化的影響

圖5 VE、α-TOS和TPGS對(duì)AAPH誘導(dǎo)BSA羰基化的影響Fig. 5 Effects of VE, α-TOS and TPGS on AAPH-induced carbonylation of BSA

由圖5可知，AAPH誘導(dǎo)BSA發(fā)生明顯的羰基化修飾。VE、α-TOS和TPGS均濃度依賴性地抑制BSA羰基化修飾。如圖5D所示，500 μmol/L的VE、α-TOS和TPGS均顯著抑制了BSA羰基的產(chǎn)生，其中TPGS對(duì)AAPH誘導(dǎo)的BSA羰基化損傷的抑制作用最明顯。

2.2 VE、α-TOS和TPGS對(duì)自由基誘導(dǎo)LA過(guò)氧化的影響

2.2.1 VE、α-TOS和TPGS對(duì)Fe2＋/VC誘導(dǎo)LA過(guò)氧化的影響

圖6 VE、α-TOS和TPGS對(duì)Fe2＋/VC誘導(dǎo)LA過(guò)氧化的影響Fig. 6 Effects of VE, α-TOS and TPGS on LA peroxidation induced by Fe2+/VC

圖7 VE、α-TOS和TPGS對(duì)AMVN誘導(dǎo)LA過(guò)氧化的影響Fig. 7 Effects of VE, α-TOS and TPGS on LA peroxidation induced by AMVN

LA在脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程中會(huì)形成亞油酸氫過(guò)氧化物、4-羥基壬烯醛、丙二醛等氧化產(chǎn)物，這些產(chǎn)物能與TBA發(fā)生反應(yīng)生成TBARS，其含量是衡量脂質(zhì)過(guò)氧化程度的重要指標(biāo)之一[30]。由圖6可知，LA在自然條件下自氧化反應(yīng)很慢，生成TBARS濃度較低，F(xiàn)e2＋/VC反應(yīng)體系誘導(dǎo)LA發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng)，VE、α-TOS和TPGS均顯著抑制了LA過(guò)氧化，且其抑制作用隨濃度的升高而增強(qiáng)。圖6D表明，相同濃度（500 μmol/L）下，TPGS對(duì)LA過(guò)氧化的抑制作用最強(qiáng)。

2.2.2 VE、α-TOS和TPGS對(duì)AMVN誘導(dǎo)LA過(guò)氧化的影響

AMVN是一種脂溶性偶氮類化合物，通過(guò)熱分解產(chǎn)生ROO·，常作為自由基引發(fā)劑用于脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)模型的建立[31]。如圖7所示，LA自然條件下生成的TBARS濃度很低，AMVN誘導(dǎo)LA發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng)，TBARS濃度極顯著增加（P＜0.01）。圖7A～C表明，VE、α-TOS和TPGS均濃度依賴性地抑制了LA過(guò)氧化。圖7D表明，相同濃度（500 μmol/L）的VE、α-TOS和TPGS中，TPGS對(duì)AMVN誘導(dǎo)的LA過(guò)氧化的抑制作用最強(qiáng)。

2.3 VE、α-TOS和TPGS對(duì)AAPH誘導(dǎo)DNA氧化損傷的影響

圖8 VE、α-TOS和TPGS對(duì)AAPH誘導(dǎo)DNA氧化損傷的影響Fig. 8 Effects of VE, α-TOS and TPGS on AAPH-initiated DNA oxidation

AAPH熱分解生成的ROO·使DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)解旋，并最終生成含有羰基的20余種小分子化合物，DNA形成的裂解產(chǎn)物在酸性條件下與TBA反應(yīng)生成TBARS[27]，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)TBARS含量來(lái)研究不同濃度的VE、α-TOS和TPGS對(duì)ROO·誘導(dǎo)DNA氧化損傷的抑制作用。由圖8可知，hsDNA在AAPH誘導(dǎo)下發(fā)生氧化損傷。隨著加入VE、α-TOS和TPGS濃度的增加，其對(duì)DNA氧化損傷的抑制作用增強(qiáng)。從圖8D可以看出，相同濃度（500 μmol/L）下，TPGS對(duì)AAPH誘導(dǎo)的DNA氧化損傷的抑制作用最強(qiáng)。

2.4 VE、α-TOS和TPGS對(duì)HepG2細(xì)胞活力的影響

圖9 VE、α-TOS和TPGS對(duì)HepG2細(xì)胞活力的影響Fig. 9 Effects of VE, α-TOS and TPGS on HepG2 cell viability

活細(xì)胞能將外源性的MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚，并沉積在細(xì)胞中，經(jīng)DMSO溶解并測(cè)定其OD值可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。MTT法是測(cè)定細(xì)胞活力最常見(jiàn)、直接的方法[32]。如圖9所示，以空白組細(xì)胞存活率為100%，VE對(duì)HepG2細(xì)胞存活率沒(méi)有明顯影響；而隨著α-TOS、TPGS濃度的增加，HepG2細(xì)胞存活率逐漸下降，與空白組相比差異極顯著（P＜0.01），其中TPGS對(duì)HepG2細(xì)胞增殖抑制作用最強(qiáng)。

3 討 論

VE常作為油脂加工中的抗氧化劑應(yīng)用在肉類腌制中防止亞硝胺的生成，此外還具有多種生理功能。Azzi等[33]報(bào)道VE能改善與氧化應(yīng)激相關(guān)的心血管疾病、癌癥、神經(jīng)退行性疾病、白內(nèi)障等疾病。Bo?kovi?等[34]發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充一定量的VE可改善精神分裂癥患者的運(yùn)動(dòng)阻滯狀況。但VE在氧氣存在條件下不穩(wěn)定，α-TOS和TPGS通過(guò)酯化修飾提高了化學(xué)穩(wěn)定性，其中α-TOS能顯著抑制巨噬細(xì)胞NO的生成[35]，并降低環(huán)孢菌素A對(duì)大鼠肝細(xì)胞的毒性[36]。TPGS由于具有良好的水溶性，被廣泛應(yīng)用于難溶藥物的傳遞體系中，以提高藥物的滲透性和吸收效率[18,37-38]，但尚鮮有針對(duì)VE和其水溶性衍生物α-TOS、TPGS生物活性差異的報(bào)道。

自由基具有未配對(duì)電子，化學(xué)性質(zhì)非?；顫姟Ｔ谡l件下，自由基參與細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫防御、增殖、凋亡等多種生理活動(dòng)[39]。當(dāng)體內(nèi)氧化和抗氧化體系平衡被打破時(shí)，過(guò)量的自由基就會(huì)攻擊體內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、DNA等生物大分子，最終造成機(jī)體損傷?；钚匝醮兀╮eactive oxygen species，ROS）是自由基的一種，在應(yīng)激狀態(tài)下可攻擊蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、DNA等，進(jìn)而誘發(fā)多種疾病，例如腫瘤[40]、神經(jīng)退行性疾病[41]等。研究表明，ROS不僅參與腫瘤的產(chǎn)生，還與腫瘤的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[42]。

本實(shí)驗(yàn)以Cu2＋/H2O2、AAPH、AMVN等體系誘導(dǎo)產(chǎn)生自由基，對(duì)比研究VE、α-TOS、TPGS對(duì)自由基引起的生物大分子體外損傷的保護(hù)作用，結(jié)果表明，與VE、α-TOS相比，TPGS對(duì)生物大分子（蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、DNA）損傷的保護(hù)作用最強(qiáng)。許多學(xué)者曾認(rèn)為α-TOS發(fā)揮抗腫瘤功效是由于α-TOS水解釋放的VE發(fā)揮的作用，但多項(xiàng)研究表明，α-TOS是以整體的分子形式發(fā)揮作用，并不依賴于VE[43-44]。本研究結(jié)果顯示，TPGS對(duì)自由基誘導(dǎo)的生物大分子損傷的保護(hù)作用優(yōu)于VE，推測(cè)TPGS可能也是以整體分子形式發(fā)揮抗氧化作用的，而不依賴于其水解產(chǎn)生的VE。TPGS結(jié)構(gòu)中的琥珀酸酯保護(hù)了化學(xué)性質(zhì)活潑的酚羥基，提高其穩(wěn)定性，而高度聚合的聚乙二醇結(jié)構(gòu)保護(hù)琥珀酸的另一個(gè)游離羧基，隨著聚乙二醇鏈段長(zhǎng)度的增加，親水性也隨之增加。TPGS由于具有兩親性，在磷酸鹽緩沖液中，其疏水端與生物大分子（蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、DNA）相互作用，吸附在生物大分子表面，而聚乙二醇與水具有較強(qiáng)的親和力，在磷酸鹽緩沖液中充分伸展，為自由基攻擊生物大分子提供了較大的空間位阻，從而達(dá)到對(duì)生物大分子的最佳保護(hù)效果。在HepG2細(xì)胞模型中，VE對(duì)HepG2細(xì)胞的存活率沒(méi)有明顯影響，而α-TOS和TPGS均能夠顯著降低HepG2細(xì)胞存活率，其中TPGS的抑制作用更為明顯。這可能是由于TPGS親水性強(qiáng)，與生物膜磷脂成分的相互作用弱，透過(guò)生物膜時(shí)的阻力減小、效率增加，在HepG2細(xì)胞內(nèi)有效濃度大大增加。P-糖蛋白是一種由基因編碼的跨膜蛋白，在小腸、肝、腎等組織中分布廣泛，能夠外排大量結(jié)構(gòu)和功能各異的外源性分子，Dintaman等[45]的研究表明TPGS是一種P-糖蛋白的抑制劑，可以抑制P-糖蛋白的外排作用，由此推測(cè)TPGS可能通過(guò)抑制HepG2細(xì)胞膜P-糖蛋白的外排作用，增加其在細(xì)胞內(nèi)的濃度，從而更有效地抑制HepG2細(xì)胞增殖。

4 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)采用多種自由基體系對(duì)比研究VE及其衍生物α-TOS、TPGS對(duì)自由基引起的生物大分子體外損傷的保護(hù)作用，并從抑制HepG2細(xì)胞增殖方面比較其生物活性的差異，發(fā)現(xiàn)TPGS的抑制作用最顯著。這可能是由于TPGS引入了親水性強(qiáng)的聚乙二醇結(jié)構(gòu)，在磷酸鹽緩沖液中充分伸展，為自由基攻擊生物大分子提供了較大的空間位阻；并且TPGS親水性強(qiáng)，更容易透過(guò)生物膜，減少生物膜的外排作用，提高在細(xì)胞中的有效濃度。作為一種安全的食品藥品傳遞載體，相較于VE和傳統(tǒng)的VE衍生物，TPGS具有更好的水溶性和穩(wěn)定性。本研究結(jié)果將對(duì)VE及其衍生物的廣泛應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。