余 穎，樊金玲,，程源斌，朱文學(xué)

（1.河南科技大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，河南 洛陽 471023；2.洛陽藍(lán)斯利科技有限公司，河南 洛陽 471023）

α-葡萄糖苷酶（EC3.2.1.20）是人體消化碳水化合物的關(guān)鍵酶[1-2]，催化水解低聚糖底物非還原末端的α-1,4-糖苷鍵，釋放出α-D-葡萄糖[3-4]。α-葡萄糖苷酶抑制劑可通過抑制人體腸道內(nèi)α-葡萄糖苷酶活性，延緩食物中碳水化合物的水解，從而減慢糖的吸收，降低餐后血糖水平[5-6]，可用于防治II型糖尿病及其并發(fā)癥[7]。由于藥物合成的α-葡萄糖苷酶抑制劑的不良反應(yīng)屢有報道[8]，因此從天然動植物及食品中開發(fā)α-葡萄糖苷酶抑制劑，用于降血糖功能性食品及功能性食品配料具有重要意義[9-12]。

甘草是我國衛(wèi)生與計劃生育委員會委頒布的藥食同源的多年生草本植物[13]，其蘊藏量豐富，在中、西方食品和藥品中均有廣泛應(yīng)用[14-15]。其主要的利用形式之一是提取甘草酸，提酸后的甘草藥渣和廢液則被遺棄，造成了極大的環(huán)境污染和資源浪費[16-17]。近年來研究表明，甘草的水提取物和乙醇提取物均對α-葡萄糖苷酶具有顯著的抑制活性[18-19]，其中甘草黃酮、甘草酸是主要的活性物質(zhì)，例如：甘草酚、甘草異黃酮乙、甘草異黃酮甲等具有較高的α-葡萄糖苷酶抑制活性[20-25]。本實驗從甘草酸的工業(yè)生產(chǎn)出發(fā)，對甘草酸提取廢液進(jìn)行梯度萃取，研究不同溶劑萃取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性，探討抑制活性最強的萃取相對α-葡萄糖苷酶的抑制作用類型及其與阿卡波糖的協(xié)同作用，并采用超高效液相色譜-二極管陣列檢測-質(zhì)譜（ultra high performance liquid chromatography with diode array detector mass spectrometry，UHPLC-DAD-MS）等多種方法對其主要成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析鑒定，同時測定了主要成分的含量。本研究為甘草及甘草酸提取廢液的綜合開發(fā)和利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

甘草酸提取廢料由洛陽藍(lán)斯利科技有限公司提供。

α-葡萄糖苷酶、阿卡波糖、甘草素、異甘草素、柚皮素、芒柄花素 上海源葉生物科技有限公司；葡萄糖測定試劑盒 中生北控生物科技股份有限公司；萃取用有機溶劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

Model 680全自動酶標(biāo)儀 美國Bio-Rad公司；1260高效液相色譜儀、6520 四極桿-飛行時間-質(zhì)譜（quadrupole-time of flight-mass spectrometry，Q-TOFMS）儀 美國Agilent 公司；RE52CS-1旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上海亞榮生化儀器廠；SCIENTZ-10N冷凍干燥機 寧波新芝生物科技有限公司；101-2A電熱鼓風(fēng)干燥箱 天津泰斯特儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品的制備

甘草酸提取廢液濃縮物依次用正己烷、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取3 次（體積比1∶1），分別合并各萃取液。各萃取液和萃余水相經(jīng)真空減壓濃縮和真空冷凍干燥分別得正己烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取相和水相。冷藏備用，使用前用甲醇復(fù)溶。

1.3.2 樣品對α-葡萄糖苷酶的抑制作用

測定甘草酸提取廢液及其各萃取相和萃余水相對α-葡萄糖苷酶的抑制活性，其具體方法參考文獻(xiàn)[26]，并作部分修改。取α-葡萄糖苷酶溶液（50 U/mL，pH 6.86磷酸鹽緩沖液溶解）40 μL于96 孔酶標(biāo)板中，加入20 μL不同質(zhì)量濃度（0.00、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.0 g/L）樣品（甲醇溶解），置于37 ℃恒溫箱中預(yù)熱15 min；加入10 mmol/L麥芽糖（pH 6.86磷酸鹽緩沖液溶解）40 μL，37 ℃保溫反應(yīng)30 min；然后加入0.1 mol/L Na2CO3100 μL終止反應(yīng)。取上述反應(yīng)液50 μL，加入葡萄糖測定試劑盒中的葡萄糖工作液150 μL，充分混勻，37 ℃反應(yīng)30 min，于505 nm波長處檢測吸光度A。每個樣品重復(fù)測定4 孔，取平均值。按式（1）計算樣品對α-葡萄糖苷酶的抑制率，并通過方程擬合計算半抑制濃度（half maximal inhibitory concentration，IC50）。式（1）中酶空白組、樣品組、樣品背景組的反應(yīng)體系見表1。同時，按上述方法測定不同質(zhì)量濃度阿卡波糖對α-葡萄糖苷酶的抑制率和IC50。

表1 α-葡萄糖苷酶活性反應(yīng)體系Table1 Reaction system for α-glucosidase activity

1.3.3 樣品對α-葡萄糖苷酶的抑制作用類型

分析1.3.2節(jié)實驗中IC50最小的樣品對α-葡萄糖苷酶的抑制作用類型。按照1.3.2節(jié)方法，設(shè)定樣品質(zhì)量濃度范圍為0～1 g/L；在樣品某一確定質(zhì)量濃度下，改變反應(yīng)體系中麥芽糖濃度（0～500 mmol/L），測定反應(yīng)液的吸光度。根據(jù)Lineweaver-Burk雙倒數(shù)曲線圖，判斷樣品對α-葡萄糖苷酶的抑制作用類型。具體方法詳見參考文獻(xiàn)[27]。其中，Lineweaver-Burk雙倒數(shù)曲線圖是由酶促反應(yīng)速率的倒數(shù)（1/V）對麥芽糖底物濃度的倒數(shù)（1/S）作圖，x和y軸上的截距分別代表米氏常數(shù)（Km）和最大反應(yīng)速率（Vmax）的倒數(shù)。

1.3.4 樣品與阿卡波糖對α-葡萄糖苷酶的協(xié)同抑制作用分析1.3.2節(jié)實驗中IC50最小的樣品與阿卡波糖對α-葡萄糖苷酶的協(xié)同抑制作用?；?.3.2節(jié)實驗得到的樣品與阿卡波糖的IC50，分別配制7 個質(zhì)量濃度（0.25 IC50、0.50 IC50、1.00 IC50、1.50 IC50、2.00 IC50、2.50 IC50、5.00 IC50）的樣品和阿卡波糖溶液，并按體積比1∶1混合，按1.3.2節(jié)方法測定混合液對α-葡萄糖苷酶的抑制率。按式（2）計算聯(lián)合作用指數(shù)（combination index，CI）；CI＜1、CI＝1、CI＞1分別代表協(xié)同作用、加和作用和拮抗作用[28-31]。

式中：ρ1表示某一抑制率下混合液中提取物的質(zhì)量濃度/（g/L）；ρ2表示某一抑制率下混合液中阿卡波糖的質(zhì)量濃度/（g/L）；ρ1′表示相同抑制率下提取物單獨作用的質(zhì)量濃度/（g/L）；ρ2′表示相同抑制率下阿卡波糖單獨作用的質(zhì)量濃度/（g/L）。

1.3.5 樣品酸水解

稱取1.3.2節(jié)實驗中IC50最小的樣品25 mg，溶于3 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)1% HCl-CH3OH溶液，再加入2 mL 2 mol/L HCl溶液，混合均勻，密封置于100 ℃沸水浴中反應(yīng)130 min。取出室溫冷卻，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)1% HCl-CH3OH溶液補充體積至5 mL，0.45 μm微孔濾膜（有機系）過濾后冷藏備用。

1.3.6 UHPLC-DAD-MS分析

對1.3.2節(jié)實驗中IC50最小的樣品進(jìn)行UHPLC-DAD-MS分析。

色譜條件：SB-C18柱（100 mm×4.6 mm，1.8 μm）；以乙腈（A）和0.1%甲酸水溶液（B）為流動相，梯度洗脫（0～20 min，5%～100% A）；流速：0.4 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫 25℃；DAD檢測器，檢測波長：λ1＝276 nm、λ2＝372 nm。

TOF-MS條件：電噴霧離子源；TOF-MS檢測器；氣體溫度：350℃；干燥氣體流速：5 mL/min；毛細(xì)管電壓：4 000 V；碎裂電壓：150 V。

1.3.7 樣品主要成分的含量測定

HPLC分析：采用HPLC法測定酸水解樣品中各成分的含量。色譜柱：ZORBAX SB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇（A）和1%冰醋酸水溶液（B）為流動相，梯度洗脫（0～20 min，25%～40% A；20～60 min，40%～100% A）；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫30 ℃；DAD檢測器，檢測波長：λ1＝276 nm、λ2＝372 nm。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：稱取一定量的標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇配制系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)品使用液，按上述方法進(jìn)行分析檢測。以溶液質(zhì)量濃度（甘草素質(zhì)量濃度單位mg/mL，其余為μg/mL）為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程分別為：甘草素（276 nm）：y＝37 293x＋1 381.4（R2＝0.999 8）；柚皮素（276 nm）：y＝18.193x＋6.12（R2＝0.999 9）；異甘草素（372 nm）：y＝44.153x＋75.745（R2＝0.999 9）；芒柄花素（276 nm）：y＝29.107x＋28.13（R2＝0.999 9）。

含量計算：酸水解樣品中4 種主要的黃酮苷元（即甘草素、柚皮素、異甘草素以及芒柄花素）的含量按式（3）計算。

式中：ρ表示酸水解樣品中黃酮苷元（甘草素、柚皮素、異甘草素、芒柄花素）的質(zhì)量濃度/（mg/mL）；ρ′表示酸水解樣品的質(zhì)量濃度/（mg/mL）。

未酸水解樣品的主要化學(xué)成分為上述苷元的單糖苷和二糖苷。各黃酮苷元（甘草素、柚皮素、異甘草素、芒柄花素）的相對分子質(zhì)量Mr分別以256.25、272.25、256.25、268.26計，糖苷平均分子相對分子質(zhì)量Mr以240計，折合成糖苷的平均相對分子質(zhì)量Mr′分別以496.25、515.25、496.25、508.26計。按式（4）計算以測定所得各苷元的含量折合成各類糖苷的總含量。

式中：Mr表示各黃酮苷元的相對分子質(zhì)量；Mr′表示各黃酮苷元折合成糖苷的平均相對分子質(zhì)量；w表示黃酮苷元含量/%。

2 結(jié)果與分析

2.1 甘草酸廢液提取物對α-葡萄糖苷酶的抑制作用比較

甘草酸提取廢液及其各萃取相和萃余水相對α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用如圖l所示。根據(jù)圖1數(shù)據(jù)擬合方程得到的IC50見表2。除正己烷相外，甘草酸提取廢液的各萃取相與甘草酸提取廢液相比，α-葡萄糖苷酶抑制活性均有不同程度的提高。其中，抑制活性最強的是乙酸乙酯萃取相，IC50為0.152 9 g/L（得率為5.65%）；其次為水相，IC50為0.618 9 g/L（得率為83.54%）。由于乙酸乙酯萃取相對α-葡萄糖苷酶的抑制活性最強，因此，后續(xù)實驗均以此相為研究對象。

圖1 甘草酸提取廢液及其萃取物對α-葡萄糖苷酶的抑制作用Fig. 1 Inhibitory effect of glycyrrhizic acid extraction waste liquid against α-glucosidase

表2 甘草酸提取廢液及其萃取物對α-葡萄糖苷酶的IC50和得率Table2 IC50 and yield of extracts with α-glucosidase inhibitory activity from glycyrrhizic acid extraction waste liquid

2.2 乙酸乙酯相對α-葡萄糖苷酶的抑制作用類型

圖2 乙酸乙酯提取物對α-葡萄糖苷酶抑制作用的Lineweaver-Burk雙倒數(shù)圖Fig. 2 Lineweaver-Burk double reciprocal plot for the inhibition of α-glucosidase by the ethyl acetate extract

按1.3.3節(jié)方法測定不同質(zhì)量濃度乙酸乙酯萃取條件下麥芽糖底物濃度對α-葡萄糖苷酶催化速率的影響，根據(jù)Lineweaver-Burk雙倒數(shù)作圖。從圖2可以看出，隨著乙酸乙酯萃取相質(zhì)量濃度的增大，縱軸截距不變，斜率增大，即Vmax不隨著抑制劑質(zhì)量濃度增大而變化，米氏常數(shù)Km隨著抑制劑質(zhì)量濃度的增大而不斷增大，表明抑制劑質(zhì)量濃度增大時，酶對底物的親和力在不斷下降，抑制劑的存在阻礙了底物和酶的結(jié)合，增加底物濃度或抑制劑質(zhì)量濃度均可排除對方對酶的效應(yīng)，抑制劑對酶的抑制作用表現(xiàn)為競爭性抑制。競爭性抑制劑只能與游離酶結(jié)合，不能與酶-底物配合物結(jié)合。以不同質(zhì)量濃度抑制劑測定的表觀米氏常數(shù)值（Kmapp）對抑制劑質(zhì)量濃度（ρI）作圖為一條直線（圖2內(nèi)插圖），直線所得橫軸截距為－Ki，即可以求得抑制常數(shù)Ki為0.085 1 g/L。

2.3 乙酸乙酯萃取相與阿卡波糖對α-葡萄糖苷酶的協(xié)同抑制作用

不同質(zhì)量濃度的乙酸乙酯萃取物和阿卡波糖混合對α-葡萄糖苷酶的協(xié)同抑制作用見圖3，在所測的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，乙酸乙酯萃取物與阿卡波糖混合物的CI始終小于1，說明二者對α-葡萄糖苷酶存在協(xié)同抑制作用；CI呈現(xiàn)先增后降的趨勢，表明低劑量和高劑量條件下的乙酸乙酯萃取物和阿卡波糖的協(xié)同作用大于中等劑量。

圖3 乙酸乙酯萃取物和阿卡波糖混合液的CI曲線Fig. 3 CI plot of a mixture of ethyl acetate extract and acarbose

2.4 乙酸乙酯萃取相化學(xué)成分的初步鑒定

圖4 乙酸乙酯提取物的UHPLC色譜圖Fig. 4 UHPLC chromatograms of the ethyl acetate extract

采用UHPLC-DAD-MS對乙酸乙酯萃取相進(jìn)行分析，其色譜圖如圖4所示。依據(jù)各色譜峰的光譜和質(zhì)譜特征可看出：乙酸乙酯萃取相中的主要成分為黃酮類化合物。對其中相對豐度較高的15 個黃酮類化合物的光譜信息、質(zhì)譜信息（準(zhǔn)分子離子、特征裂片、中性丟失）進(jìn)行解析，將其分為Ⅰ～Ⅴ類，初步確定了各黃酮化合物的苷元和糖基組成，詳見表3，苷元結(jié)構(gòu)如圖5所示。

表3 乙酸乙酯萃取相的光譜、質(zhì)譜特征及結(jié)構(gòu)鑒定Table3 Spectral characteristics and structural identification of flavonoid compounds in the ethyl acetate extract

圖5 不同黃酮苷元結(jié)構(gòu)圖Fig. 5 Structure of different flavonoid aglycones

類Ⅰ包括色譜峰1、3、6，其光譜的共同特征為：約在284 nm左右具有強的帶Ⅱ吸收，帶Ⅰ以肩峰形式出現(xiàn)或消失。此類化合物質(zhì)譜的共同特征為：負(fù)離子檢測模式下苷元離子的m/z為271，苷元共同的碎片離子分別為177、151和107。結(jié)合光譜圖和以上特征碎片，推斷類Ⅰ化合物的苷元為柚皮素，m/z 151為[1,3A－H]－，m/z 107為[0,4A－H]－，m/z 177為苷元失去B環(huán)所得，即[苷元－H－B]－。峰1和峰3是同分異構(gòu)體，其[M－H]－的m/z為433，丟失1 個六碳糖中性碎片162 u得到苷元離子m/z 271；因此，峰1和峰3均為柚皮素-六碳糖單糖苷。目前尚無法判斷峰1和3中糖苷鍵位置。峰6[M－H]－的m/z為565，丟失1 個五碳糖中性碎片132 u得到碎片離子m/z 433，再丟失1 個六碳糖中性碎片162 u得到苷元離子m/z 271；因此，峰6為柚皮素-六碳糖-五碳糖二糖苷。

類Ⅱ包括色譜峰2、4和5，其光譜的共同特征為：約在271～276 nm波長處具有強的帶Ⅱ吸收，帶Ⅰ以低強度峰的形式出現(xiàn)在313～316 nm波長處，表明此類化合物應(yīng)為雙氫黃酮或雙氫黃酮醇。與類Ⅰ色譜峰相比，其帶Ⅱ吸收向短波移動10 nm左右，表明可能不存在5-羥基。此類化合物質(zhì)譜的共同特征為：負(fù)離子檢測模式下苷元離子的m/z為255，苷元共同的碎片離子分別為135、119和91。結(jié)合光譜圖和以上特征碎片推斷此類化合物的苷元為甘草素，m/z 135為[1,3A－H]－，m/z 91為[0,4A－H]－，m/z 119為[1,3B－H]－。峰2[M－H]－的m/z為417，丟失1 個六碳糖中性碎片162 u得到苷元離子m/z 255；因此，峰2為甘草素-六碳糖單糖苷。峰4和峰5是同分異構(gòu)體，其[M－H]－的m/z為549，丟失1 個五碳糖中性碎片132 u得到碎片離子m/z 417，再丟失1 個六碳糖中性碎片162 u得到苷元離子m/z 255；因此，峰4和峰5均為甘草素-六碳糖-五碳糖二糖苷。

類Ⅲ包括色譜峰7、9、10和12，其光譜的共同特征為：約在362～373 nm波長處具有強的帶Ⅰ吸收，帶Ⅱ以低強度峰形式出現(xiàn)在242～246 nm處，表明此類化合物應(yīng)為查耳酮類。此類化合物質(zhì)譜的共同特征為：負(fù)離子檢測模式下苷元離子的m/z為255，苷元共同的碎片離子分別為135、119和91。此類苷元碎片與類Ⅱ完全相同，但此類化合物的光譜圖顯著不同于類Ⅱ化合物，為查耳酮化合物。結(jié)合光譜圖和以上特征碎片推斷類Ⅲ化合物的苷元為異甘草素，m/z 135為[1A－H]－、m/z 91為[0A－H]－、m/z 119為[1B－H]－。峰7和峰10是同分異構(gòu)體，其[M－H]－的m/z為549，丟失1 個五碳糖中性碎片132 u得到碎片離子m/z 417，再丟失1 個六碳糖中性碎片162 u得到苷元離子m/z 255；因此，峰7和峰10均為異甘草素-六碳糖-五碳糖二糖苷。峰9、12為同分異構(gòu)體，其[M－H]－的m/z為417，丟失1 個六碳糖中性碎片162 u得到苷元離子m/z 255；因此，峰9、12為異甘草素-六碳糖單糖苷。

類Ⅳ包括色譜峰8和11，其光譜的特征為：約在251 nm波長處具有強的帶Ⅱ吸收，帶Ⅰ以肩峰的形式出現(xiàn)在306 nm波長處，表明此類化合物應(yīng)為異黃酮化合物；其帶Ⅱ吸收出現(xiàn)在245～270 nm波長處，與雙氫黃酮或雙氫黃酮醇（帶Ⅱ吸收出現(xiàn)在270～295 nm波長處）有明顯區(qū)別。此類化合物質(zhì)譜的共同特征為：負(fù)離子檢測模式下苷元離子的m/z為267，苷元共同的碎片離子較少。結(jié)合此類化合物的光譜圖，并查閱相關(guān)文獻(xiàn)[32]，推測此苷元為芒柄花素。其中，峰8的[M－H]－的m/z為561，丟失1 個五碳糖中性碎片132 u和1 個六碳糖中性碎片162 u得到苷元離子m/z 267；因此，峰8為芒柄花素-六碳糖-五碳糖二糖苷。峰11質(zhì)譜圖中m/z 475為[M＋HCOO]－，丟失1 個六碳糖中性碎片162 u得到苷元離子m/z 267；因此，峰11為芒柄花素-六碳糖單糖苷。

類Ⅴ包括色譜峰13、14和15，其光譜的共同特征為：約在314～325 nm波長處具有強的帶Ⅰ吸收，帶Ⅱ以低強度峰或肩峰形式出現(xiàn)在281～283 nm波長處。此類化合物質(zhì)譜的共同特征為：負(fù)離子檢測模式下苷元離子的m/z為255，苷元共同的碎片離子分別為135、119和91，與類Ⅱ、Ⅲ相同；但此類化合物光譜圖明顯不同于類Ⅱ、Ⅲ化合物，其帶Ⅰ吸收強于帶Ⅱ吸收，出現(xiàn)在314、323 nm和325 nm波長處，帶Ⅱ出現(xiàn)在281～283 nm波長處。峰13、14和15為同分異構(gòu)體，其[M－H]－的m/z為725，丟失1 個六碳糖醛酸中性碎片176 u得到碎片離子m/z 549，再丟失1 個五碳糖中性碎片132 u得到m/z 417，再丟失1 個六碳糖中性碎片162 u苷元離子m/z 255；因此，峰13、14和15均為黃酮化合物的六碳糖醛酸-六碳糖-五碳糖三糖苷。尚不明確此類化合物的類別。

圖6 乙酸乙酯提取物水解物的HPLC圖Fig. 6 HPLC profile of the acid hydrolysate of the ethyl acetate extract

為了進(jìn)一步確認(rèn)推斷的乙酸乙酯萃取相的苷元結(jié)構(gòu)，將其按1.3.5節(jié)方法進(jìn)行酸水解，再經(jīng)HPLC分析，其色譜圖如圖6所示。將水解產(chǎn)物中主要4 個色譜峰的保留時間和光譜圖與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行了比較，結(jié)果表明：峰1為甘草素，峰2為柚皮素，峰3為異甘草素，峰4為芒柄花素（標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖及光譜圖略）。此結(jié)果表明苷元種類推斷正確。

2.5 乙酸乙酯萃取相主要成分的含量確定

將乙酸乙酯萃取相進(jìn)行酸水解，采用HPLC法測定了水解液中4 種主要的黃酮苷元（即甘草素、柚皮素、異甘草素以及芒柄花素）的含量。甘草素、柚皮素、異甘草素、芒柄花素分別為14.50%、1.56%、6.09%、2.31%。由于乙酸乙酯萃取相主要成分為上述苷元的單糖苷和二糖苷，將測定所得各苷元的含量折合成各類糖苷的總含量。甘草素類、柚皮素類、異甘草素類、芒柄花素類的黃酮含量總計分別為28.08%、2.95%、11.80%、4.38%；黃酮總含量為47.21%。

3 結(jié) 論

在甘草酸提取廢液及其各萃取相和萃余水相對α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用中，乙酸乙酯萃取相具有最強的抑制活性，IC50為0.152 9 g/L，抑制類型表現(xiàn)為競爭性抑制，抑制常數(shù)Ki＝0.085 1 g/L，且與阿卡波糖混合對α-葡萄糖苷酶存在協(xié)同抑制作用。乙酸乙酯萃取相中的主要化學(xué)成分為黃酮類化合物，初步確定了各黃酮化合物的苷元和糖基組成為甘草素、柚皮素、異甘草素以及芒柄花素的單糖苷和二糖苷。乙酸乙酯萃取相水解液中4 種主要的黃酮苷元（即甘草素、柚皮素、異甘草素以及芒柄花素）的含量分別為：14.50%、1.56%、6.09%和2.31%。將測定所得各苷元的含量折合成各類糖苷的總含量，則甘草素類、柚皮素類、異甘草素類和芒柄花素類的黃酮含量總計分別為28.08%、2.95%、11.80%和4.38%；黃酮總含量為47.21%。