李雅，龍云帥，李達華

（羅牛山騰德檢測認證服務（海南）有限公司，海南?？?71127）

隨著栽培技術的不斷進步，蔬菜的生長期已越來越短，由于絕大部分蔬菜需要連續(xù)多次放藥后才能成熟上市，一些高毒性農(nóng)藥的濫用、超量使用，農(nóng)藥污染較重的葉類、根莖類等蔬菜給人民的身體健康帶來極大的危害。國標方法GB 23200.8-2016[1]《食品安全國家標準水果和蔬菜中500種農(nóng)藥及相關化學品殘留量的測定氣相色譜-質(zhì)譜法》中介紹了水果蔬菜中多種農(nóng)藥殘留測定的方法。然而實際操作中發(fā)現(xiàn)樣品的提取及凈化耗時較長。QuEChERS法（quick，easy，cheap，effective，rugged，and safe的縮寫）是由美國學者Seven J.Lehotay等于近些年提出的農(nóng)藥多殘留快速提取方法[2]，該方法一經(jīng)公布，即受到廣泛的應用。該方法主要利用乙腈（或酸化乙腈）提取，采用鹽析分層，提取液經(jīng)PSA（N-丙基乙二胺填料）和無水硫酸鎂分散固相萃取，萃取液加入保護劑，用氣相色譜（gas chromatography，GC）或氣相色譜質(zhì)譜（gas chromatography coupled with mass spectrometry，GC-MS）進行多殘留分析。減少了樣品取樣量和降低提取溶劑的使用量，解決了分析時間長、有毒溶劑大量使用等問題，對工作人員及環(huán)境均起到保護作用[3-10]。因此本試驗采用N-丙基乙二胺（N-propylenediamine，PSA）吸附劑提取，GC-MS法定性定量測定新鮮蔬菜中噻蟲嗪、甲霜靈、嘧菌環(huán)胺、肟菌酯、戊唑醇、氟環(huán)唑、聯(lián)苯肼酯、吡唑醚菌酯農(nóng)藥殘留量，為蔬菜的農(nóng)藥殘留評價提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

1.1.1 儀器部分

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（島津2010plus-TQ 8040）：島津（中國）科技有限公司；色譜柱（HP-5 MS）：安捷倫（中國）科技有限公司；氮氣吹干儀（MTN型）：北京華瑞博遠科技發(fā)展有限公司；電子天平（XS205 DU型，0.01 mg）：賽多利斯（中國）科技有限公司；漩渦混合器（T25）：艾卡儀器設備有限公司；數(shù)控超聲波清洗機（SK3300LH型）：廣州滬瑞明儀器有限公司。

1.1.2 試劑部分

PSA吸附劑：安譜QuEChERS萃取包（硫酸鎂和乙酸鈉）和QuEChERS凈化管（硫酸鎂、PSA和C18）。

噻蟲嗪、甲霜靈、嘧菌環(huán)胺、肟菌酯、戊唑醇、氟環(huán)唑、聯(lián)苯肼酯、吡唑醚菌酯、環(huán)氧七氯標準品（100 μg/mL）：農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科學研究所；乙腈、丙酮：色譜純；冰醋酸：分析純。

1.2 色譜及質(zhì)譜條件

1.2.1 色譜條件

毛細管色譜柱：HP-5 MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；分流方式：不分流；柱溫：60℃保持1 min后，以20℃/min升溫速率升到130℃，再以10℃/min升溫速率升到280℃，保持18 min；進樣口溫度：260℃；氮氣流量：2 mL/min；尾吹：60 mL/min。

1.2.2 質(zhì)譜條件

離子源：EI源；離子源溫度：220℃；接口溫度：200℃；溶劑延遲時間：3.0 min。

1.3 方法

1.3.1 標準溶液制備

標準儲備溶液：精密移取100 μg/mL的噻蟲嗪、甲霜靈、嘧菌環(huán)胺、肟菌酯、戊唑醇、氟環(huán)唑、聯(lián)苯肼酯、吡唑醚菌酯標準品各1 mL于10 mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容至刻度，混勻，即得標準儲備溶液。噻蟲嗪、甲霜靈、嘧菌環(huán)胺、肟菌酯、戊唑醇、氟環(huán)唑、聯(lián)苯肼酯、吡唑醚菌酯的濃度均為10 μg/mL。

內(nèi)標儲備溶液：精密移取100 μg/mL的環(huán)氧七氯1 mL于10 mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容至刻度，混勻，即得10 μg/mL內(nèi)標溶液。

標準曲線溶液：在已吹至近干的樣品基質(zhì)中加入0.01、0.05、0.1、0.5、1.0 μg/mL 濃度的混合標準液各1 mL，渦旋并轉(zhuǎn)移至1 mL小進樣瓶中，分別加入內(nèi)標儲備溶液10ug/mL的環(huán)氧七氯100μL。最后用0.2μm濾膜過濾。得的系列標準溶液。

1.3.2 樣品處理

準確稱取2.0 g已粉碎好的樣品放入25 mL離心管中，加入10 mL乙酸+乙腈（體積比：1+99）混合液，旋渦混合 1 min，快速加入提取包（MgSO4、NaAcetate），適當旋渦混合，再放劇烈振蕩20 min，以8 000 r/min離心3min。凈化：取6 mL離心好的上清液于裝有分散固相萃取劑（QuEChERS凈化試劑盒：含有1.2 g MgSO4+400 mg PSA+400 mg C18）的15 mL離心管中（加入2 mL甲苯），旋渦混勻3 min，以8 000 r/min離心3 min。取離心好的上清液2 mL于玻璃試管中，用氮吹儀吹至近干，丙酮定容至1 mL，加入內(nèi)標物10 ug/mL的環(huán)氧七氯100 μL。最后用0.2 μm濾膜過濾。

2 結果與討論

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

分別取1.0 μg/mL噻蟲嗪、甲霜靈、嘧菌環(huán)胺、肟菌酯、戊唑醇、氟環(huán)唑、聯(lián)苯肼酯、吡唑醚菌酯溶液，按“1.2”色譜條件設置氣相色譜儀器參數(shù)，儀器穩(wěn)定后，分別對對這8種農(nóng)殘進行全質(zhì)譜掃描，找到母離子；然后再用碎片離子掃描的方式，將母離子打碎，找到3個典型的碎片離子；每種農(nóng)藥選擇豐度比較高的一對離子作為定量離子，2個定性離子。得到8種農(nóng)殘定量離子和對應的兩個碎片定性離子對。

由表1中8種農(nóng)藥殘留的保留時間和定量及定性離子對信息可知，樣品可定性確證8種農(nóng)藥殘留的存在。具體出峰時間及譜圖詳見圖1。

2.2 吸附劑的優(yōu)化

吸附劑主要有弗羅里硅土、活性炭、PSA、C18、硫酸鎂等，弗羅里硅土因為極性較強，無法去除提取物中所含的脂類、糖類等極性較弱的物質(zhì)；活性炭主要用于蔬菜水果中提取的色素成分；PSA能夠清除許多極性基質(zhì)組分，并且對農(nóng)藥殘留待測物無吸附作用；C18主要可以去除影響分析的油脂、糖類等極性偏弱的物質(zhì)，對PSA吸附劑是很好的補充；無水硫酸鎂是吸水劑，在吸水的同時放出部分熱量，更加適合農(nóng)藥的提取。

考慮到蔬菜基質(zhì)含有糖類、水分等物質(zhì)，因此，筆者選擇無水硫酸鎂+PSA+C18的組合，試驗證明，該方法處理速度快、檢測回收率高。

表1 8種農(nóng)殘離子對信息Table1 8 Pesticide residues ion pairs information

圖1 8種農(nóng)殘標準圖譜Fig.1 8 agricultural disability standard maps

表2 甲基對硫磷、對硫磷線性范圍、線性方程、相關系數(shù)和檢出限Table2 Methyl parathion，parathion linear range，linear equation，correlation coefficient and detection limit

2.3 基質(zhì)消除

8種農(nóng)藥均在基質(zhì)中表現(xiàn)為增強效應，未用基質(zhì)標液的標準溶液中8種農(nóng)藥出峰拖尾較明顯，且響應較基質(zhì)標液低，為減小基質(zhì)效應的影響，保證8種農(nóng)藥出峰良好，且能有效的分離，本文采用基質(zhì)標準溶液作為定量的依據(jù)。

2.4 線性方程及檢出限

按照1.3.1配制的農(nóng)藥系列標準溶液進氣相色譜-質(zhì)譜分析，以噻蟲嗪、甲霜靈、嘧菌環(huán)胺、肟菌酯、戊唑醇、氟環(huán)唑、聯(lián)苯肼酯、吡唑醚菌酯的色譜峰面積比值為縱坐標、溶液的濃度為橫坐標，繪制工作曲線。色譜測定農(nóng)藥殘留時，一般以3倍信噪比計算檢出限，8種農(nóng)藥線性范圍、線性方程、相關系數(shù)及檢出限見表2。

續(xù)表2 甲基對硫磷、對硫磷線性范圍、線性方程、相關系數(shù)和檢出限Continue table 2 Methyl parathion，parathion linear range，linear equation，correlation coefficient and detection limit

由表2可知，8種農(nóng)藥殘留線性方程相關系數(shù)均大于0.99，分析準確度滿足測定要求，方法檢出限均符合測定要求。

2.5 加標回收率試驗結果

準確稱取2.0 g已粉碎好的樣品放入25 mL離心管中，定量加入噻蟲嗪、甲霜靈、嘧菌環(huán)胺、肟菌酯、戊唑醇、氟環(huán)唑、聯(lián)苯肼酯、吡唑醚菌酯質(zhì)量濃度分別為1 倍 檢 出 限 （limit of detection，LOQ）LOQ、3LOQ、10LOQ加標濃度的待測溶液，按1.2色譜條件上樣分析。以內(nèi)標法計算檢測結果，得低中高3個濃度點的加標回收率，結果見表3。

由表3可知，8種農(nóng)藥殘留3個濃度點的加標回收率均在76%～100%之間，分析準確度滿足測定要求。

2.6 精密度試驗結果

準確稱取2.0 g已粉碎好的樣品放入25 mL離心管中，定量加入噻蟲嗪、甲霜靈、嘧菌環(huán)胺、肟菌酯、戊唑醇、氟環(huán)唑、聯(lián)苯肼酯、吡唑醚菌酯質(zhì)量濃度的標準液作為樣品，按照2.2.2處理樣品，依據(jù)1.2色譜條件上樣分析，分別重復進樣6次檢測結果的相對標準偏差，結果見表4。

表3 加標回收試驗結果Table3 Test results plus standard recovery test %

表4 精密度試驗結果Table4 Experimental results of fine density

由表4可知，8種農(nóng)藥殘留測定結果的精密度的RSD均小于5%，表明本法精密度良好。

2.7 重復性試驗結果

準確稱取2.0 g已粉碎好的樣品放入25 mL離心管中，定量加入噻蟲嗪、甲霜靈、嘧菌環(huán)胺、肟菌酯、戊唑醇、氟環(huán)唑、聯(lián)苯肼酯、吡唑醚菌酯質(zhì)量濃度的標準液作為樣品；同法配制6份，進行樣品前處理，再按1.2色譜條件上樣分析，每份樣品各進樣一次，6次檢測結果的相對標準偏差，結果見表5。

由表5可知，8種農(nóng)藥殘留測定結果的重復性RSD均小于5%，表明本法具有良好的重現(xiàn)性。

3 結論

本文采用PSA吸附劑法，利用氣相色譜-質(zhì)譜法快速測定蔬菜中8種農(nóng)藥殘留，與傳統(tǒng)方法相比，該方法減少了樣品取樣量和降低提取溶劑的使用量，解決了分析上分析時間長、有毒溶劑使用量大等問題；并對方法的質(zhì)譜條件、提取條件及基質(zhì)干擾進行了系統(tǒng)的優(yōu)化，對方法的線性、檢出限、加標回收率、精密度、重復性進行了考查，研究得出，8種農(nóng)藥的檢出限范圍為在0.005 mg/kg～0.018 mg/kg，6次進樣相對標準偏差小于5%，回收率范圍為76.0%～95.3%。均符合農(nóng)藥殘留分析方法的要求。試驗證明，該方法具有操作簡單、準確度高、高效快速等優(yōu)點，為農(nóng)藥的多殘留檢測提供一定的參考價值。

表5 重復性試驗結果Table5 Repeatability test results