馬明月 謝永芳 曾垂省 舒坤賢

摘 要：骨骼肌收縮實(shí)驗(yàn)是生理解剖學(xué)等課程的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)之一，同時(shí)也是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中必須掌握的實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一，能夠?yàn)橐院笥嘘P(guān)實(shí)驗(yàn)打下基礎(chǔ)。在進(jìn)行骨骼肌收縮實(shí)驗(yàn)之前，需要掌握制備坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本的方法，并且標(biāo)本制備質(zhì)量的好壞直接關(guān)系到骨骼肌收縮實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象是否顯著。因此，文章將對影響坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本制備和影響骨骼肌收縮等多方面因素進(jìn)行考察，并針對問題提出改進(jìn)方法。

關(guān)鍵詞：腓腸??；收縮；因素；牛蛙

中圖分類號(hào)：G642 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：2096-000X（2018）03-0086-03

Abstract： The skeletal muscle contracting experiment is one of the basic experiments of physiological anatomy， and one of the fundamental skills in biological experiments. Before the experiment， the method of making sciatic nerve-gastrocnemius specimen whose quality directly exert on experiment results should be mastered. Therefore， this thesis attempts to analyze factors that impact on specimen's making and skeletal muscle， and to put forward improving solutions.

Keywords： gastrocnemius； contraction； factor； rana catesbiana

由重慶郵電大學(xué)生物學(xué)院開設(shè)的《生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)》課程，旨在通過對生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)課程的學(xué)習(xí)，使學(xué)生掌握和了解現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)的基本實(shí)驗(yàn)方法。同時(shí)，培養(yǎng)學(xué)生的觀察力和想象力，使學(xué)生能夠結(jié)合醫(yī)學(xué)工程、生物信息、體育等專業(yè)的需要，認(rèn)識(shí)人體作為一個(gè)整體，其各部分的功能活動(dòng)是如何互相協(xié)調(diào)、互相制約，以及如何在復(fù)雜多變的環(huán)境中維持正常的生命活動(dòng)。本課程提倡建立自己的學(xué)習(xí)方法、學(xué)習(xí)手段的學(xué)習(xí)，而不是局限于書本知識(shí)的學(xué)習(xí)，要求學(xué)生在本課程中學(xué)會(huì)創(chuàng)新性學(xué)習(xí)的初步方法，培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)問題、分析問題和解決問題的能力以及創(chuàng)新思維和創(chuàng)新能力，為以后的專業(yè)學(xué)習(xí)和終身學(xué)習(xí)打下扎實(shí)基礎(chǔ)。

針對《生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)》課程中的第一個(gè)實(shí)驗(yàn)——坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本制備與不同刺激強(qiáng)度和頻率對骨骼肌收縮的影響，也是大一新生進(jìn)校后的第一個(gè)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，該實(shí)驗(yàn)的地位極其重要。通過多次的實(shí)踐教學(xué)，現(xiàn)針對骨骼肌收縮實(shí)驗(yàn)的教學(xué)方法做出提出了部分改進(jìn)方法。具體探索過程如下：

一、實(shí)驗(yàn)方法

（一）實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)對象：常規(guī)實(shí)驗(yàn)中通常選擇蟾蜍為實(shí)驗(yàn)對象[1， 2]。

實(shí)驗(yàn)試劑為任氏液，也稱為林格氏液，是一種比較接近兩棲類動(dòng)物內(nèi)環(huán)境的液體。通常用于保持兩棲類動(dòng)物離體組織器官的生理活性、延長蛙心體外跳動(dòng)時(shí)長等。配置1升任氏液需要的成分劑量如下，首先依次加入32.5ml的20%氯化鈉（NaCL）、1.4ml的10%氯化鉀（KCL）、4.0ml的5%碳酸氫鈉（NaHCO3）、1.0ml的1%磷酸二氫鈉（NaH2PO4）以及2g的葡萄糖粉末（可不加），然后加入1.2ml的10%氯化鈣，最后加蒸餾水直至液體達(dá)到1000ml。由于氯化鈣容易引起沉淀，因此需要后加。

實(shí)驗(yàn)器材包括蛙類手術(shù)器械、蛙板、固定針、玻璃分針、鋅銅弓、SMUP-PC生理信號(hào)處理系統(tǒng)、肌槽、張力換能器等。鋅銅弓是由鋅片和銅片兩種金屬制成，具有刺激作用，用以檢驗(yàn)坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本的機(jī)能活性。肌槽用于固定坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本。張力換能器通常連接到臺(tái)式平衡記錄儀上，描記常規(guī)方法制備肌肉標(biāo)本的收縮情況。SMUP-PC生理信號(hào)處理系統(tǒng)集生物信號(hào)采集、放大、顯示、記錄與分析為一體，搭配Windows系統(tǒng)的圖文操作界面，在本實(shí)驗(yàn)中用來研究觀察刺激強(qiáng)度與骨骼肌反應(yīng)的關(guān)系實(shí)驗(yàn)、刺激頻率與骨骼肌反應(yīng)的關(guān)系。除此之外，SMUP-PC生理信號(hào)處理系統(tǒng)還可以探索蛙心灌流、動(dòng)脈血壓測定、呼吸運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)等多種實(shí)驗(yàn)。

（二）實(shí)驗(yàn)方法和過程

制備坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本，在制備標(biāo)本之前需要沖洗干凈實(shí)驗(yàn)動(dòng)物表面的污物，制備標(biāo)本的過程可以分為以下幾個(gè)步驟[3，4]。1.雙毀髓法處理實(shí)驗(yàn)對象，先將針尖向前刺入顱腔內(nèi)攪動(dòng)（單毀髓），再將毀髓針退回枕骨大孔，針尖轉(zhuǎn)向后方，平行刺入椎管內(nèi)搗毀脊髓，完成雙毀髓。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（蟾蜍或其他蛙類）四肢松軟、呼吸運(yùn)動(dòng)消失則說明毀髓成功。2.剝制后肢標(biāo)本，過程如圖1。3.分離兩后肢，如圖2a，使用粗剪刀沿縱向剪開脊柱，并剪斷兩后肢相連的肌肉組織，一只用于當(dāng)前標(biāo)本制備使用，另一只暫時(shí)置于任氏液中保存。4.分離坐骨神經(jīng)、游離腓腸肌，如圖2b-c，此過程中全程使用玻璃分針對坐骨神經(jīng)和腓腸肌進(jìn)行游離，待腓腸肌與其下結(jié)締組織分離后，在其跟腱處穿線、結(jié)扎。5.分離股骨頭，刮凈股骨周圍的肌肉組織，股骨的一半處剪斷。此時(shí)一個(gè)完整的坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本已經(jīng)制備完成（圖2d），最后使用鋅銅弓輕觸坐骨神經(jīng)，若腓腸肌呈現(xiàn)收縮現(xiàn)象，說明此標(biāo)本制備成功，可用于接下來收縮實(shí)驗(yàn)[5]。

檢驗(yàn)不同刺激強(qiáng)度、頻率對骨骼肌收縮的影響。第一步，固定標(biāo)本、連接裝置。將標(biāo)本的股骨固定于肌槽中，坐骨神經(jīng)置于刺激電極，腓腸肌上的棉線系于張力換能器的著力點(diǎn)上，調(diào)節(jié)肌槽與換能器之間的位置和距離，使絲線垂直、松緊度合適，使肌肉保持在自然拉長的長度。第二步，考察不同刺激強(qiáng)度、頻率下腓腸肌收縮的情況。打開微機(jī)、四路放大器，打開信號(hào)處理系統(tǒng)主界面，選擇“骨骼肌單收縮與復(fù)合收縮”程序，模擬不同程度的刺激強(qiáng)度和頻率。肌肉的收縮信號(hào)由壓力放大通道輸入處理系統(tǒng)。

二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

（一）刺激強(qiáng)度對腓腸肌收縮的影響

考察不同刺激強(qiáng)度與肌肉收縮力量之間的關(guān)系。蛙類腓腸肌的單收縮全程時(shí)間約為0.12秒。因此，間歇性地給予坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本刺激，可以觀察到隨著刺激強(qiáng)度的逐漸增加，腓肌肉收縮強(qiáng)度（即收縮力量）逐漸增強(qiáng)。但是當(dāng)肌肉達(dá)到最大收縮后，此后再增加刺激強(qiáng)度，收縮強(qiáng)度（或幅度）將不再增加。最大收縮是指此刺激強(qiáng)度使神經(jīng)干中全部神經(jīng)纖維興奮，其所支配的全部肌纖維全都發(fā)生興奮和收縮[6]。

（二）刺激頻率對腓腸肌收縮的影響

不同刺激頻率與肌肉收縮形式之間的關(guān)系。將刺激強(qiáng)度固定在最適強(qiáng)度，調(diào)整刺激頻率和刺激時(shí)間，觀察腓腸肌單收縮、復(fù)合收縮等收縮形式的變化?？梢园l(fā)現(xiàn)當(dāng)相繼兩個(gè)刺激的間隔大于單收縮總時(shí)程時(shí)，腓腸肌出現(xiàn)一連串的單收縮，在收縮波形上呈彼此分開的狀態(tài)（如圖3①）。逐漸增大刺激頻率，當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)相繼刺激間隔小于單收縮的總時(shí)程，但大于其收縮期時(shí)，肌肉收縮形式為不完全強(qiáng)直收縮，收縮波形呈現(xiàn)出鋸齒狀（如圖3②）。當(dāng)相繼多個(gè)刺激的間隔時(shí)間小于單收縮的收縮期時(shí)，肌肉收縮形式表現(xiàn)為為完全強(qiáng)直收縮[6]，即處于完全的持續(xù)的收縮狀態(tài)，不表現(xiàn)出舒張期的痕跡（如圖3③）。強(qiáng)直收縮的幅度同重大于單收縮的幅度，并且在一定范圍內(nèi)，保持刺激強(qiáng)度和作用時(shí)間不變，肌肉的收縮強(qiáng)度（或幅度）隨著刺激頻率的增加而增高，如圖3③和④的高度差異。

（三）其他因素對腓腸肌收縮的影響

本實(shí)驗(yàn)分別在10、11、12月份進(jìn)行了數(shù)次重復(fù)。發(fā)現(xiàn)10月份實(shí)驗(yàn)過程中腓腸肌收縮現(xiàn)象更加明顯，而12月份的實(shí)驗(yàn)中超過半數(shù)以上的牛蛙腓腸肌未出現(xiàn)任何收縮現(xiàn)象，猜測是由于氣溫降低的緣故。

除此之外，本實(shí)驗(yàn)選擇了從50g～150g重量不等的牛蛙作為實(shí)驗(yàn)對象。從實(shí)驗(yàn)操作和實(shí)驗(yàn)效果綜合來看，80～100g之間的牛蛙比較適合本實(shí)驗(yàn)。

三、教學(xué)方法改進(jìn)的總結(jié)

蛙類坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本的制備以及腓腸肌收縮實(shí)驗(yàn)在醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、體育學(xué)等研究和教學(xué)中具有重要作用，其目的是揭示骨骼肌收縮機(jī)制。通過本論文的反復(fù)實(shí)驗(yàn)實(shí)踐，我們認(rèn)為此教學(xué)實(shí)驗(yàn)可進(jìn)行如下改進(jìn)。

（一）實(shí)驗(yàn)材料的選擇

常規(guī)蛙類坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本制備實(shí)驗(yàn)中通常選擇蟾蜍作為實(shí)驗(yàn)對象，其原因?yàn)橐尊B(yǎng)殖、生長期短、價(jià)格便宜等。但是，蟾蜍的體表有疣粒，內(nèi)有毒腺。一方面，若實(shí)驗(yàn)操作不規(guī)范存在一定的風(fēng)險(xiǎn)性；另一方面，考慮到現(xiàn)在大學(xué)生的成長環(huán)境，對蟾蜍存在一定戒備心理，不利于實(shí)驗(yàn)完成。因此，建議選擇牛蛙作為本實(shí)驗(yàn)的對象。相對來說，牛蛙的取材更加方便，通常本地均可購買到，不受時(shí)間、環(huán)境等的限制；而且，牛蛙的表皮更加光滑、無疣粒等結(jié)構(gòu)，相對也更加安全。

關(guān)于實(shí)驗(yàn)對象大小的選擇。若實(shí)驗(yàn)牛蛙過大，缺點(diǎn)是剝制后肢過程中較困難，并且牛蛙的力氣會(huì)比較大不利于學(xué)生進(jìn)行毀髓操作，而優(yōu)點(diǎn)則是離體肌肉的生理活性強(qiáng)。若實(shí)驗(yàn)牛蛙過小，雖有利于剝離后肢，但缺點(diǎn)是必須快速制備標(biāo)本并立刻上機(jī)觀察，若耽擱稍久會(huì)造成后期收縮觀察不明顯。因此，建議選擇80～100g之間的牛蛙進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

（二）實(shí)驗(yàn)環(huán)境的要求

當(dāng)實(shí)驗(yàn)溫度維持在25攝氏度左右最佳。當(dāng)溫度過高時(shí)，會(huì)使骨骼肌在標(biāo)本制備階段處于較為興奮狀態(tài)，影響后期刺激強(qiáng)度、頻率與骨骼肌收縮關(guān)系的觀察；當(dāng)溫度較低時(shí)，骨骼肌的收縮效果較差。由于溫度限制，特別是中西部地區(qū)學(xué)校，冬季進(jìn)行本實(shí)驗(yàn)會(huì)出現(xiàn)效果不明顯。因此建議將“骨骼肌收縮實(shí)驗(yàn)”設(shè)置在每年的4、5或10月份開設(shè)。

（三）實(shí)驗(yàn)操作——雙毀髓法

本實(shí)驗(yàn)操作中運(yùn)用雙毀髓方法處理牛蛙。雖然，此方法能夠排除神經(jīng)中樞對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。但是，學(xué)生在不熟練的情況下，特別是首次操作的過程中會(huì)出現(xiàn)以下問題，a.毀髓針扎到內(nèi)臟，碰觸或破壞坐骨神經(jīng)；b.握姿不準(zhǔn)確，嚴(yán)重破壞牛蛙肌肉等的生理活動(dòng)。以上情況都會(huì)直接導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。因此，建議在實(shí)施雙毀髓操作前先使用乙醚麻醉牛蛙，此法既不影響牛蛙的生理活動(dòng)，也便于學(xué)生們的毀髓操作。

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