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        間充質(zhì)干細(xì)胞制劑保存穩(wěn)定性探索

        2018-07-09 10:58:20婁云云
        生物化工 2018年3期
        關(guān)鍵詞:活率充質(zhì)臍帶

        婁云云

        (協(xié)和干細(xì)胞基因工程有限公司,天津 300384)

        間充質(zhì)干細(xì)胞具有自我更新和多向分化以及強(qiáng)烈的免疫調(diào)節(jié)功能,同時(shí),其免疫原性低,在治療多種血液病的異基因造血干細(xì)胞移植后發(fā)生的移植物抗宿主病、自身免疫性疾病、糖尿病、克隆氏病等疾病治療中均顯示出良好效果[1-2]。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的來(lái)源為易得、變廢為寶的臍帶,因而受到越來(lái)越多研究者的關(guān)注,并大量從基礎(chǔ)研究轉(zhuǎn)入臨床應(yīng)用。臨床使用細(xì)胞產(chǎn)品其治療的有效成分為鮮活的干細(xì)胞,就必須從其生產(chǎn),保存,運(yùn)輸?shù)人协h(huán)節(jié)保證干細(xì)胞的活性,因而我們專門針對(duì)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞制劑保存的質(zhì)量參數(shù)做了試驗(yàn)。

        1 材料及方法

        臍帶組織塊貼壁培養(yǎng)法分離培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,經(jīng)培養(yǎng)提取后,置于含2%人血白蛋白、65 IU/mL低分子肝素鈣和復(fù)方電解質(zhì)注射液的干細(xì)胞保存液,制成臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液三批成品,標(biāo)記為17121801、17121802、17121803。分別在室溫(23 ℃)和4 ℃條件下保存。并均于0、2、4、6、8、10、12 h和24 h抽樣,對(duì)其進(jìn)行物理檢查和細(xì)胞存活率測(cè)定,并進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)。

        2 試驗(yàn)檢測(cè)

        性狀:目測(cè)應(yīng)無(wú)色均勻細(xì)胞懸液,無(wú)明顯沉淀,無(wú)異物為合格。

        細(xì)胞活率檢測(cè):采用Count star自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù);臺(tái)盼藍(lán)拒染法進(jìn)行活率測(cè)定,應(yīng)不低于90%。

        無(wú)菌檢測(cè):按梅里埃Bact/Alert 3D 120型全自動(dòng)血培養(yǎng)無(wú)菌檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè),上機(jī)培養(yǎng)7天,結(jié)果應(yīng)為陰性。

        計(jì)算細(xì)胞活率:細(xì)胞存活率計(jì)算采用計(jì)數(shù)300個(gè)細(xì)胞,其中活細(xì)胞所占的比率。每組重復(fù)5次,取平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。以方差分析進(jìn)行組間數(shù)據(jù)平均值統(tǒng)計(jì),兩兩比較采用q檢驗(yàn)。其中P<0.05表示差異有顯著性,P<0.01表示差異有極顯著性。

        3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果對(duì)比

        3.1 性狀、無(wú)菌檢測(cè)結(jié)果

        兩種保存溫度下,不同保存時(shí)間的3批次制劑性狀均無(wú)明顯變化為合格,無(wú)菌檢測(cè)結(jié)果均為陰性。

        3.2 細(xì)胞活率檢測(cè)結(jié)果

        在室溫條件下,3批樣品0~6 h細(xì)胞活率降低緩慢,活率均在90%以上。而6 h之后細(xì)胞活率降低較快且低于90%,為不合格。

        在4℃條件下保存24 h,細(xì)胞存活率可維持在90%以上,隨保存時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸降低。保存前后物理檢查及無(wú)菌檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定,均無(wú)異常。結(jié)果詳見(jiàn)表1。

        4 結(jié)論

        3批樣品在室溫條件下保存24 h,性狀、無(wú)菌指標(biāo)均無(wú)明顯變化。0~6 h細(xì)胞活率降低緩慢,且活率均在90%以上。而6 h之后細(xì)胞活率降低較快且不合格。而在4 ℃保存24 h存活率可維持在90%以上,隨保存時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸降低。保存前后物理檢查及無(wú)菌檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定,均無(wú)異常。因此,可定臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液保質(zhì)期為24 h,保存溫度為4 ℃。

        表1 細(xì)胞活率檢測(cè)結(jié)果

        [1]Subbanna PK. Mesenchymal Stem Cells for Treating GVHD: in-vivo fate and Optimal Dose[J]. Med Hypotheses, 2007.69(2):469-670.

        [2]Tyndall A, FA Houssiau. Mesenchymal Stem Cells in the Treatment of Autoimmune Diseases[J]. Ann Rheum Dis,2010,69(8):1413-1414.

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