王 麗

(天津市南開區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，天津 300102)

玉屏風(fēng)顆粒由黃芪、防風(fēng)、白術(shù)3味中藥組成，黃芪為處方中的君藥，測定黃芪甲苷的含量將有助于有效控制玉屏風(fēng)顆粒的質(zhì)量[1]。本研究擬建立高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法檢測玉屏風(fēng)顆粒中主要成分黃芪甲苷的含量，以便控制玉屏風(fēng)顆粒的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1儀器 1260高效液相色譜儀(美國安捷倫科技有限公司)，M-400型蒸發(fā)光散射檢測器(美國SOFTA 公司)，分析天平(型號(hào)：AUW-120D，日本島津公司)。

1.2試藥 黃芪甲苷對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)1110781-201506)；玉屏風(fēng)顆粒(廣東環(huán)球制藥有限公司，批號(hào)為201611005，201612011，201612015)。乙腈(色譜純，西隴化工股份有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：迪馬C18(ODS2，150 mm×4.6 mm，5 μm)，乙腈-水(30∶70)為流動(dòng)相，流速為1 ml/min，以蒸發(fā)光散射檢測器作為檢測器進(jìn)行檢測，漂移管的溫度110 ℃，載氣的流量2.0 L/min，進(jìn)樣量為10 μl。理論板數(shù)按黃芪甲苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000[2]。

2.2溶液制備

2.2.1對(duì)照品溶液的制備 取黃芪甲苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含0.158 mg的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2.2供試品溶液的制備 取玉屏風(fēng)顆粒適量，研細(xì)，取約2.0 g，精密稱定，置于100 ml錐形瓶中，加甲醇50 ml，超聲提取60 min，取出，放冷，搖勻，濾過至50 ml量瓶中，用甲醇定容，精密量取續(xù)濾液25 ml，置于蒸發(fā)皿中，蒸干，殘?jiān)?5 ml正丁醇(水飽和)溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加15 ml氨試液洗滌3次，分取正丁醇層，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜?0 ml量瓶中，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3陰性對(duì)照溶液的制備 按處方量，分別稱取除黃芪外的藥材，制成玉屏風(fēng)顆粒陰性樣品，再按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.3系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10 μl，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定。此色譜條件下，黃芪甲苷與其他成分無干擾，保留時(shí)間為13.5 min，結(jié)果見圖1。

1.黃芪甲苷

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線 分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液5、7.5、10、15和20 ml置25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，配成濃度分別為31.6、47.4、63.2、94.8和126.4 μg/ml的對(duì)照品溶液[3]。分別精密吸取上述5種濃度的黃芪甲苷對(duì)照品溶液與儲(chǔ)備液各10 μl，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定。以黃芪甲苷濃度為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，可得回歸方程為：Y=16 152X-4 729(r=0.999 8)。結(jié)果顯示黃芪甲苷在31.6～158 μg/ml的濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.5精密度試驗(yàn) 取玉屏風(fēng)顆粒(批號(hào)201611005)，依“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣6次，測得黃芪甲苷峰面積的RSD為1.77%，結(jié)果顯示精密度較好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 取玉屏風(fēng)顆粒(批號(hào)201611005)的供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12和24 h時(shí)，精密吸取10 μl，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，黃芪甲苷峰面積的RSD為1.92%，結(jié)果顯示玉屏風(fēng)顆粒供試品溶液在24 h內(nèi)較穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗(yàn) 取玉屏風(fēng)顆粒(批號(hào)201611005)，依“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，分別精密吸取10 μl，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，黃芪甲苷峰面積的RSD為1.56%，結(jié)果顯示該方法重復(fù)性較好。

2.8加樣回收率試驗(yàn) 取同一批玉屏風(fēng)顆粒(批號(hào)201611005)樣品共6份，每份1.0 g，精密稱定，分別加入1.622 mg/ml的黃芪甲苷對(duì)照品溶液各0.5 ml，依“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別精密吸取各供試品溶液10 μl，將其注入高效液相色譜儀，依“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算樣品的加樣回收率，結(jié)果平均加樣回收率為99.58%，RSD為0.75%。見表1。

表1 黃芪甲苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.9樣品中黃芪甲苷的含量測定 取供試品3批，依“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，計(jì)算樣品中黃芪甲苷的平均含量，見表2。

表2 3批樣品含量測定結(jié)果

3 討論

3.1檢測波長的確定 黃芪甲苷的結(jié)構(gòu)比較特殊，位于紫外吸收的末端，采用紫外檢測器時(shí)，干擾會(huì)比較大，影響黃芪甲苷的含量測定，蒸發(fā)光散射檢測器能夠克服紫外檢測器的不足，且不會(huì)出現(xiàn)基線漂移[4]，故而本研究采用了蒸發(fā)光散射檢測器對(duì)玉屏風(fēng)顆粒中黃芪甲苷的含量進(jìn)行測定。

3.2流動(dòng)相的確定 本試驗(yàn)選用多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道中的乙腈-水作為流動(dòng)相，但對(duì)流動(dòng)相的比例進(jìn)行了適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，即乙腈-水為(30∶70)，結(jié)果顯示，該比例的流動(dòng)相可有效分離黃芪甲苷，無其他成分干擾，且出峰時(shí)間比較適中。

本研究所建立的高效液相-蒸發(fā)光散射檢測法測定玉屏風(fēng)顆粒中黃芪甲苷含量，具有操作簡便、重現(xiàn)性好、靈敏度高等特點(diǎn)，可用于玉屏風(fēng)顆粒中黃芪甲苷的含量測定。

1 朱燕,黃義純,藍(lán)獻(xiàn)泉,等.HPLC-ELSD法測定復(fù)方天麻蜜環(huán)糖肽片中黃芪甲苷含量[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào),2017,33(3):252-254

2 王振濤,常紅波,黃海英,等.抗纖益心濃縮丸中黃芪甲苷、丹參酮ⅡA的含量測定[J].中醫(yī)學(xué)報(bào),2016,31(11):1750-1753

3 林帥軍,崔燕兵,邢志霞,等.HPLC-ELSD法測定乙肝益氣解郁顆粒中黃芪甲苷的含量[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2017,23(5):47-49

4 周穎儀,劉瀟瀟.反相高效液相色譜法測定消渴平片中黃芪甲苷的含量[J].中國醫(yī)院用藥評(píng)價(jià)與分析,2016,16(7):886-889