王俊蘋(píng)

近年來(lái)，分子生物學(xué)得到了迅速發(fā)展，DNA分子標(biāo)記是繼形態(tài)學(xué)標(biāo)記、生化標(biāo)記和細(xì)胞學(xué)標(biāo)記之后發(fā)展起來(lái)的新型遺傳標(biāo)記法，已廣泛應(yīng)用于園藝植物上。其優(yōu)點(diǎn)主要有數(shù)量多、多態(tài)性高、可直接反映生物基因組多態(tài)性，可應(yīng)用于重要性狀基因標(biāo)記、連鎖圖譜構(gòu)建、標(biāo)記輔助選擇及遺傳多樣性分析等方面，在植物遺傳育種和基因組研究中發(fā)揮著重要作用。目前AFLP、ISSR、SRAP、RFLP是應(yīng)用中最普遍的分子標(biāo)記方法。目前分子標(biāo)記技術(shù)在園藝植物中得到了廣泛應(yīng)用，但由于技術(shù)尚未成熟，還沒(méi)有一種理想的DNA標(biāo)記技術(shù)。

1 AFLP

AFLP（Amplified Fragment

Length Polymorphism，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性），被譽(yù)為“第三代分子標(biāo)記技術(shù)”，結(jié)合了RFLP（Restricted Fragment Length Polymorphism，限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性）技術(shù)與PCR技術(shù)的特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于植物分子標(biāo)記篩選、親緣關(guān)系分析、遺傳多樣性的研究以及高密度遺傳圖譜的構(gòu)建，在植物遺傳學(xué)和育種學(xué)領(lǐng)域中顯示了廣闊的應(yīng)用前景。目前AFLP在水稻、小麥、大豆、大麥、馬鈴薯、玉米、棉花、番茄、擬南芥等植物遺傳育種研究中發(fā)揮了重要作用。AFLP的優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)的多態(tài)性高、對(duì)模板濃度不敏感、不需要了解序列信息，一次性檢測(cè)信息量大、處理樣品數(shù)量多。AFLP的缺點(diǎn)是顯性標(biāo)記，不利于群體遺傳結(jié)構(gòu)的分析；對(duì)DNA的純度以及內(nèi)切酶的質(zhì)量要求較高；步驟繁瑣、成本高、操作技術(shù)難度大等。

2 ISSR

ISSR（Inter-Simple Sequence Repeat，即簡(jiǎn)單重復(fù)間序列標(biāo)記），是從微衛(wèi)星序列（Simple Sequence Repeats，簡(jiǎn)單序列重復(fù)）發(fā)展而來(lái)的分子標(biāo)記技術(shù)，在作物的基因定位、遺傳圖譜構(gòu)建、品種純度鑒定及分子標(biāo)記輔助育種遺傳多樣性研究方面得到了廣泛應(yīng)用。ISSR的優(yōu)點(diǎn)是不須使用同位素，可以檢測(cè)更高程度的DNA多態(tài)性，提供更多的關(guān)于基因組的信息；引物易設(shè)計(jì)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性強(qiáng)；操作過(guò)程簡(jiǎn)單、檢測(cè)迅速、靈敏度高、穩(wěn)定高效。ISSR的缺點(diǎn)是ISSR標(biāo)記呈孟德?tīng)柺竭z傳，大部分為顯性標(biāo)記，不能區(qū)分顯性純合基因型和雜合基因型，所以在解決交配系統(tǒng)、計(jì)算雜合度與父系分析等問(wèn)題上效果不佳。

3 SRAP

SRAP（Sequence-Related Amplified Polymorphism，相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性），SRAP標(biāo)記的核心之一是采用復(fù)性變溫法擴(kuò)增；另一核心就是根據(jù)外顯子中GC含量豐富，而啟動(dòng)子和內(nèi)含子中AT含量豐富的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)一對(duì)獨(dú)特的引物以特異擴(kuò)增開(kāi)放閱讀框（ORFs）。目前已成功應(yīng)用于作物重要性狀的標(biāo)記、遺傳圖譜的構(gòu)建、遺傳多樣性分析以及相關(guān)基因的克隆等方面。SRAP的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性和重復(fù)性好，標(biāo)記位點(diǎn)在基因組中分布相對(duì)均勻，易測(cè)序、便于克隆目標(biāo)片段，通用性高，成本較低。SRAP的缺點(diǎn)是引物長(zhǎng)短較為關(guān)鍵，經(jīng)試驗(yàn)17～18bp最佳，較長(zhǎng)會(huì)在放射自顯影時(shí)背景太強(qiáng)，而較短則易產(chǎn)生多重條帶且重復(fù)性差；因?yàn)镾RAP標(biāo)記是對(duì)ORFs進(jìn)行擴(kuò)增，所以會(huì)較少擴(kuò)增基因稀少的著絲粒附近的區(qū)域及端粒區(qū)域。