杜小弟,李俊升,郭麗萍,雷家珩

(武漢理工大學(xué) 化學(xué)化工與生命科學(xué)學(xué)院 化學(xué)系，湖北 武漢 430070)

圖1 銀杏酸的結(jié)構(gòu)式Fig.1 Structural formula of Ginkgolic acids

銀杏是中國(guó)特有的藥用植物，在延緩衰老、改善血液循環(huán)、治療心腦血管疾病等方面有一定療效[1-3]。但臨床發(fā)現(xiàn)銀杏可導(dǎo)致接觸過(guò)敏性皮炎，并存在潛在的細(xì)胞毒性、神經(jīng)毒性等副作用[4-5]。研究認(rèn)為，銀杏酸(Ginkgolic acids,GAs)是引起副作用的重要原因[6]。較為常見(jiàn)的銀杏酸包括GA13∶0、GA15∶1、 GA17∶2、GA15∶0和GA17∶1，其結(jié)構(gòu)如圖1所示。

對(duì)于藥用標(biāo)準(zhǔn)的銀杏葉提取物(Extracts of Ginkgo biloba,EGB)，國(guó)外藥典不僅規(guī)定了其有效成分的含量，還限定了總銀杏酸的含量不得超過(guò)5 mg/kg[7-8]，我國(guó)藥典也有類似規(guī)定[9]。因此，需要建立一種檢測(cè)EGB及其制劑中銀杏酸含量的簡(jiǎn)便、可靠、靈敏的方法。EGB中的銀杏酸可以通過(guò)液相色譜(HPLC)、氣相色譜(GC)、薄層色譜(TLC)等方法進(jìn)行測(cè)定[10-11]。但薄層色譜的準(zhǔn)確度和靈敏度均不高，氣相色譜法需衍生化處理[12]，僅液相色譜法應(yīng)用最為廣泛。Fuzzati等[13]開(kāi)發(fā)的提取液直接進(jìn)樣、液相色譜紫外檢測(cè)器(HPLC/UV)測(cè)定銀杏酸的方法由于簡(jiǎn)便性突出，且經(jīng)過(guò)了完善的方法學(xué)確認(rèn)，被采納為歐盟藥典中檢測(cè)EGB的標(biāo)準(zhǔn)方法[7]。然而該方法存在以下不足：①不經(jīng)分離直接進(jìn)樣，雖然方法簡(jiǎn)便，但基體干擾較為顯著；②為提高靈敏度而使用較大的進(jìn)樣量(50 μL)和較低的檢測(cè)波長(zhǎng)(210 nm)，使得基體干擾和基線噪音問(wèn)題更加突出，因此該方法在應(yīng)用中仍需改進(jìn)[14-15]。而且該方法的檢出限僅能夠滿足EGB中銀杏酸的限量檢測(cè)，對(duì)于含量更低的EGB制劑(如銀杏葉片、銀杏葉滴丸等)則難以測(cè)定。為提高測(cè)定的靈敏度、減小復(fù)雜基體的干擾，研究者嘗試使用液液萃取(LLE)[16]、固相萃取(SPE)[17]等方法以降低基體干擾，但操作較為繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)。也有采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用(UHPLC-MS/MS)測(cè)定微量銀杏酸的方法[18]，但儀器昂貴不便推廣。

近年來(lái)，在線二維色譜在中藥成分研究方面得到了廣泛應(yīng)用[19]，以此為基礎(chǔ)的在線分離富集方法已有一定的研究[20-21]。有學(xué)者通過(guò)全二維色譜對(duì)銀杏成分進(jìn)行定性研究[22]，但未進(jìn)行定量分析。有文獻(xiàn)通過(guò)雙柱切換的方法測(cè)定銀杏葉中的銀杏酸含量[23]，在消除基體干擾方面有一定效果，但未能實(shí)現(xiàn)富集，難以適用于微量銀杏酸的測(cè)定。為減少基體干擾，同時(shí)實(shí)現(xiàn)微量銀杏酸的富集，本文搭建了在線二維色譜系統(tǒng)，將大體積的試樣通過(guò)第一維色譜分離實(shí)現(xiàn)富集和除去基體干擾，然后通過(guò)閥切換直接將目標(biāo)物引入第二維色譜分離進(jìn)行定量檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)EGB及其制劑中微量銀杏酸的準(zhǔn)確測(cè)定。

圖2 二維色譜系統(tǒng)的構(gòu)成和閥切換示意圖Fig.2 Schematic of the two-dimensional liquid chromatography system and the valve switching

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與材料

在線二維色譜系統(tǒng)由2臺(tái)LC-20AD高壓恒流泵(日本島津公司)、1臺(tái)SPD-20A紫外檢測(cè)器(日本島津公司)、1個(gè)7725i手動(dòng)進(jìn)樣閥(配300 μL定量環(huán)，美國(guó)Rheodyne公司)、1個(gè)7000型高壓切換閥(美國(guó)Rheodyne公司)和2根色譜柱組成，示意圖見(jiàn)圖2。其中柱1為ZORBAX Eclipse Plus-C18(2.1 mm×12.5 mm,5 μm)，柱2為ZORBAX Eclipse Plus-C18(2.1 mm×150 mm,5 μm)，均購(gòu)于美國(guó)安捷倫公司。進(jìn)樣閥、切換閥和色譜柱均安裝在CTO-10ASvp柱溫箱(日本島津公司)內(nèi)。

EGB試樣為湖北盛天恒創(chuàng)公司生產(chǎn)，EGB制劑試樣為市售銀杏葉片藥物(金納多)。混合銀杏酸標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)于武漢天植生物技術(shù)公司，總含量不低于99%，其中GA13∶0占10.1%，GA15∶1占50.5%，GA17∶1占34.7%，GA17∶2占1.7%，GA15∶0占3.0%。用甲醇溶解配制成總銀杏酸質(zhì)量濃度為1.000 g/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4 ℃保存。使用時(shí)以甲醇-水-三氟乙酸混合液(體積比80∶20∶0.01)稀釋成所需濃度的工作標(biāo)液。

甲醇、乙腈為色譜純(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，三氟乙酸(純度99%，阿拉丁試劑上海有限公司)，實(shí)驗(yàn)用水為二次蒸餾水。

1.2 色譜條件

泵1和柱1為第一維分離，流動(dòng)相為甲醇-水-三氟乙酸混合液(體積比80∶20∶0.01)，流速0.25 mL/min。泵2和柱2為第二維分離，流動(dòng)相為甲醇-水-三氟乙酸混合液(體積比90∶10∶0.01)，流速0.25 mL/min。柱溫均為30 ℃。紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)為310 nm。進(jìn)樣量為300 μL(300 μL定量環(huán)全充滿)。切換閥處于圖2A所示狀態(tài)時(shí)，進(jìn)樣4.5 min，后將切換閥切換至圖2B所示狀態(tài)。測(cè)定結(jié)束后切換回圖2A狀態(tài)，平衡2 min后進(jìn)行下次測(cè)定。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

樣品測(cè)定：準(zhǔn)確稱取EGB樣品(或粉碎后的制劑樣品)0.500 g置于10 mL比色管中，加入甲醇8.0 mL，常溫下超聲提取10 min，加水定容至10.0 mL，用微量注射器加入三氟乙酸1.0 μL?；靹蚝笥?.45 μm尼龍濾膜過(guò)濾，收集濾液，按“1.2”所述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。

樣品加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)：準(zhǔn)確稱取EGB樣品(或粉碎后的制劑樣品)0.500 g置于10 mL比色管中，準(zhǔn)確加入總銀杏酸質(zhì)量濃度為0.100 g/L的工作標(biāo)液25.0 μL(相當(dāng)于樣品加標(biāo)5 mg/kg)或50.0 μL(相當(dāng)于樣品加標(biāo)10 mg/kg)，后續(xù)操作與樣品測(cè)定相同。

1.4 對(duì)照方法

參照歐洲藥典EP8.0所述方法[8]：準(zhǔn)確稱取EGB樣品0.500 g，用10.0 mL甲醇超聲提取，提取液過(guò)濾后直接進(jìn)行色譜測(cè)定。色譜柱為Zorbax XDB-C8(4.6 mm×150 mm，5 μm，美國(guó)安捷倫公司)，流動(dòng)相：A為0.01% 三氟乙酸乙腈溶液，B為0.01%三氟乙酸水溶液；梯度洗脫程序：初始為75%A，30 min線性改變至90%A；流速1.00 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，進(jìn)樣量50.0 μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 實(shí)驗(yàn)條件考察

2.1.1二維色譜系統(tǒng)的構(gòu)建在圖2所示的二維色譜系統(tǒng)中，柱1進(jìn)行第一維分離，使目標(biāo)物與大部分基體干擾物分開(kāi)。同時(shí)，通過(guò)大體積進(jìn)樣，使目標(biāo)物被吸附在柱1上，從而實(shí)現(xiàn)富集。通過(guò)閥切換將柱1接入第二維，通過(guò)第二維的流動(dòng)相將柱1上富集的目標(biāo)物洗脫，并在柱2上實(shí)現(xiàn)進(jìn)一步的分離和定量檢測(cè)。第二維中的柱2為分析柱，參考文獻(xiàn)[14-19]中銀杏酸的測(cè)定方法，選擇十八烷基(C18)固定相，流動(dòng)相為甲醇-水-三氟乙酸混合液(體積比90∶10∶0.01)。選擇2.1 mm內(nèi)徑的窄內(nèi)徑色譜柱，在相同的進(jìn)樣體積下，獲得的靈敏度為4.6 mm標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)徑柱的4～5倍。

第一維中柱1除了達(dá)到預(yù)分離基體的目的外，還需對(duì)大體積樣品中的目標(biāo)物進(jìn)行富集，因此需對(duì)目標(biāo)物有較強(qiáng)的保留能力,比較了十八烷基(C18)、辛烷基(C8)、氰基(CN)3種鍵合固定相的效果。C8和CN固定相對(duì)銀杏酸的保留能力較弱，富集效果差，需使用50 mm以上的長(zhǎng)柱才能完全吸附大體積樣品中的目標(biāo)物，但長(zhǎng)柱導(dǎo)致目標(biāo)物洗脫速度慢，峰展寬嚴(yán)重;而C18固定相對(duì)銀杏酸的保留較強(qiáng)，使用12.5 mm的短柱即可實(shí)現(xiàn)數(shù)百微升試樣中目標(biāo)物的富集，且短柱可以被快速洗脫，峰形尖銳。

2.1.2第一維色譜條件的選擇第一維分離需要在柱1上將基體與目標(biāo)物初步分離。為考察分離效果，分別測(cè)定了試樣溶液和標(biāo)液在柱1上流出的色譜圖。當(dāng)?shù)谝痪S以甲醇-水-三氟乙酸混合液(體積比80∶20∶0.01)為流動(dòng)相時(shí)，所得色譜圖見(jiàn)圖3。此條件下，基體主要成分的流出時(shí)間約在4 min內(nèi)，目標(biāo)物銀杏酸的流出時(shí)間約在5 min后，基本可實(shí)現(xiàn)分離。當(dāng)甲醇-水體積比降至70∶30時(shí)，雖然目標(biāo)物的流出時(shí)間更長(zhǎng)，但基體的洗脫相應(yīng)變慢，且峰形拖尾更明顯，分離效果未改善。當(dāng)甲醇-水體積比增至90∶10時(shí)，目標(biāo)物流出太快，無(wú)法實(shí)現(xiàn)分離。

圖3 銀杏酸標(biāo)樣(A)與EGB試樣基體(B)在第一維上的色譜圖Fig.3 Chromatograms of GAs standard(A) and EGB sample matrix(B) on the first dimension

圖4 樣品溶劑對(duì)色譜結(jié)果的影響Fig.4 Effect of solvent on chromatograms 3 μL injection of GAs standard sample(25.0 mg/L) with the solvent of methanol(a),and 300 μL injection of GAs standard sample(0.250 mg/L) in the solvent of absolute methanol(b),90% methanol(c),80% methanol(d)

根據(jù)圖3確定六通閥的切換時(shí)間為4.50 min。若切換時(shí)間提前，則會(huì)引入較多的基體組分，對(duì)第二維分離不利。若切換時(shí)間大于5.00 min，將導(dǎo)致目標(biāo)物損失，使回收率顯著降低。

2.1.3試樣溶劑及進(jìn)樣體積對(duì)富集效果的影響2.1 mm內(nèi)徑的色譜柱進(jìn)樣量通常不超過(guò)5 μL。為實(shí)現(xiàn)富集，第一維須大體積進(jìn)樣。由于進(jìn)樣體積很大時(shí)溶劑的洗脫作用會(huì)較為顯著，從而影響色譜結(jié)果。以甲醇為溶劑配制的GAs標(biāo)樣(25.0 mg/L)在進(jìn)樣體積為3 μL時(shí)，獲得的色譜圖見(jiàn)圖4a，其中除GA17∶1由于異構(gòu)體的存在表現(xiàn)為雙峰外，其余4種目標(biāo)物均具有尖銳的峰形。當(dāng)使用GAs標(biāo)樣(0.250 mg/L，甲醇溶劑)進(jìn)樣300 μL時(shí)，由于溶劑甲醇的強(qiáng)洗脫作用，導(dǎo)致目標(biāo)物在閥切換之前被洗脫，各目標(biāo)物明顯損失，且峰寬顯著增大(見(jiàn)圖4b)。當(dāng)溶劑中甲醇-水體積比為90∶10時(shí)(GAs濃度為0.250 mg/L)，溶劑的洗脫能力仍比流動(dòng)相強(qiáng)，富集效果不佳，峰寬較大(見(jiàn)圖4c)。當(dāng)溶劑中甲醇-水體積比為80∶20(GAs質(zhì)量濃度為0.250 mg/L)，即溶劑與流動(dòng)相組成一致時(shí)，溶劑的影響基本可以忽略，峰面積與圖4d接近，說(shuō)明富集效果較好，靈敏度提高近100倍，而且峰形尖銳，與小體積進(jìn)樣時(shí)的分離效果一致。

雖然大體積進(jìn)樣可實(shí)現(xiàn)富集，但隨著進(jìn)樣體積的增大，各目標(biāo)物的峰形逐漸展寬。考察了半峰寬隨進(jìn)樣體積的變化，結(jié)果表明當(dāng)進(jìn)樣體積在300 μL以下時(shí)峰寬變化不大，當(dāng)進(jìn)樣體積超過(guò)300 μL時(shí)峰寬增加較為明顯。因此選擇最佳進(jìn)樣體積為300 μL。

2.2 方法學(xué)考察

通過(guò)配制不同含量的模擬樣考察了方法的線性范圍，以各目標(biāo)物的峰面積對(duì)其含量進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見(jiàn)表1。5種銀杏酸在0.200～100.0 mg/kg范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(r2)不低于0.998。配制一系列低濃度的銀杏酸標(biāo)樣測(cè)定信噪比(S/N)，分別以S/N=3和S/N=10計(jì)算檢出限和定量下限(見(jiàn)表1)。5種銀杏酸的檢出限為0.02～0.06 mg/kg，定量下限為0.05～0.19 mg/kg。本方法不僅適用于EGB樣品中銀杏酸的測(cè)定，還適用于EGB制劑中更微量銀杏酸含量的測(cè)定。

表1 5種銀杏酸的線性關(guān)系、檢出限及定量下限Table 1 Linear relationship,limits of detection(LODs) and limits of quantitation(LOQs) of 5 ginkgolic acids

*Y:peak area;X:mass concentration(mg/kg)

圖5 本方法對(duì)不同色譜柱的適應(yīng)性Fig.5 Adaptability of this method to different columnsa.ZORBAX Eclipse Plus-C18,b.XDB-C18,c.Hypersil GOLD-C18,d.SinoChrome ODS-BP

進(jìn)一步對(duì)方法的適應(yīng)性和耐用性進(jìn)行了考察。除“1.1”所述的色譜柱外，另選用了不同廠家不同型號(hào)的3種色譜柱，包括安捷倫公司XDB-C18、Thermo公司Hypersil GOLD-C18、大連依利特公司SinoChrome ODS-BP(柱尺寸規(guī)格與“1.1”相同)。4種色譜柱的分離效果對(duì)比見(jiàn)圖5。結(jié)果表明，不同型號(hào)的色譜柱雖對(duì)待測(cè)物的保留時(shí)間有所差異，但均能有效富集和分離，且分離效果和柱效均較理想，對(duì)GA13∶0的柱效不低于6 000理論塔板數(shù)，除GA17∶1的順?lè)串悩?gòu)體外，其余各銀杏酸的分離度不低于1.5。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步考察了色譜條件發(fā)生微小變化時(shí)的分離效果，結(jié)果表明，檢測(cè)波長(zhǎng)(±5 nm)、柱溫(±10 ℃)、流速(±0.05 mL/min)的微小變化對(duì)測(cè)定效果影響不明顯。以上實(shí)驗(yàn)表明本方法具有較好的適應(yīng)性和耐用性。

2.3 實(shí)際樣品檢測(cè)

取市售EGB試樣和EGB制劑試樣按本方法進(jìn)行處理和測(cè)定，以銀杏酸純品作為對(duì)照樣進(jìn)行定量，結(jié)果見(jiàn)表2。對(duì)照樣的色譜圖見(jiàn)圖6a，EGB試樣的色譜圖見(jiàn)圖6b。對(duì)于EGB試樣，本方法具有很好的重現(xiàn)性，各目標(biāo)物測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均不超過(guò)5.0%，總銀杏酸結(jié)果的RSD小于3.0%。對(duì)于EGB制劑，由于其中銀杏酸含量較低，GA15∶0未檢出，GA17∶2和GA17∶1能檢出但低于定量下限，對(duì)于含量較高的GA13∶0和GA15∶1可有效測(cè)定且RSD不超過(guò)5.0%，總銀杏酸結(jié)果的RSD為4.8%。

表2 EGB和EGB制劑試樣中銀杏酸含量的測(cè)定結(jié)果Table 2 Determination results of ginkgolic acids in EGB sample and EGB troche sample

*mean±SD,n=5;**mean±SD,n=5,measured by the control method described in Section“1.4”;***below the limit of quantitation

圖6 本方法測(cè)定EGB試樣和加標(biāo)試樣的色譜圖Fig.6 Chromatograms of EGB sample and spiked EGB sample obtained by using proposed methoda.GAs standard sample(0.25 mg/L),b.EGB sample,c.spiked EGB sample at content level of 5 mg/kg for total GAs

考慮到藥典對(duì)EGB中總銀杏酸的限量為5 mg/kg[7-8]或10 mg/kg[9]，而實(shí)際樣品中的含量值一般與限量值接近，因此對(duì)EGB試樣進(jìn)行了總銀杏酸為5、10 mg/kg兩個(gè)濃度水平的加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3。不同加標(biāo)水平下，各目標(biāo)物的回收率為94.0%～101.3%，總銀杏酸的回收率接近100%，表明方法具有較高的準(zhǔn)確度。總銀杏酸5 mg/kg加標(biāo)水平的色譜圖見(jiàn)圖6c。

圖7 對(duì)照方法測(cè)定EGB試樣的色譜圖Fig.7 Chromatograms of EGB sample obtained by using the control methoda.GAs standard(0.25 mg/L),b.EGB sample

以歐盟藥典方法[8]作為對(duì)照方法進(jìn)行了對(duì)照實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。對(duì)于單一銀杏酸，本方法測(cè)定結(jié)果與對(duì)照方法具有較好的一致性，且精密度優(yōu)于對(duì)照方法。在靈敏度方面，對(duì)照方法的檢出限約為0.3～0.5 mg/kg，而本方法的檢出限約為對(duì)照方法的1/10，對(duì)于低含量的目標(biāo)物GA17∶2和GA15∶0，本方法也可檢出，而對(duì)照方法難以檢出。因此，對(duì)于總銀杏酸的計(jì)算結(jié)果，本方法略高于對(duì)照方法，若不計(jì)入GA17∶2和GA15∶0的含量，則本方法與對(duì)照方法結(jié)果一致。用對(duì)照方法測(cè)定EGB試樣和對(duì)照樣的色譜圖見(jiàn)圖7，本方法通過(guò)第一維分離有效消除了基體干擾，使色譜圖基線更平直，干擾峰顯著減少。而且本方法通過(guò)在線富集使靈敏度顯著提高，采用更高的檢測(cè)波長(zhǎng)(310 nm)使噪音和基線漂移比對(duì)照方法(檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm)顯著降低，因此在相同濃度水平下，本方法的信噪比顯著優(yōu)于藥典方法。對(duì)于EGB制劑中微量銀杏酸的檢測(cè)，本方法更有效。

表3 EGB試樣中銀杏酸的加標(biāo)回收率Table 3 Spiked recoveries of ginkgolic acids in EGB sample

*mean±SD,n=5

3 結(jié) 論

本文在自行搭建的二維液相色譜基礎(chǔ)上，建立了在線富集測(cè)定EGB及其制劑中微量銀杏酸的方法。該方法在有效消除基體干擾的同時(shí)實(shí)現(xiàn)了目標(biāo)物的富集，檢出限為現(xiàn)行藥典方法的1/10。與LLE、SPE等離線富集方法相比，本方法的分離富集過(guò)程可通過(guò)閥切換自動(dòng)完成，操作更簡(jiǎn)便，速度更快，由于操作帶來(lái)的損失和不確定度更小。

參考文獻(xiàn)：

[1] Elsabagh S,Hartley D E,File S E.J.Psychopharmacol.,2005,19(2):173-181.

[2] Wang S J,Chen H H.Eur.J.Pharmacol.,2005,514(2/3):141-149.

[3] Kalkunte S S,Singh A P,Chaves F C,Gianfagna T J,Pundir V S.PhytotherRes.,2010,21(11):1061-1065.

[4] Koch E,Noeldner M,Leuschner J.Phytomedicine,2013,21(1):90-97.

[5] Posadzki P,Watson L,Ernst E.Br.J.Clin.Pharmacol.,2013,75(3):603-618.

[6] Ahlemeyer B,Selke D,Schaper C,Klumpp S,Krieglstein J.Eur.J.Pharmacol.,2001,430(1):1-7.

[7] European Pharmacopoeia 8.0.Monograph:Ginkgo Dry Extract.Refined and Quantified.2008.European Directorate for the Quality of Medicines & Healthcare,Strasbourg,France.

[8] United States Pharmacopeia.Thirty-seventh Revision:Powdered Ginkgo Extract.2015.The United States Pharmacopeial Convention,Rockville,Md.

[9] Chinese Pharmacopoeia Commission.Pharmacopoeia of the People’s Republic of China,Part 1.Beijing:China Medical Science Press(國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典,一部.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社),2015:416-417.

[10] Teris A B.J.Chromatogr.A,2002,967(1):21-55.

[11] Teris A B,Paola M.J.Chromatogr.A,2009,1216(11):2002-2032.

[12] Sun Y,Tang C,Wu X,Pan Z,Wang L.Chromatographia,2012,75(7/8):387-395.

[13] Fuzzati N,Pace R,Villa F.Fitoterapia,2003,74(3):247-256.

[14] Yao J B,Jin H H,Wang R W,He H H,Zheng C.Chin.J.Pharm.Anal.(姚建標(biāo),金輝輝,王如偉,何厚洪,鄭成.藥物分析雜志),2015,35(11):2041-2044.

[15] Wang Q W,Xie Y Y,Wang Y M,Liang Q L，Luo G A.Chin.Pharm.J.(王蕎薇,謝媛媛,王義明,梁瓊麟,羅國(guó)安.中國(guó)藥學(xué)雜志),2015,50(2):167-173.

[16] Stefan U,Iuliana D S,Victor D,Andrei M.J.Liq.Chromatogr.RT,2010,33(1):133-149.

[17] Ji W,Ma X,Xie H,Chen L,Wang X,Zhao H,Huang L.J.Chromatogr.A,2014,1368(1):44-51.

[18] Sun J,Li L M,Hu Q,Mao X H,Ji S.Chin.J.Chromatogr.(孫健,李麗敏,胡青,毛秀紅,季申.色譜),2016,34(2):184-188.

[19] Gao W,Song H P,Yang H,Li P.Chin.J.Chromatogr.(高雯,宋慧鵬,楊華,李萍.色譜),2017,35(1):121-128.

[20] Liu Y L,Wang C S,Wang X L,Yang S N,Liu X G,Feng L.Chin.J.Anal.Chem.(劉永利,王常順,王曉蕾,楊抒楠,劉興國(guó),馮麗.分析化學(xué)),2016,44(5):828-832.

[21] Zhang Y,Ma X F,Lü P,Cong B.Chin.J.Anal.Chem.(張巖,馬曉斐,呂品,叢斌.分析化學(xué)),2014,42(12):1833-1837.

[22] Chen X G,Kong L,Sheng L H,Li X,Zou H F.Chin.J.Anal.Chem.(陳學(xué)國(guó),孔亮,盛亮洪,厲欣,鄒漢法.分析化學(xué)),2005,23(1):46-51.

[23] Lee H,Lim H,Yang J,Hong J.BullKoreanChem.Soc.,2013,34(12):3629-3634.