程亮星

(鄭州大學第一附屬醫(yī)院《腫瘤基礎(chǔ)與臨床》編輯部，河南 鄭州 450052)

婦科腫瘤的手術(shù)、外傷，以及子宮移植均可能出現(xiàn)子宮缺血再灌注損傷，這一生物學現(xiàn)象可能會對子宮造成嚴重的不可逆性損傷[1]。如何減輕子宮缺血再灌注損傷、研發(fā)保護性藥物成為婦產(chǎn)科學的研究熱點。巴戟天寡糖(morinda officinalis oligose，MOO)提取自中藥巴戟天的肉質(zhì)根，具有抗氧化、抗炎和抗凋亡的作用[2]。本研究采用線栓法制備大鼠子宮缺血再灌注損傷模型，探討巴戟天寡糖對子宮缺血再灌注損傷的抗氧化作用。

1 材料與方法

1.1 動 物

50只SPF級健康雌性Wistar大鼠，均為6月齡，體質(zhì)量(378±23)g，購自河南省實驗動物中心，并飼養(yǎng)于該中心，動物合格證號為SCXK(豫)2010-0002。

1.2 藥品、試劑與儀器

巴戟天寡糖由河南大學藥學院提取，具體方法參考文獻[2]。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)、過氧化氫酶(catalase，CAT)和丙二醛(malondialdehyde，MDA)、過氧化脂質(zhì)(lipid peroxides，LPO)及考馬斯亮蘭試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所，批號分別為20150723，20150715，20150713，20150720，20150728，20150717；其他試劑均為國內(nèi)分析純。

1.3 動物分組與給藥方法

將50只大鼠隨機分為假手術(shù)組，模型對照組，巴戟天寡糖低、中、高劑量組5組，每組10只。巴戟天寡糖低、中、高劑量組按體質(zhì)量依次給予質(zhì)量分數(shù)70，140，280 g/L巴戟天寡糖液10 μL/g灌胃，假手術(shù)組和模型對照組按體質(zhì)量給予10 μL/g雙蒸水灌胃，1 d 1次，連用7 d。

1.4 大鼠子宮缺血再灌注損傷模型的建立

各組大鼠末次給藥后1 h采用線栓法制備大鼠子宮缺血再灌注損傷模型[2]：以質(zhì)量分數(shù)10 g/L的戊巴比妥鈉(0.4 μL/g)腹腔注射麻醉，腹部正中切口，經(jīng)大隱靜脈注射50 u/kg肝素鈉后，鈍性分離腹主動脈，在髂總動脈分叉處上0.5 cm處結(jié)扎腹主動脈(假手術(shù)組大鼠僅穿線，不結(jié)扎)，結(jié)扎30 min后，解除結(jié)扎線，復灌60 min，經(jīng)戊巴比妥鈉過量麻醉致死，取出子宮于-80 ℃冰箱中保存。

1.5 檢測指標

每例子宮標本稱取100 mg制成生理鹽水勻漿，4 ℃、4 000 r/min離心15 min，取上清液，檢測其SOD、GSH-Px、CAT、MDA、LPO水平。SOD用黃嘌呤氧化酶法，GSH-Px用5,5-雙硫代對硝基苯甲酸顯色法，CAT用鉬酸銨法，MDA和LPO用硫代戊巴比妥法，總蛋白量檢測用考馬斯亮蘭法。

1.6 統(tǒng)計學方法

2 結(jié) 果

與假手術(shù)組對比，模型對照組SOD、GSH-Px、CAT水平降低，MDA、LPO水平升高，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與模型對照組對比，巴戟天寡糖3個劑量組SOD、GSH-Px、CAT水平升高，MDA、LPO水平降低，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。巴戟天寡糖3個劑量組SOD、GSH-Px、CAT、MDA、LPO水平兩兩對比，差別均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

組 別SOD/(u·mg-1)GSH-Px/(u·mg-1)CAT/(u·mg-1)MDA/(nmol·mg-1)LPO/(nmol·mg-1)假手術(shù)組172.86±6.85 62.96±3.32 107.01±4.491.99±0.293.32±0.45模型對照組127.73±3.05**38.10±3.04**75.92±3.68**3.89±0.37**7.90±0.54** 巴戟天寡糖高劑量組156.02±7.17##53.79±2.27## △△97.40±3.45## △△2.46±0.23##△△4.47±0.36##△△ 巴戟天寡糖中劑量組145.38±3.63##△△48.92±2.80##89.11±2.57##2.855±0.16##5.04±0.39## 巴戟天寡糖低劑量組137.01±5.84##△△ **43.89±2.35##△△ **85.62±3.59##△△ **3.17±0.70##△△ **6.09±0.75##△△ **F98.449116.537106.95966.396112.752P<0.001<0.001<0.001<0.001<0.001

注：與假手術(shù)組對比，**P< 0.01；與模型對照組對比，##P< 0.01；與巴戟天寡糖高劑量組對比，△△P< 0.01；與巴戟天寡糖中劑量組對比，＊＊P< 0.01

3 討 論

子宮缺血再灌注損傷常見于婦科腫瘤切除術(shù)、子宮移植術(shù)和子宮受外傷后。有研究[3-4]證實，氧化損傷、鈣超載、細胞凋亡、免疫功能異常等均參與了其整個病理生理過程，任一環(huán)節(jié)被干預(yù)或阻止均有可能減輕子宮缺血再灌注損傷的程度。巴戟天寡糖已經(jīng)被證實能夠通過減輕過氧化損傷、清除自由基、減輕細胞凋亡，以及改善其能量代謝等來保護缺血再灌注損傷的腦、心臟、腎臟組織[5-6]。這提示巴戟天寡糖也可能對子宮缺血再灌注損傷具有保護作用。SOD、GSH-Px、CAT均為抗氧化酶類，正常機體內(nèi)具有一定水平的SOD、GSH-Px、CAT，發(fā)揮著保護生物膜完整性的作用，對體內(nèi)過氧化具有對抗作用，在自由基過剩時能夠通過清除自由基來保護正常機體組織免受過氧化損傷的影響。SOD、GSH-Px、CAT水平高低可以一定程度上反映機體抗氧化能力[7-8]。MDA和LPO均是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，可用于機體脂質(zhì)過氧化程度的評估，其水平越高，證實機體脂質(zhì)過氧化程度越嚴重，在缺血再灌注過程中發(fā)現(xiàn)MDA和LPO水平升高則證實組織已經(jīng)受到了損傷[9]。

本研究結(jié)果顯示：與假手術(shù)組對比，模型對照組SOD、GSH-Px、CAT水平降低，而MDA、LPO水平升高(P<0.05)，證明造模成功。與模型對照組比較，巴戟天寡糖低、中、高劑量組SOD、GSH-Px、CAT水平升高，而MDA、LPO水平降低(P<0.05)，提示巴戟天寡糖具有較強的抗氧化能力。3個巴戟天寡糖組SOD、GSH-Px、CAT、MDA、LPO水平兩兩對比，差別均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；且隨著巴戟天寡糖質(zhì)量分數(shù)的增加，SOD、GSH-Px、CAT水平升高，而MDA、LPO水平降低，證實巴戟天寡糖的抗氧化作用隨其質(zhì)量分數(shù)的增加而增強。

綜上所述，巴戟天寡糖對子宮缺血再灌注損傷具有抗氧化作用，可能通過抗氧化作用來減輕子宮組織的損傷，且作用具有一定的劑量依賴性。

4 參考文獻

[1] 楊娥，殷紅巖，陳都紅, 等. 丹參提取液對大鼠子宮缺血再灌注損傷的保護作用[J]. 中國中醫(yī)急癥,2016,25(8):1515-1517.

[2] 王志紅，程亮星，王武亮，等. 巴戟天寡糖抗大鼠子宮缺血再灌注損傷作用的觀察[J]. 鄭州大學學報(醫(yī)學版), 2017, 52(4):467-470.

[3] KISU I,UMENE K,ADACHI M,et al.Allowable warm ischemic time and morphological and biochemical changes in uterine ischemia/reperfusion injury in cynomolgus macaque: a basic study for uterus transplantation[J].Hum Reprod,2017,32(10):2026-2035.

[4] ATALAY YO,AKTAS S,SAHIN S, et al. Remifentanil protects uterus against ischemia-reperfusion injury in rats[J]. Acta Cir Bras,2015,30(11):756-761.

[5] 楊景柯, 馮國清,于爽，等. 巴戟天寡糖促進雞胚絨毛尿囊膜血管生成研究[J]. 中國中藥雜志, 2010, 35(3):360-363.

[6] 郭愛民，曹建民，周海濤. 巴戟天配伍維生素C對大鼠運動性腎臟缺血再灌注的保護作用[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2013，25(10): 1352-1356.

[7] ?ZKAN N, ERSOY ?F,?ZSOY Z, et al. Melatonin exhibits supportive effects on oxidants and anastomotic healing during intestinal ischemia/reperfusion injury[J].Ulus Travma Acil Cerrahi Derg,2018,24(1):1-8.

[8] WANG J, YAN B.A polysaccharide (PNPA) from Pleurotus nebrodensis ameliorates hepatic ischemic/reperfusion (I/R) injury in rats[J].Int J Biol Macromol,2017,105(Pt 1):447-451.

[9] BAO Z, CHEN W, PAN F, et al.Role of mitofusin 2 in the protective effect of breviscapine against hepatic ischemia/reperfusion injury in rats[J].Exp Ther Med,2018,15(4):3582-3588.

[10] DODO K, SHIMIZU T, SASAMORI J, et al.Indolylmaleimide Derivative IM-17 Shows Cardioprotective Effects in Ischemia-Reperfusion Injury[J].ACS Med Chem Lett,2018,9(3):182-187.