何 雋，邵 倩，付茂潔，艾洪蓮

(中南民族大學(xué) 藥學(xué)院，武漢 430074)

毛茛科(Ranunculaceae)翠雀屬(Delphinium)植物主要分布于北溫帶，全球約有300種以上，我國約有113種，除臺灣省和海南島以外的其他各省均有分布[1]. 該屬植物有20余種為藥用植物，具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、祛風濕、治療跌打損傷、止咳平喘、解熱等功效[2]. 翠雀屬植物含有與烏頭堿結(jié)構(gòu)類似的二萜生物堿，該類成分是翠雀屬植物特征性化學(xué)成分，也被公認為該屬植物的有效成分和毒性成分[3-5].

大花還亮草(D.anthriscifoliumvar.majus)為還亮草的變種，多年生草本植物，主要分布在貴州(劍河)、四川東部、陜西南部、湖北、安徽(霍山)，全草可供藥用，有清熱解毒、祛痰止咳的作用. 文獻資料顯示，大花還亮草中含有多種翠雀堿[6-8]，但還未見其非堿成分的報道. 通過對該種植物的化學(xué)成分研究，發(fā)現(xiàn)了6個黃酮類化學(xué)成分，通過波譜學(xué)數(shù)據(jù)及理化性質(zhì)確定結(jié)構(gòu)分別為：3,4,2′,4′-tetramethoxy dihydrochalcone (1)，4,2′,4′,6′-tetramethoxy dihydrochalcone (2)，3,4,2′,4′,6′-pentamethoxy dihydrochalcone (3)，6′-hydroxy-3,4,2′,4′,6′-tetramethoxy dihydrochalcone (4)，(-)-3′,4′,7-trimethoxyflavanone (5)，(-)-3′,4′,5,7-tetramethoxyflavanone (6)(圖1).

圖1 大花還亮草中的黃酮類化合物Fig.1 Flavonoids isolated from Delphinium anthriscifolium var. majus

1 實驗部分

1.1 樣品、試劑和儀器

大花還亮草(D.anthriscifoliumvar.majus)2016年采于湖北省神龍架，由中南民族大學(xué)艾洪蓮博士鑒定，標本保存于中南民族大學(xué)藥學(xué)院(標本號：SNU20160712).

1H和13C NMR由Bruker AM-600測定，內(nèi)標為TMS，化學(xué)位移(δ)的單位是ppm，偶合常數(shù)(J)的單位為Hz；ESI-MS由API QSTAR Pulsar測定.

分離材料：柱層析硅膠(80～100及200～300 目)、薄層層析硅膠(GF254)和硅膠H由青島海洋化工廠生產(chǎn)；Sephadex LH-20(瑞士Amersham Biosciences公司)；反相硅膠Chromatores(日本Fuji公司)；Agilent 1260HPLC，色譜柱為Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6 mm × 150 mm)，粒徑5 μm；半制備型色譜柱為Agilent Zorbax SB-C18柱(9.4 mm×150 mm)，粒徑5 μm. 顯色方法為254、365 nm紫外燈下觀察熒光，10%硫酸乙醇溶液加熱顯色.

1.2 提取和分離

大花還亮草2.5 kg晾干后粉碎，用10 L甲醇室溫浸提3次，每次24 h，濃縮物用乙酸乙酯萃取，萃取液減壓濃縮后得浸膏70 g. 用100 g硅膠(80～100目)拌樣以500 g硅膠(80～100目)進行柱層析，石油醚-丙酮梯度洗脫，用TLC進行檢測，合并相同餾分，得到6個餾分.

第3餾分(7 g)，10 g(200～300目)硅膠拌樣后以50 g(200～300目)硅膠柱層析，氯仿:丙酮(1:0～0:1)洗脫，得4個組分：3-1；3-2；3-3；3-4. 3-1進硅膠柱層析(200～300目)得到3-1-1和3-1-2兩部分. 其中3-1-1再經(jīng)硅膠柱層析(硅膠H)純化，得到化合物3(7 mg)；3-1-2用半制備型HPLC純化(65%乙腈/水)，得到化合物1(12 mg，13.5 min)和2(15 mg，16.2 min). 3-2段進行Saphadex LH-20(甲醇)層析，得到4個組分：3-2-1；3-2-2；3-2-3；3-2-4. 3-2-4用半制備型HPLC純化(65%甲醇/水)，得到化合物5(5 mg，13.4 min)和6(6 mg，15.5 min).

第4餾分(9.8 g)，15 g(200～300目)硅膠拌樣后以80 g(200～300目)硅膠柱層析，氯仿:丙酮(98:2)洗脫，得到化合物4(4.5 g).

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 C19H22O5黃色粉末;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ: 7.81(d,J=8.8 Hz,1H),6.78(d,J=9.9 Hz,1H),6.53(d,J=8.7 Hz,1H),6.45(s,1H),3.25(t,J=7.7 Hz,2H),2.95(t,J=7.7 Hz,2H);13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ: 199.6(s),164.4(s),160.8(s),148.7(s),147.1(s),134.7(s),132.8(d),121.1(s),120.2(d),111.9(d),111.2(d),105.1(d),98.4(d),55.9(q),55.8(q),55.6(q),55.5(q),45.6(t),30.3(t); ESI-MS m/z: 331[M + H]+. 以上波譜數(shù)據(jù)與參考文獻[9]一致，鑒定為3,4,2′,4′-tetramethoxy dihydrochalcone.

化合物2 C19H22O5; 黃色粉末;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ: 7.13(d,J=8.5 Hz,2H),6.81(d,J=8.5 Hz,2H),6.09(s,2H),3.82(s,3H),3.78(s,3H),3.75(s,6H),3.03(m,2H),2.94(m,2H);13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ: 203.8(s),162.3(s),158.2(s),157.8(s),133.7(s),129.3(d),113.7(d),113.3(d),90.5(d),55.8(q),55.5(q),55.3(q),46.1(t),29.1(t); ESI-MS m/z: 331[M + H]+. 以上波譜數(shù)據(jù)與參考文獻[10]一致，鑒定為4,2′,4′,6′-tetramethoxy dihydrochalcone.

化合物3 C20H24O6; 黃色粉末;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ: 6.78(dJ=8.2 Hz,1H),6.75(overlapped,2H),6.09(s,2H),3.86(s,3H),3.85(s,3H),3.82(s,3H),3.75(s,6H),3.05(dd,J=8.7,6.8 Hz,2H),2.95(dd,J=8.6,6.8 Hz,2H);13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ: 203.7(s),162.3(s),158.2(s),148.7(s),147.1(s),134.3(s),120.2(d),113.3(s),111.8(d),111.1(d),90.5(d),55.9(q),55.8(q),55.5(q),46.6(t),29.6(t); ESI-MS m/z: 361[M + H]+. 以上波譜數(shù)據(jù)與參考文獻[10]一致，因此鑒定為3,4,2′,4′,6′-pentamethoxy dihydrochalcone.

化合物4 C19H22O6; 黃色粉末;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ: 14.04(s,1H),7.26(s,1H),6.82(dJ=8.2 Hz,1H),6.79(overlapped,2H),6.08(d,J=2.4 Hz,1H),5.93(d,J=2.4 Hz,1H),3.88(s,3H),3.87(s,3H),3.84(s,3H),3.82(s,3H),3.30(t,J=7.7 Hz,2H),2.95(t,J=7.7 Hz,2H);13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ: 204.6(s),167.7(s),166.0(s),162.7(s),148.7(s),147.2(s),134.3(s),120.1(d),111.8(d),111.1(d),105.7(s),93.6(d),90.8(d),55.9(q),55.8(q),55.6(q),55.5(q),46.0(t),30.3(t); ESI-MS m/z: 347[M + H]+. 以上波譜數(shù)據(jù)與參考文獻[11]一致，鑒定為6′-hydroxy-3,4,2′,4′,6′-tetramethoxy-dihydrochalcone.

化合物5 C19H20O6; 黃色粉末;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ: 7.00(overlapped,2H),6.90(d,J=7.9 Hz,1H),6.16(d,J=2.4 Hz,1H),6.10(d,J=2.4 Hz,1H),5.36(dd,J=13.3,2.8 Hz,1H),3.93(s,3H),3.91(s,6H),3.83(s,3H),3.05(dd,J=16.5,13.3 Hz,1H),2.78(dd,J=16.5,2.8 Hz,1H);13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ: 189.5(s),166.0(s),165.0(s),162.3(s),149.3(s),149.2(s),131.1(s),118.8(d),111.0(d),109.3(d),105.6(s),93.5(d),93.2(d),79.2(d),56.2(q),56.0(q),55.9(q),55.6(q),45.5(t); ESI-MS m/z: 345[M + H]+. 以上波譜數(shù)據(jù)與參考文獻[12]一致,故鑒定為(-)-3′,4′,5,7-tetramethoxyflavanone.

化合物6 C18H18O5; 黃色粉末;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ: 7.88(d,J=8.7 Hz,1H),7.01(overlapped,2H),6.91(d,J=8.1 Hz,1H),6.63(dd,J=8.8,2.4 Hz,1H),6.51(d,J=2.4 Hz,1H),5.42(dd,J=13.4,2.8 Hz,1H),3.93(s,3H),3.91(s,3H),3.84(s,3H),3.07(dd,J=16.9,13.4 Hz,1H),2.82(dd,J=16.9,2.8 Hz,1H);13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ: 190.8(s),166.2(s),163.5(s),149.4(s),149.2(s),131.2(s),128.8(d),118.9(d),114.8(s),111.1(d),110.3(d),109.3(d),100.9(d),80.0(d),56.0(q),55.9(q),55.7(q),44.3(t); ESI-MS m/z: 315[M + H]+. 以上波譜數(shù)據(jù)與參考文獻[13]一致，故鑒定為(-)-3′,4′,7-trimethoxyflavanone.

3 結(jié)語

翠雀屬植物的特征性化學(xué)成分為二萜生物堿，也被公認為該屬植物的有效成分和毒性成分. 文獻調(diào)研發(fā)現(xiàn)很少該屬植物的非堿成分報道[14]. 采用現(xiàn)代色譜技術(shù)從大花還亮草(D.anthriscifoliumvar. majus)的地上部分中分離純化獲得到6個黃酮類化學(xué)成分，其中化合物1～6均為首次從該植物中分離得到. 本研究成果豐富了翠雀屬植物的化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)類型，可為進一步開發(fā)這一屬植物提供新的物質(zhì)基礎(chǔ).

參 考 文 獻

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