李 君，侯金友，張 慧，盧焱坤，鄒紅蕊，張曉磊，張秀梅

(開灤總醫(yī)院輸血科，河北唐山 063000)

新生兒溶血病(hemolytic disease of the new-born，HDN)主要是指母嬰紅細(xì)胞血型不合引起的新生兒同種免疫性溶血性疾病[1]，在我國以ABO-HDN最多見，其次為Rh-HDN。由于新生兒血液特點(diǎn)，ABO系統(tǒng)HDN三項(xiàng)試驗(yàn)往往出現(xiàn)極弱的陽性結(jié)果，與患兒臨床癥狀不相符，干擾臨床診斷。因此本研究采用《HDN產(chǎn)后免疫血液學(xué)試驗(yàn)推薦方案》[2]中四種試驗(yàn)方法檢測臨床送檢可疑HDN的標(biāo)本，比較四種方法中哪種方法能為臨床實(shí)驗(yàn)室早期診斷ABO-HDN提供更加準(zhǔn)確的結(jié)果，現(xiàn)報(bào)告如下：

1材料與方法

1.1 研究對象 2016年1～12月本院436例黃疸患兒，男性229例，女性207例；排除生理性黃疸，因感染、新生兒珠蛋白生成障礙性貧血、窒息、母乳性黃疸等因素所致的新生兒高膽紅素162例；可疑母嬰血型不合導(dǎo)致的HDN 274例，采集該274例患兒及其母EDTA抗凝血標(biāo)本各3 ml備用。新生兒高膽紅素血癥診斷參考文獻(xiàn)[3]；HDN診斷標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)[4]。

1.2 儀器和試劑 ABO，RhD血型微柱凝膠檢測卡、ABO標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞和低離子強(qiáng)度鹽溶液(LISS)，均購自長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司；聚乙二醇(PEG)溶液購自長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司；抗球蛋白試劑、木瓜酶粉劑、pH5.5 PBS濃縮液30 ml(10×)購自上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.3 方法 母親血樣進(jìn)行ABO，RhD血型檢測和IgG抗-A/B效價(jià)檢測；患兒血樣進(jìn)行ABO，RhD血型檢測和三項(xiàng)溶血試驗(yàn)檢測，分別采用經(jīng)典抗球蛋白試驗(yàn)(對照組)和《HDN產(chǎn)后免疫血液學(xué)試驗(yàn)推薦方案》[2]中的三種增強(qiáng)試驗(yàn)分別是酶處理細(xì)胞增強(qiáng)試驗(yàn)(試驗(yàn)組1)、添加低離子強(qiáng)度(LISS)溶液(試驗(yàn)組2)和添加聚乙二醇(PEG)溶液(試驗(yàn)組3)檢測游離抗體和放散液抗體(均采用熱放散獲得)，試驗(yàn)方法參考文獻(xiàn)[2]操作。比較四種方法的臨床診斷效果。按照放散液抗體效價(jià)情況將檢出效果最佳組分為三組：A組效價(jià)1～4；B組效價(jià)8～16；C組效價(jià)≥32，分析不同組間HDN發(fā)生情況。

2結(jié)果

2.1 274例新生兒確診ABO-HDN結(jié)果 274例患兒確診ABO-HDN共161例(58.8%)，其中A型87例(54.0%)，B型74例(46.0%)，不同血型患兒HDN患病率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.089，P>0.05)。161例患兒母親均為O型、RhD陽性，母體IgG抗體效價(jià)64～256之間33例(20.5%)，256～512之間共68例(42.2%)，>512共60例(37.3%)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=53.121，P<0.05)。

表1 274例新生兒游離放散試驗(yàn)結(jié)果

2.3 酶處理細(xì)胞增強(qiáng)試驗(yàn)放散液不同抗體效價(jià)與HDN的關(guān)系 見表2。

表2 酶處理細(xì)胞增強(qiáng)試驗(yàn)放散液抗體效價(jià)與HDN的關(guān)系

A組、B組與C組間HDN發(fā)病率及總膽紅素水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=18.931，F(xiàn)=12.624，P<0.05)；Hb水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1.357，P>0.05)；說明HDN發(fā)病例數(shù)和總膽紅素水平隨著酶處理細(xì)胞增強(qiáng)試驗(yàn)放散液抗體效價(jià)增高而增加。

3討論目前人類紅細(xì)胞有35個(gè)血型系統(tǒng)，300余個(gè)血型抗原，相關(guān)文獻(xiàn)已報(bào)道有50種以上的不同紅細(xì)胞抗原與HDN有關(guān)[5]。國內(nèi)報(bào)道的母嬰血型不合的免疫性溶血病中，ABO血型不合者約占85.3%[6]，而且ABO-HDN第一胎也可發(fā)病[7]，由此可見ABO-HDN引起的潛在危險(xiǎn)性不容忽視。但新生兒體內(nèi)存在的母體溶血性抗體隨著疾病的進(jìn)展而逐漸消耗，可能造成陰性結(jié)果，新生兒出生時(shí)間越長，篩查試驗(yàn)檢出率越低[8]，給臨床早期診斷帶來困擾。因此，對ABO-HDN臨床早期診斷的實(shí)驗(yàn)研究有重要意義。

本研究采用經(jīng)典抗人球蛋白試驗(yàn)和《HDN產(chǎn)后免疫血液學(xué)試驗(yàn)推薦方案》中三種增強(qiáng)試驗(yàn)方法分別是酶處理細(xì)胞增強(qiáng)試驗(yàn)、添加低離子強(qiáng)度(LISS)溶液、添加聚乙二醇(PEG)溶液檢測游離抗體和放散液抗體，目的是找到HDN檢測的最佳試驗(yàn)方案，為臨床早期診斷提供更加準(zhǔn)確的依據(jù)。經(jīng)典抗球蛋白試驗(yàn)是檢測HDN的經(jīng)典方法，但是一些病例往往發(fā)病幾天后才引起注意，有可能導(dǎo)致弱抗體的漏檢。本研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)典抗球蛋白法檢測HDN時(shí)，放散試驗(yàn)漏檢率達(dá)到5.8%(16/274)，有可能是由于抗體效價(jià)低于檢測下限而導(dǎo)致的假陰性結(jié)果。四種方法比較結(jié)果顯示：試驗(yàn)組檢出率均高于對照組，其中酶處理細(xì)胞增強(qiáng)試驗(yàn)陽性率最高，且抗體效價(jià)均值最高，說明酶處理細(xì)胞增強(qiáng)試驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)室早期檢測ABO-HDN時(shí)效果優(yōu)于其他組別。此外，HDN發(fā)病例數(shù)和總膽紅素水平隨著酶處理細(xì)胞增強(qiáng)試驗(yàn)放散液抗體效價(jià)增高而增加，這也能為臨床預(yù)測HDN的嚴(yán)重程度提供參考。由此可見：酶處理細(xì)胞增強(qiáng)試驗(yàn)不僅能為ABO-HDN的早期診斷與治療提供更加準(zhǔn)確的試驗(yàn)結(jié)果，還能提示發(fā)生HDN的危險(xiǎn)程度。因此，與臨床癥狀不符的弱陽性結(jié)果，為避免漏檢發(fā)生，可采用酶法提高檢測效果，為早期診斷與治療爭取時(shí)間。但值得注意的是，酶法的應(yīng)用有一定的局限性，酶法對M，N，F(xiàn)ya，F(xiàn)yb等血型抗原有破壞作用，會(huì)造成M，N，F(xiàn)ya，F(xiàn)yb等血型抗體漏檢，因此懷疑M，N，F(xiàn)ya，F(xiàn)yb等血型抗體所致的HDN時(shí)，可參考《HDN產(chǎn)后免疫血液學(xué)試驗(yàn)推薦方案》，結(jié)合具體情況選擇最佳的試驗(yàn)方法。

綜上所述，參考《HDN產(chǎn)后免疫血液學(xué)試驗(yàn)推薦方案》進(jìn)行HDN的檢測，采用酶處理細(xì)胞增強(qiáng)試驗(yàn)，能為臨床實(shí)驗(yàn)室早期診斷提供可靠的試驗(yàn)依據(jù)，有效降低漏檢率，尤其是面臨“二孩時(shí)代”帶來的新的機(jī)遇與挑戰(zhàn)，臨床更應(yīng)提高重視程度，把握最佳治療時(shí)機(jī)。

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