王洪德

隨著高科技的發(fā)展 ，作為植物營(yíng)養(yǎng)繁殖的一個(gè)新手段，組織培養(yǎng)技術(shù)成為現(xiàn)代生物領(lǐng)域及現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的一項(xiàng)基本操作手段，其繁殖速度是一般常規(guī)方法所不能比的。通過(guò)無(wú)菌方法進(jìn)行快繁的方法能在較短的時(shí)間和較少的空間內(nèi)由1個(gè)個(gè)體迅速繁殖大量群體，實(shí)驗(yàn)室脫毒馬鈴薯試管苗的離體繁殖正是借助這一顯著優(yōu)勢(shì)，在國(guó)內(nèi)外種薯生產(chǎn)上得以廣泛利用，是脫毒馬鈴薯原種大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的前提。

經(jīng)過(guò)多年的實(shí)際探索及對(duì)馬鈴薯實(shí)驗(yàn)室的改進(jìn)，大幅度增加了脫毒馬鈴薯原種的生產(chǎn)數(shù)量，而脫毒馬鈴薯的優(yōu)勢(shì)，即高產(chǎn)和不易腐爛，被農(nóng)民（特別是靠天吃飯及高海拔地區(qū)的農(nóng)民）及市場(chǎng)接受，收到了良好的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益，為地方的經(jīng)濟(jì)發(fā)展做出了貢獻(xiàn)。

1培養(yǎng)基及其制作對(duì)瓶裝苗的生長(zhǎng)影響

1.1培養(yǎng)基材料對(duì)試管苗的生長(zhǎng)影響

培養(yǎng)基包括大量元素、微量元素、鐵鹽、食用白糖、自來(lái)水、瓊脂。試管苗單節(jié)切斷繁殖宜采用固體培養(yǎng)基，如果工作人員在培養(yǎng)基滅菌過(guò)程中，不慎放氣不均，一般滅菌后拿出來(lái)的培養(yǎng)基過(guò)?。ǔ珊隣睿?，影響接苗質(zhì)量和幼苗生長(zhǎng)；相反，如果培養(yǎng)基硬度太大，切斷不易插入培養(yǎng)基中，影響苗切斷與培養(yǎng)基的接觸。

1.2培養(yǎng)基制作對(duì)試管苗成活率的影響

在快繁苗時(shí)，所需的培養(yǎng)基一般應(yīng)提前2周做，以防使用被污染的培養(yǎng)基，影響試管苗的成活率。如筆者4月中旬快繁大西洋苗時(shí)，由于培養(yǎng)基的污染超過(guò)了10%，影響很大。另外，培養(yǎng)基的瓶或盒上的水珠影響快繁苗的污染和強(qiáng)壯生長(zhǎng)。

2溫度對(duì)瓶裝脫毒苗生長(zhǎng)的影響

夏天晝長(zhǎng)夜短，日光燈照射比冬天短，而 自然 照射光多，可提高組培瓶苗移栽后的成活率；但夏天比冬天室內(nèi)溫度高，污染增高，所以室內(nèi)需裝空調(diào)。一般溫度應(yīng)控制在20～25℃范圍內(nèi)，溫度高于26℃，則苗頂端易產(chǎn)生燒苗現(xiàn)象，高于33℃，則苗停止生長(zhǎng)。另外，瓶中或盒中的培養(yǎng)基要比平時(shí)多放，以防抽干盒或瓶中的培養(yǎng)基，影響幼苗的正常生長(zhǎng)。

生長(zhǎng)間的生長(zhǎng)架以用玻璃層為宜，因利用散射光可提高組培瓶苗移栽后的成活率。試驗(yàn)表明，用玻璃作為培養(yǎng)層的生長(zhǎng)架比用鐵作為生長(zhǎng)架好。用鐵做的生長(zhǎng)架，散熱效果比較差，當(dāng)生長(zhǎng)間放滿(mǎn)用鐵做的生長(zhǎng)架時(shí)，一般早上關(guān)燈后，繼續(xù)讓空調(diào)再開(kāi)2～3h才能保證整個(gè)生長(zhǎng)間的溫度較適合幼苗的生長(zhǎng)。

3快繁瓶裝苗的控制

在快繁脫毒苗時(shí)，瓶中如少放脫毒苗，其長(zhǎng)得快，脫毒苗節(jié)間長(zhǎng)、葉大且須根發(fā)達(dá)；如放多脫毒苗，其長(zhǎng)得慢，脫毒苗弱、葉小且挨瓶的苗腐爛。這2種情況對(duì)快繁都不利，故快繁苗時(shí)，在瓶中放40～50根脫毒苗為宜；同時(shí)快繁脫毒苗應(yīng)控制苗的節(jié)間。

4瓶苗污染的控制

在脫毒瓶苗的繼代培養(yǎng)過(guò)程中，常因種種原因出現(xiàn)細(xì)菌類(lèi)和真菌類(lèi)污染，細(xì)菌污染苗極弱，且擴(kuò)繁后下一代大部分表現(xiàn)為細(xì)菌污染，在生產(chǎn)中通常用抗生素來(lái)處理細(xì)菌污染。對(duì)于真菌污染的脫毒瓶苗，除嚴(yán)格操作規(guī)程外，可在培養(yǎng)基中配制不同濃度多菌靈來(lái)減輕瓶苗污染率。最主要是快繁留的基礎(chǔ)脫毒苗沒(méi)有細(xì)菌和真菌的污染。而對(duì)于繼代擴(kuò)繁4年以上的瓶苗，要定期進(jìn)行病毒檢測(cè)確認(rèn)是無(wú)病毒苗。因此，要定期更新脫毒瓶苗，每年應(yīng)通過(guò)剝離莖尖組織的辦法培養(yǎng)新鮮無(wú)病毒瓶苗，以確保繼代培養(yǎng)脫毒瓶苗質(zhì)量。

5無(wú)菌操作室內(nèi)消毒滅菌

5.1操作前消毒

一是無(wú)菌室剛開(kāi)始工作或間隔1～2個(gè)月未進(jìn)行消毒時(shí)，先把高錳酸鉀倒入培養(yǎng)皿，再倒入甲醛，關(guān)閉門(mén)窗進(jìn)行熏蒸消毒，間隔1～2d即可在室內(nèi)工作；二是將工作服、口罩、拖鞋、盛裝75%的酒精瓶、剪刀、鑷子、苗源瓶、快繁瓶等無(wú)菌室所需物品放在無(wú)菌室固定位置，啟動(dòng)超凈工作臺(tái)，通風(fēng)殺菌，并將室內(nèi)紫外燈打開(kāi)消毒，工作人員快速離開(kāi)無(wú)菌室，滅菌25～30min即可。

5.2操作中消毒

工作人員進(jìn)入隔離間，穿戴好消毒服裝，在組培室用75%的酒精將雙手消毒，再用酒精泡的酒精棉擦超凈工作臺(tái)，同時(shí)將鑷子、剪刀和支撐干用酒精擦過(guò)后，放在加熱器進(jìn)行5～6s的消毒，并將已挑揀好的無(wú)污染的脫毒苗放在超凈工作臺(tái)上，先打開(kāi)滅菌過(guò)的快繁瓶放在超凈工作臺(tái)上，然后擰開(kāi)脫毒苗瓶的口，用已滅菌過(guò)的鑷子將脫毒苗瓶中的小苗夾出瓶口，只留根部在瓶?jī)?nèi)，用剪刀剪掉根部，然后再用鑷子夾小苗離快繁瓶口1～2cm（注意不要讓小苗挨上快繁瓶瓶口，以防感染），剪帶1片小葉莖放在快繁瓶中。蓋上蓋子，在苗瓶外壁用打號(hào)槍注明該品種的編號(hào)及快繁日期。

6定期檢查

放在生長(zhǎng)間的快繁脫毒苗，一般每隔7d要用稀釋好的清潔爾滅噴撒滅菌，每天早關(guān)燈和晚開(kāi)燈時(shí)，發(fā)現(xiàn)有污染的瓶苗，必須馬上將其拿出生長(zhǎng)間，并放入高壓滅菌鍋滅菌，然后用清潔熱水加入適量洗衣粉，用刷子涮洗苗瓶，并換水沖洗，然后倒置木架上晾干水珠待用。健康苗20多天就可快繁或移栽溫室。

7取苗

在取苗時(shí)，有時(shí)也有真菌污染的脫毒苗，不能作快繁苗但可以作移栽苗。如果下一批苗要得急，取苗的同時(shí)需做培養(yǎng)基，若在同一間進(jìn)行，帶有真菌的脫毒苗被取出時(shí)，就會(huì)污染正在做的培養(yǎng)基，故應(yīng)分開(kāi)進(jìn)行。

（作者單位：163515黑龍江省大慶市大同區(qū)大同農(nóng)業(yè)局農(nóng)業(yè)指導(dǎo)站）