梁峻尉，白文筠*，遲莉麗，閆華,孫大娟,趙繼亭，王帥，葉倩男(.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，山東 濟(jì)南 500;.山東中醫(yī)藥大學(xué),山東 濟(jì)南 500)

腸易激綜合征(irritable bowel syndrome,IBS)是一種沒有器質(zhì)性疾病或生化異?？梢越忉尩母共坎贿m或疼痛同時(shí)伴有排便紊亂的疾病，是消化內(nèi)科門診常見的一種功能性疾病，據(jù)統(tǒng)計(jì)IBS病人約占消化內(nèi)科門診量的31%[1]，我國以腹瀉型IBS多見[2]。IBS雖然不會(huì)危及患者的生命，但由于癥狀反復(fù)發(fā)作嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，占用了大量的醫(yī)療資源[3]。

IBS的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，目前認(rèn)為是以神經(jīng)元調(diào)節(jié)胃腸道功能紊亂為特點(diǎn)的嚴(yán)重疾病[4]。我們?cè)谇捌诘呐R床及實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)上，課題組進(jìn)一步選取P物質(zhì)(SP)、血管活性腸肽(VIP)、皮質(zhì)酮(CORT)作為主要測(cè)定指標(biāo)，觀察加味理腸飲對(duì)IBS-D大鼠的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

出生后42 d SPF級(jí)SD雄性大鼠70只，體質(zhì)量(200±10)g，購自濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司,動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(魯)20140007。

1.2 藥品

加味理腸飲(炒白術(shù)30 g,茯苓24 g,黨參12 g,炒白芍15 g,柴胡12 g,香附9 g,陳皮12 g,防風(fēng)9 g,高良姜6 g,桂枝9 g,炙甘草6 g等)由山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥制劑室提供，配制成含生藥濃度分別為0.5 g/mL、1 g/mL、2 g/mL的溶液。匹維溴銨片(得舒特,法國，批號(hào)：611243)；谷參腸安膠囊(復(fù)方谷氨酰胺腸溶膠囊,國藥準(zhǔn)字：H51023598,生產(chǎn)廠家：成都地奧集團(tuán)天府藥業(yè)公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)主要試劑及儀器

試劑盒為 SP、VIP、CORT物質(zhì)ELISA 試劑盒，購自濟(jì)南博諾生物科技有限公司。可調(diào)高速勻漿器FSH-2型，金壇市恒豐儀器廠；酶標(biāo)儀:ELX808,BioTek美國伯騰儀器有限公司；高速低溫離心機(jī)MICROMAX RF，Thermo IEC(美國)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 實(shí)驗(yàn)分組

將SD大鼠按隨機(jī)區(qū)組法分為7組：空白對(duì)照A組；模型對(duì)照B組；得舒特組；谷參腸安D組；加味理腸飲低劑量E組；加味理腸飲中劑量F組；加味理腸飲高劑量G組。(以下簡稱空白組、模型組、得舒特組、谷參腸安組、中藥低劑量、中藥中劑量和中藥高劑量組)，每組10只，各組大鼠體質(zhì)量統(tǒng)計(jì)學(xué)比較無顯著性差異(P>0.05)。

1.4.2 造模方法

將SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后,予避水應(yīng)激+夾尾刺激+番瀉葉灌胃方法，以上刺激共持續(xù)10 d。為消除生物節(jié)律的影響，造模于每天9:00～11:00進(jìn)行。

1.4.3 給藥方法

得舒特組給予得舒特15 mg/(kg·d)灌胃，谷參腸安組給予谷參腸安0.2 g/(kg·d)灌胃,加味理腸飲組分別給予低劑量1.5 g/(kg·d)、中劑量3 g/(kg·d)、高劑量6 g/(kg·d)中藥灌胃10 mL/(kg·d)，空白組和模型組分別給予等容積生理鹽水灌胃，1次/d。共28 d。以1 mL/100 g劑量灌胃。

1.5 AWR評(píng)分

參考文獻(xiàn)方法，用自制球囊擴(kuò)張大鼠結(jié)直腸，并對(duì)擴(kuò)張引起的腹部回縮反射(AWR)進(jìn)行評(píng)分。

1.6 酶聯(lián)免疫法Elisa法檢測(cè)大鼠SP、VIP、CORT

連續(xù)用藥28 d后處死大鼠，于腹主動(dòng)脈取血,每只大鼠取5 mL，置于抗凝管中，備用；截取結(jié)腸組織，取大鼠結(jié)腸段，距肛門口5 cm左右的腸組織，將清洗好的腸管立即置于4%的多聚甲醛溶液中固定，脫水處理后石蠟包埋。-80℃冰箱保存。按照試劑盒說明，檢測(cè)SP、VIP、CORT水平。

1.7 組織病理學(xué)變化

對(duì)結(jié)腸組織進(jìn)行蘇木素-伊紅(haematoxylin-eosin，H-E)染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察其病理組織學(xué)形態(tài)變化。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析、統(tǒng)計(jì)，數(shù)據(jù)以平均數(shù)±方差表示。各組之間的比較采用單因素方差分析，兩兩比較時(shí)，如方差齊采用LSD檢驗(yàn)，方差不齊選Dunnett T3檢驗(yàn)。P<0.05被認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01被認(rèn)為具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 AWR評(píng)分

AWR評(píng)分結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與模型組相比，各藥物實(shí)驗(yàn)組在壓力為20、40、60 mmHg時(shí)的行為學(xué)評(píng)分均降低(P<0.05)(除20 mmHg中藥低劑量組外)。各個(gè)組間在壓力為80 mmHg時(shí)評(píng)分未見差異(P>0.05)。見表1。

表1 試驗(yàn)后各壓力值(mmHg)下的AWR評(píng)分

注：與模型組對(duì)比，*P<0.05,**P<0.01；與中劑量組對(duì)比，▲P<0.05，▲▲P<0.01

2.2 加味理腸飲對(duì)IBS-D大鼠血漿及結(jié)腸組織SP的影響

與模型組對(duì)比，各藥物組SP水平均下調(diào)(P<0.05)。見表2。

表2 各組大鼠SP表達(dá)水平的對(duì)比

注：與模型組對(duì)比，*P<0.05,**P<0.01；與中劑量組對(duì)比，▲P<0.05，▲▲P<0.01

2.3 加味理腸飲對(duì)IBS-D大鼠血漿及結(jié)腸組織VIP的影響

與模型組對(duì)比，各藥物組VIP水平均下調(diào)(P<0.05)(除中藥低劑量組血漿VIP外)。見表3。

2.4 加味理腸飲對(duì)IBS-D大鼠血漿CORT的影響

與模型組對(duì)比，除中藥低劑量組外，各藥物組CORT水平均上調(diào)(P<0.05)。見表4。

2.5 加味理腸飲對(duì)IBS-D大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)變化

HE染色結(jié)果顯示，各實(shí)驗(yàn)組大鼠的結(jié)腸組織均未見明顯的形態(tài)學(xué)改變：結(jié)腸黏膜上皮完整、腺體排列整齊，各層結(jié)構(gòu)清晰，未見明顯的炎癥細(xì)胞浸潤和間質(zhì)水腫。實(shí)驗(yàn)組間的病理結(jié)構(gòu)表現(xiàn)未見明顯差異。說明應(yīng)激未造成大鼠結(jié)腸明顯病理損害，這與臨床上IBS患者的表現(xiàn)相似。見圖1。

表3 各組大鼠VIP表達(dá)水平的對(duì)比

注：與模型組對(duì)比，*P<0.05,**P<0.01；與中劑量組對(duì)比，▲P<0.05，▲▲P<0.01

表4 各組大鼠CORT表達(dá)水平的對(duì)比

注：與模型組對(duì)比，*P<0.05,**P<0.01；與中劑量組對(duì)比，▲P<0.05，▲▲P<0.01

圖1 結(jié)腸組織病理學(xué)變化(×100)注：A空白組;B模型組;C得舒特組;D谷參腸安組;E中藥低劑量組;F中藥中劑量組;G中藥高劑量組

3 討論

IBS的腸神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生異常主要表現(xiàn)在內(nèi)臟感覺過敏和腸道動(dòng)力兩方面。最近幾年有關(guān)IBS-D病理機(jī)制的研究逐漸深入，腦腸軸異常成為本病的一個(gè)重要機(jī)制及研究方向。SP是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的腦腸肽，可使胃腸蠕動(dòng)增加、消化道平滑肌收縮增強(qiáng)，并具有刺激小腸、結(jié)腸黏膜分泌水和電解質(zhì)的作用[5]。異常升高的SP可使腸道平滑肌強(qiáng)烈收縮、增強(qiáng)結(jié)腸集團(tuán)運(yùn)動(dòng)、刺激腸黏膜分泌水和電解質(zhì)的作用，這與IBS-D腹痛和腹瀉的癥狀密切相關(guān)。VIP血管活性腸肽在胃腸神經(jīng)系統(tǒng)中是一種抑制性神經(jīng)遞質(zhì)[6]，有研究表明[7]，IBS患者腹瀉時(shí)，血中VIP較正常人空腹時(shí)有明顯升高，VIP與IBS患者的腹痛、腹瀉等癥狀密切相關(guān)。近幾年關(guān)于下丘腦-垂體-腎上腺軸(HPA軸)[8]的研究增多，學(xué)者發(fā)現(xiàn)其調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的失控可能為IBS發(fā)病的關(guān)鍵，應(yīng)激刺激能影響HPA軸，促使下丘腦、垂體、腎上腺分泌神經(jīng)遞質(zhì)，如皮質(zhì)酮(CORT)等，導(dǎo)致IBS的發(fā)生。有研究表明，婦女IBS患者血漿中皮質(zhì)酮的含量比健康成人血漿中皮質(zhì)酮含量高。因此本研究選取SP、VIP、CORT作為內(nèi)容。

目前為止治療IBS主要以對(duì)癥、抗焦慮或者抑郁以及心理輔導(dǎo)等為主，沒有從病理生理學(xué)的角度來解決問題，因此療效相當(dāng)有限，而有一些設(shè)計(jì)嚴(yán)格的臨床試驗(yàn)[9]或系統(tǒng)評(píng)價(jià)[10]證明中醫(yī)藥對(duì)IBS有一定療效。前期臨床研究顯示，應(yīng)用加味理腸飲治療IBS-D，臨床效果顯著[11]，全方由柴胡、桂枝、炒白芍、黨參、炒白術(shù)、茯苓、半夏、防風(fēng)、陳皮、黃芩、香附、烏藥、炙甘草組成，是由“柴胡桂枝湯”“痛瀉要方”“四君子湯”三方加減變化而來，柴胡桂枝湯在《金匱要略》中主治心腹卒中痛者，隗繼武老師通過對(duì)經(jīng)典的深研和反復(fù)的臨床實(shí)踐，應(yīng)用本方治療IBS，臨床效果顯著[11]；痛瀉要方一直以來被廣大醫(yī)者看做是治療IBS的基礎(chǔ)方之一，療效確切；四君子湯歷來被認(rèn)為是“健脾補(bǔ)氣第一方”。縱觀全方健脾為主佐以疏肝，行氣散寒又佐以解郁清熱，切合病機(jī)。清補(bǔ)結(jié)合，寒熱并用，營衛(wèi)同調(diào)，兼顧心肝脾是本方的四大特點(diǎn)。

本研究發(fā)現(xiàn)：加味理腸飲可以明顯降低IBS-D大鼠的AWR評(píng)分和內(nèi)臟痛覺閾值，說明加味理腸飲對(duì)慢性應(yīng)激導(dǎo)致的內(nèi)臟高敏感和腸道動(dòng)力異常具有顯著的調(diào)節(jié)作用。同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)加味理腸飲可以降低IBS-D大鼠血漿及結(jié)腸組織中SP、VIP的含量，下調(diào)血漿CORT水平，尤以中劑量組效果最明顯，說明加味理腸飲可能通過調(diào)節(jié)相關(guān)腦腸肽含量從而影響腦-腸軸以及HPA軸,因而調(diào)節(jié)了胃腸道的運(yùn)動(dòng)、感覺和分泌功能。以上這些結(jié)果說明了中醫(yī)學(xué)中的情志異常-肝郁-脾虛等導(dǎo)致機(jī)體的一系列病理生理改變，可能與IBS病因病機(jī)學(xué)中的神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫學(xué)說有著某種密切的聯(lián)系。

本研究只是選取了腦腸軸和HPA軸的相關(guān)遞質(zhì)，尚缺乏以某一個(gè)通路為主的系統(tǒng)研究，將來的研究將以此為方向進(jìn)行探討。

[1] Shinozaki M,Fukudo S,Hongo M,et al.High prevalence of irritable bowel syndrome in medical outpatients in Japan[J].J Clin Gastroenterol,2008,42(9):1010-1016.

[2] 熊理守,陳旻湖,陳惠新,等.社區(qū)人群中腸易激綜合征的癥狀學(xué)特征[J].胃腸病學(xué),2004,9(5):277-279．

[3] Dancey CP,Backhouse S.Towards a better understanding of patients with irritable bowel syndrome[J].J Adv Nurs,1993,18(9):1443-1450.

[4] Mc Lean PG,Borman R A,Lee K.5-HT in the enteric nervous system gut function and neuropharmacology[J].Trends Neurosci,2007,30(1):9-13.

[5] DePonti F，Tonini M． Irritable bowel syndrome new agents targeting serotonin receptor subtypes[J]．Drugs，2001，61(3):317-332．

[6] 李浩.陰虛血虧大鼠模型血管活性腸肽表達(dá)及心肌超微結(jié)構(gòu)的改變[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2011，11(1)：54-55.

[7] 李兆申，董文珠，鄒多武，等．腸易激綜合征腸黏膜SP、VIP、CGRP變化的研究[J]．第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，24(2)：147-151．

[8] 章海鳳,謝芳深，龔紅斌，等.熱敏灸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠HPA軸調(diào)節(jié)機(jī)制的研究[J]．中國針灸，2017，37(12)：1315．

[9] 馬燕明,王金菊,黃新梅.阿普唑侖治療腸易激綜合征的臨床療效觀察[J].中國醫(yī)藥指南,2013,11(20):138-139.

[10] Bensoussan A,Talley NJ,Hing M,et al.Treatment of irritable bowel syndrome with Chinese herbal medicine-arandomized controlled trial[J]．JAMA,1998,280(18):1585-1589.

[11] 孫大娟，遲莉麗，閆華，等.加味理腸飲治療腹瀉型腸易激綜合征40例總結(jié)[J].湖南中醫(yī)雜志，2014，30(6):55-56.