李聰，鄭明昱，許妍姬*(.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院預(yù)防醫(yī)學(xué)教研室，吉林 延吉 3300;.延邊大學(xué)中醫(yī)學(xué)院中醫(yī)臨床教研室，吉林 延吉 3300)

隨著經(jīng)濟(jì)的高速發(fā)展，人們生活的環(huán)境也隨之受到了破壞，空氣污染嚴(yán)重，導(dǎo)致哮喘病發(fā)病率上升。在臨床治療中，通常采用西藥糖皮質(zhì)激素治療，但是藥物副作用明顯。朝醫(yī)學(xué)根據(jù)辨象論治，出自《東醫(yī)壽世保元》中麻黃定喘湯和鹿茸大補(bǔ)湯這兩藥方來(lái)治療，所以麻黃定喘湯和鹿茸大補(bǔ)湯的衛(wèi)生毒理學(xué)安全也受到了重視。

麻黃定喘湯，具有補(bǔ)肺潤(rùn)肺，化痰平喘之功效[1]。配方根據(jù)中藥配伍理論和臨床經(jīng)驗(yàn)，通過(guò)藥理研究科學(xué)配制[2]。麻黃定喘湯由麻黃15 g，杏仁7.5 g，黃芩5 g，萊菔子5 g，桑白皮5 g，桔梗5 g，麥冬5 g，款冬花5 g，白果20枚九味中藥組成。

鹿茸大補(bǔ)湯，具有補(bǔ)肺益精血，健肺止咳之功效[3]。配方根據(jù)中藥配伍理論和臨床經(jīng)驗(yàn)，通過(guò)藥理研究科學(xué)配制[4]。鹿茸大補(bǔ)湯由鹿茸15 g，麥冬7.5 g，薏苡仁7.5 g，山藥5 g，天冬5 g，五味子5 g，杏仁5 g，麻黃5 g八味中藥組成。

此次實(shí)驗(yàn)采用安慰劑對(duì)照實(shí)驗(yàn)方法，探討麻黃定喘湯和鹿茸大補(bǔ)湯的急性毒性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物

健康適齡SPF級(jí)昆明種小鼠50只，雌、雄各半，體質(zhì)量18～22 g，購(gòu)于延邊大學(xué)動(dòng)物科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心。飼養(yǎng)環(huán)境：延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物房,溫度22～25℃，相對(duì)濕度40%～70%，普通飼料由延邊大學(xué)動(dòng)物科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.1.2 藥物

麻黃定喘湯與鹿茸大補(bǔ)湯，延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院，配制方法：按照藥劑配方，由延邊大學(xué)藥學(xué)院制備成凍干粉的形式，轉(zhuǎn)交于延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院，麻黃定喘湯凍干粉的轉(zhuǎn)換率為27.79%，鹿茸大補(bǔ)湯凍干粉的轉(zhuǎn)換率為25.83%。

1.1.3 試劑

谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)測(cè)試盒(C009-2，微板法，生產(chǎn)批號(hào)20161120)；谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST/GOT)測(cè)試盒(C010-2，微板法，生產(chǎn)批號(hào)20161116)，以上試劑均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器

恒溫水浴鍋、37℃恒溫培養(yǎng)箱、立式壓力蒸汽滅菌器、移液器、酶標(biāo)儀、電子天平、微量振蕩器、高速冷凍離心機(jī)、制冰機(jī)、組織研磨器等均由延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院預(yù)防醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 方法

1.2.1 預(yù)實(shí)驗(yàn)

根據(jù)《毒理學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》(科學(xué)出版社2010年版)，進(jìn)行毒性試驗(yàn)預(yù)實(shí)驗(yàn)，預(yù)測(cè)藥物的半數(shù)致死量(LD50)[5]。取體質(zhì)量18～22 g昆明鼠種8只，隨機(jī)分為4組，用苦味酸進(jìn)行標(biāo)記，雌、雄各半，動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，禁水食12 h。第一組給麻黃定喘湯濃度1.2 g·mL-1，按照小鼠體質(zhì)量10 mL·kg-1的劑量給藥(相當(dāng)于成人臨床用藥的50倍)；第二組給麻黃定喘湯濃度2.3 g·mL-1，按照小鼠灌胃最大承受體積(40 mL·kg-1)的劑量給藥(相當(dāng)于成人臨床用藥的200倍)；第三組給鹿茸大補(bǔ)湯濃度1.3 g·mL-1，按照小鼠體質(zhì)量10 mL·kg-1的劑量給藥(相當(dāng)于成人臨床用藥的50倍)；第四組給鹿茸大補(bǔ)湯濃度2.6 g·mL-1，小鼠灌胃最大承受體積(40 mL·kg-1)，一次性灌胃給藥(相當(dāng)于成人臨床用藥的200倍)[6]，給藥后自由進(jìn)食和飲水，連續(xù)觀察3 d。期間每天對(duì)小鼠進(jìn)行觀察體態(tài)、體征、飲水量、攝食量等[7]。

1.2.2 一般急性毒性實(shí)驗(yàn)

將42只18～22 g昆明小鼠取回后，按性別放入清潔培養(yǎng)箱中，適應(yīng)環(huán)境飼養(yǎng)3 d，經(jīng)籠旁觀察動(dòng)物的精神、活動(dòng)、飲食、大小便等生理活動(dòng)[8]。按性別隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、麻黃定喘湯給藥組和鹿茸大補(bǔ)湯給藥組，每組各14只，雌、雄各半，分籠飼養(yǎng)[9]。實(shí)驗(yàn)前，禁水食12 h，生理鹽水對(duì)照組；0.9%NaCl溶液，按照小鼠體質(zhì)量10 mL·kg-1的劑量給藥；麻黃定喘湯給藥組：給予藥物濃度2.3 g·mL-1，按照小鼠體質(zhì)量10 mL·kg-1的劑量給藥(相當(dāng)于成人臨床用藥的100倍)；鹿茸大補(bǔ)湯給藥組：給予藥物濃度2.6 g·mL-1，按照小鼠體質(zhì)量10 mL·kg-1的劑量給藥(相當(dāng)于成人臨床用藥的100倍)。一次性灌胃給藥，自由進(jìn)水食，連續(xù)觀察7 d，詳細(xì)記錄小鼠每日攝食量、體質(zhì)量、神情狀態(tài)及死亡情況等[10]。7 d后，用頸椎脫臼法將小鼠處死，解剖觀察，取腦、肝、脾、肺、腎臟器稱重，計(jì)算臟器系數(shù)[11]。對(duì)小鼠組織進(jìn)行生化檢查，測(cè)得谷草轉(zhuǎn)氨酶活力(U/gprot)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力(U/gprot)。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果

2.1 預(yù)實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

小鼠灌胃后，立即觀察到，麻黃定喘湯給藥組和鹿茸大補(bǔ)湯給藥組的小鼠活動(dòng)均減少，高劑量組小鼠部分出現(xiàn)胃痙攣和心跳過(guò)速等現(xiàn)象，0.5 h后恢復(fù)正常，觀察3 d，毛色光滑正常，大小便正常，眼、鼻、口腔未見(jiàn)異常分泌物，無(wú)運(yùn)動(dòng)失調(diào)，呼吸、進(jìn)食、飲水均正常，無(wú)死亡現(xiàn)象。處死后，觀察各臟器均無(wú)明顯異常。未見(jiàn)死亡現(xiàn)象，無(wú)法測(cè)得半數(shù)致死量(LD50)。

2.2 小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)

2.2.1 一般情況

以23 000 mg·kg-1麻黃定喘湯和26 000 mg·kg-1鹿茸大補(bǔ)湯分別給藥(相當(dāng)于成人臨床用藥的100倍)，灌胃處理后，小鼠生長(zhǎng)情況良好，體質(zhì)量增長(zhǎng)正常，無(wú)中毒死亡癥狀。觀察7 d后，將小鼠解剖觀察，各臟器均無(wú)明顯異常。通過(guò)經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)，根據(jù)我國(guó)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003年版)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，屬無(wú)毒級(jí)。見(jiàn)表1。

2.2.2 各組實(shí)驗(yàn)小鼠體質(zhì)量的變化

通過(guò)每日稱量小鼠體質(zhì)量，麻黃定喘湯組和鹿茸大補(bǔ)湯組實(shí)驗(yàn)小鼠的體質(zhì)量分別與生理鹽水對(duì)照組的比較，無(wú)明顯差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

2.2.3 各組實(shí)驗(yàn)小鼠攝食量的變化

通過(guò)每日稱量小鼠攝食量，麻黃定喘湯組和鹿茸大補(bǔ)湯組實(shí)驗(yàn)小鼠的攝食量分別與生理鹽水對(duì)照組比較，無(wú)明顯差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表1 各給藥組急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 各給藥組實(shí)驗(yàn)小鼠體質(zhì)量的變化

表3 各給藥組實(shí)驗(yàn)小鼠攝食量的變化

2.2.4 各組實(shí)驗(yàn)小鼠的總食物利用率

通過(guò)每組實(shí)驗(yàn)小鼠的總增重量和總進(jìn)食量，計(jì)算總食物利用率(總食物利用率=總增重量/總進(jìn)食量×100%)。麻黃定喘湯組和鹿茸大補(bǔ)湯組實(shí)驗(yàn)小鼠的總食物利用率分別與生理鹽水對(duì)照組比較，無(wú)明顯差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表4。

表4 各組實(shí)驗(yàn)小鼠的總食物利用率

2.2.5 各組實(shí)驗(yàn)小鼠臟器重量的變化

觀察結(jié)束后，解剖小鼠，取腦、肝臟、脾臟、肺及腎臟，稱重并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。麻黃定喘湯組和鹿茸大補(bǔ)湯組實(shí)驗(yàn)小鼠的各臟器重量分別與生理鹽水對(duì)照組比較，無(wú)明顯差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表5。

2.2.6 各組實(shí)驗(yàn)小鼠臟器系數(shù)比較

通過(guò)稱量實(shí)驗(yàn)小鼠各臟器的重量和體質(zhì)量，計(jì)算各臟器系數(shù)(臟器系數(shù)=臟器重量/體質(zhì)量)。麻黃定喘湯組和鹿茸大補(bǔ)湯組實(shí)驗(yàn)小鼠的臟器系數(shù)分別與生理鹽水對(duì)照組比較，無(wú)明顯差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表6。

2.2.7 各組實(shí)驗(yàn)小鼠生化指標(biāo)結(jié)果

通過(guò)谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST/GOT)測(cè)試盒和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)測(cè)試盒，對(duì)小鼠組織進(jìn)行測(cè)量，測(cè)得谷草轉(zhuǎn)氨酶活力(U/gprot)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力(U/gprot)。麻黃定喘湯組和鹿茸大補(bǔ)湯組實(shí)驗(yàn)小鼠的酶活力分別與生理鹽水對(duì)照組比較，無(wú)明顯差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表7。

表5 各組實(shí)驗(yàn)小鼠臟器重量的變化

表6 各組實(shí)驗(yàn)小鼠臟器系數(shù)比較

表7 各組實(shí)驗(yàn)小鼠生化指標(biāo)結(jié)果

3 討論

朝醫(yī)藥是我國(guó)傳統(tǒng)文化智慧的結(jié)晶，具有獨(dú)特的哲學(xué)思想及理論體系[12]。朝醫(yī)藥和中醫(yī)藥都是在中國(guó)古代哲學(xué)和經(jīng)驗(yàn)總結(jié)基礎(chǔ)上發(fā)展而成的完整的醫(yī)藥學(xué)體系，有著緊密不可分的聯(lián)系[13]。隨著現(xiàn)代朝醫(yī)藥事業(yè)的高速發(fā)展,朝醫(yī)藥在世界范圍內(nèi)防病與治病的有效性[14]得到了更為廣泛的認(rèn)可，配方的毒性安全性日益受到了人們的重視。哮喘病發(fā)病率上升，朝醫(yī)學(xué)通常用補(bǔ)肺潤(rùn)肺，益精血之藥物來(lái)辨象論治此病[15]。麻黃定喘湯和鹿茸大補(bǔ)湯均出自《東醫(yī)壽世保元》，都為治太陰人,喘氣困難而設(shè),補(bǔ)小瀉大，用于太陰人哮喘效果頗佳[16]，所以比較研究其毒性。由于這兩服藥在臨床的有效性和特殊性明顯，安全性評(píng)價(jià)就尤為重要。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)急性毒性實(shí)驗(yàn)，研究麻黃定喘湯和鹿茸大補(bǔ)湯對(duì)小鼠的急性毒性作用。由于預(yù)實(shí)驗(yàn)無(wú)法測(cè)得半數(shù)致死量，采用臨床成人藥量100倍作為實(shí)驗(yàn)劑量，來(lái)評(píng)價(jià)其安全性。通過(guò)對(duì)小鼠一般情況進(jìn)行比較(實(shí)驗(yàn)前體質(zhì)量和終止實(shí)驗(yàn)時(shí)體質(zhì)量比較)，各組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。研究小鼠每日體質(zhì)量變化和每日攝食量變化，與生理鹽水對(duì)照組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。分析小鼠總食物利用率，各組數(shù)值之間大致一致，通過(guò)統(tǒng)計(jì)分析，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。將小鼠解剖后，取其各臟器進(jìn)行比較，計(jì)算其臟器系數(shù)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。通過(guò)谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST/GOT)測(cè)試盒和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)測(cè)試盒測(cè)定，計(jì)算各組谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST/GOT)活力和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)活力，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。通過(guò)急性實(shí)驗(yàn)，對(duì)小鼠進(jìn)行觀察，通過(guò)記錄體質(zhì)量、攝食量，并觀察其臟器的病理變化和臟器系數(shù)，對(duì)其生化指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，從各個(gè)方面與對(duì)照組進(jìn)行對(duì)比研究，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，可以得出結(jié)論，其臨床成人用藥量100倍劑量對(duì)小鼠無(wú)明顯急性毒性，通過(guò)急性毒性原理，麻黃定喘湯和鹿茸大補(bǔ)湯安全性較高，臨床中可以適量使用。但是由于兩方在臨床用藥中的有效性和特殊性，日后仍需通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究評(píng)價(jià)其慢性毒性，綜合評(píng)價(jià)其安全毒性。

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