郭 咚，張 鋼，陳 靜，周 鼎

(長(zhǎng)沙血液中心檢驗(yàn)科，湖南 長(zhǎng)沙 410000)

我國(guó)丙型肝炎病毒(HCV)感染率大約為0.43%，HCV感染者還在逐年上升，是當(dāng)今感染HCV人口最多的國(guó)家[1]。隨著無(wú)償獻(xiàn)血血篩試劑的發(fā)展，我國(guó)獻(xiàn)血者中HCV流行率逐步下降[2]。 現(xiàn)階段大多數(shù)血站實(shí)驗(yàn)室在抗- HCV檢測(cè)上選擇四代檢測(cè)試劑盒與三代檢測(cè)試劑盒聯(lián)合檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者血液篩查標(biāo)本抗- HCV檢測(cè)的結(jié)果分析，對(duì)第三代、第四代抗HCV試劑的性能進(jìn)行評(píng)估。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本：2014年～2016年長(zhǎng)沙市無(wú)償獻(xiàn)血者常規(guī)血液篩查標(biāo)本417 044份。

1.2試劑和儀器：檢驗(yàn)設(shè)備使用瑞士Hamilton Star全自動(dòng)加樣儀、瑞士Hamilton FAME24/30全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)系統(tǒng)；第三代抗-HCV檢測(cè)試劑由上?？迫A生物工程股份有限公司提供，第四代試劑由北京萬(wàn)泰生物制品有限公司試劑盒提供；各濃度質(zhì)控物由北京金豪制藥股份有限公司提供；抗-HCV血清盤(pán)由北京康徹思坦生物技術(shù)有限公司提供。以上試劑及質(zhì)控物均在有效期內(nèi)使用。

1.3方法：使用第三代、第四代抗HCV檢測(cè)試劑盒對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者血篩標(biāo)本進(jìn)行兩次平行檢測(cè)。某種時(shí)間初次檢測(cè)結(jié)果為反應(yīng)性時(shí)，使用原試劑進(jìn)行雙孔復(fù)查。結(jié)果判斷：第三代、第四代抗HCV檢測(cè)試劑盒均設(shè)置灰區(qū)范圍(S/CO值：0.5～1.0)整個(gè)檢測(cè)過(guò)程中，按照試劑使用說(shuō)明書(shū)要求，在全自動(dòng)設(shè)備上完成所有步驟。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用χ2檢驗(yàn)，將數(shù)據(jù)導(dǎo)入SPSS 23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1使用濃度為1NCU/ml北京金豪抗-HCV質(zhì)控物(批號(hào)20150717)，連續(xù)檢測(cè)20 d，對(duì)精密度進(jìn)行估計(jì)。萬(wàn)泰四代χ2值=7.57，CV%=9.7%，科華三代χ2值=3.15，VC%=12.8。

2.2康徹思坦丙肝病毒抗體血清盤(pán)(批號(hào)20160611)，對(duì)靈敏度、特異性進(jìn)行評(píng)估。見(jiàn)表2。

2.3檢出限檢測(cè)結(jié)果：梯度稀釋樣本5份(L1～5)，L5為基質(zhì)液，其他4份(L1～4)為陽(yáng)性梯度稀釋樣本。見(jiàn)表3。

表1兩種試劑血清盤(pán)檢測(cè)結(jié)果

標(biāo)本號(hào)確認(rèn)結(jié)果萬(wàn)泰四代科華三代標(biāo)本號(hào)確認(rèn)結(jié)果萬(wàn)泰四代科華三代1---21+++2+++22+++3+++23---4---24---5---25+++6+++26---7+++27---8---28---9---29+++10+++30+++11---31+++12---32+++13+++33---14---34---15---35+++16+++36+++17+++37---18---38---19+++39---20+++40+++

表2兩種試劑檢出限結(jié)果

標(biāo)本號(hào)L1L2L3L4L5濃度(NCU/ml)4210.5基質(zhì)液科華三代(S/CO)7.43.21.50.960.01萬(wàn)泰四代(S/CO)13.76.43.41.80.01

2.4平行檢測(cè)2014年～2016年長(zhǎng)沙市無(wú)償獻(xiàn)血者血液篩查標(biāo)本417 044份，對(duì)兩試劑檢測(cè)結(jié)果的符合性進(jìn)行估計(jì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。見(jiàn)表3。

表3兩種試劑平行檢測(cè)結(jié)果

科華三代萬(wàn)泰四代 陽(yáng)性 陰性 總計(jì)陽(yáng)性32635361陰性722415 961416 683總計(jì)1 048415 996417 044

3 討論

實(shí)驗(yàn)室使用的第三代檢測(cè)試劑盒為間接法，包被于微孔板內(nèi)飾基因重組表達(dá)的丙肝抗原；使用的第四代檢測(cè)試劑盒為雙抗原的夾心法，除包被了丙肝抗原外，還加入了生物素化丙肝抗原，形成“包被抗原-抗體-生物素化抗原”復(fù)合物。從同濃度的質(zhì)控品重復(fù)性檢測(cè)結(jié)果以及試劑檢出限檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，第四代檢測(cè)試劑盒靈敏度較第三代檢測(cè)試劑盒有較大的提高。這是因?yàn)槿f(wàn)泰第四代檢測(cè)試劑盒使用了生物素-親和素級(jí)聯(lián)放大系統(tǒng)，提升了檢測(cè)試劑的靈敏度。而雙抗原夾心法增加了IgM的檢測(cè)。IgM較IgG出現(xiàn)的早，縮短了窗口期。同時(shí)另外四代檢測(cè)試劑加樣量的增加使檢測(cè)重復(fù)性更好。

2014年～2016年長(zhǎng)沙市無(wú)償獻(xiàn)血者血液篩查標(biāo)本417044份的兩種試劑平行檢測(cè)符合性結(jié)果為99.8%，尤其是四代檢測(cè)試劑的灰區(qū)和假陽(yáng)性標(biāo)本大幅度減少，說(shuō)明該試劑檢測(cè)特異性較好。另外，由于血清中非特異性IgG以及類(lèi)風(fēng)濕因子等的干擾而造成的假陽(yáng)性反應(yīng)。而萬(wàn)泰四代使用了基因工程重組表達(dá)的抗原作為原料取代了酶標(biāo)二抗，原料純度大幅度高，提高了特異性。

目前我國(guó)大多數(shù)血站對(duì)獻(xiàn)血者抗- HCV初篩檢測(cè)仍采用兩遍的ELISA法，其初篩反應(yīng)性樣本的正確率約為30%左右[3]；而各血站對(duì)試劑的灰區(qū)設(shè)置非常的嚴(yán)格，初篩檢測(cè)灰區(qū)淘汰的獻(xiàn)血者和單試劑反應(yīng)性淘汰的獻(xiàn)血者確認(rèn)陽(yáng)性率則會(huì)更低。而這部分獻(xiàn)血者被檢測(cè)結(jié)果為“不合格”而被淘汰。試劑靈敏度的提高提前了窗口期，保證了血液安全弱陽(yáng)性標(biāo)本能夠檢出，保證了血液安全；特異性的提升，使灰區(qū)及假陽(yáng)性的標(biāo)本減少，避免了灰區(qū)標(biāo)本重復(fù)試驗(yàn)帶來(lái)的成本增加和工作量增加，避免血液報(bào)廢節(jié)約成本、避免獻(xiàn)血員的流失血源緊張。

因此，這幾年我國(guó)越來(lái)越多血站開(kāi)始關(guān)注獻(xiàn)血者歸隊(duì)問(wèn)題，并根據(jù)各自實(shí)驗(yàn)室的情況，制定對(duì)淘汰的獻(xiàn)血員再次抽取血液進(jìn)行確證試驗(yàn)，并對(duì)假陽(yáng)性相對(duì)應(yīng)的獻(xiàn)血者保留資格[4]。同時(shí)通過(guò)各種大型的招募活動(dòng)，培養(yǎng)獻(xiàn)血者的忠誠(chéng)度，發(fā)展固定的獻(xiàn)血者隊(duì)伍，也是血站保障血液安全的措施[5]。但是近幾年有高危行為獻(xiàn)血者也參與到無(wú)償獻(xiàn)血中，也給采供血機(jī)構(gòu)提出了巨大的挑戰(zhàn)。有研究顯示，男男同性戀者中抗-HCV流行率約為0.07%～2.9%，其感染HCV的危險(xiǎn)性是一般人群的3倍[6]。

2015年國(guó)家衛(wèi)計(jì)委要求核酸檢測(cè)覆蓋全國(guó)無(wú)償獻(xiàn)血標(biāo)本篩查，仍有但經(jīng)核酸檢測(cè)為陰性而ELISA檢測(cè)為陽(yáng)性的報(bào)道[7]。所以核酸檢測(cè) HCV RNA雖可以縮短窗口期，但還是存在漏檢風(fēng)險(xiǎn)[8]，NAT檢測(cè)為陰性而 ELISA檢測(cè)為陽(yáng)性，則說(shuō)明 ELISA法在血液篩查的作用仍然不能被忽略。ELISA檢測(cè)的是其抗體，而核酸檢測(cè)的是HCV RNA，就檢測(cè)原理的理論上來(lái)說(shuō)，這兩種方法對(duì)同一標(biāo)本的兩次檢測(cè)結(jié)果是互補(bǔ)的。2015版血站技術(shù)操作規(guī)程血液檢測(cè)方法中增加了針對(duì)血清學(xué)標(biāo)志物的其他檢測(cè)手段，即化學(xué)發(fā)光免疫分析試驗(yàn)(CLIA)。朱為剛，曾勁峰等研究表明[9]，將化學(xué)發(fā)光法與NAT檢測(cè)相結(jié)合的方案，在采供血機(jī)構(gòu)值得推廣，能進(jìn)一步保障血液安全。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 潘華偉,苑 遠(yuǎn).丙型肝炎病毒感染的流行病學(xué)研究進(jìn)展[J].吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào),2017,38(2):123.

[2] 楊海英,汪 峰,費(fèi)靜嫻,等.浙江省湖州地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血人群丙肝感染危險(xiǎn)因素分析[J].臨床血液學(xué)雜志(輸血與檢驗(yàn)),2017,30(02):305.

[3] 張秀慧,鐘政榮,余加宏.獻(xiàn)血者抗-HCV檢測(cè)及確認(rèn)結(jié)果研究進(jìn)展[J].安徽醫(yī)學(xué),2015,36(1):122.

[4] 李 玲,劉 忠.初篩反應(yīng)性獻(xiàn)血者確證方案與歸隊(duì)策略分析[J].中國(guó)輸血雜志,2016,29(1):1.

[5] 康瑞博,王 戴.無(wú)償獻(xiàn)血者抗-HCV篩查結(jié)果與ALT檢測(cè)結(jié)果關(guān)系的分析[J].吉林醫(yī)學(xué),2012,33(05):906.

[6] Hahné Susan J M，Veldhuijzen I K，Lucas W，et al.Infection with hepatitis B and C virus in Europe：a systematic review of prevalence and cost-effectiveness of screening[J].Bmc Infectious Diseases，2013，13(1):181.

[7] 劉峭梅,覃柳燕.獻(xiàn)血者血液?jiǎn)稳朔莺怂釞z測(cè)及血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果的分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2014,11(1):102.

[8] 蔣昵真,胡文佳,朱勝江,等.江蘇省反應(yīng)性獻(xiàn)血者屏蔽、保留與歸隊(duì)情況分析[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2017,38(10):1299.

[9] 朱為剛,曾勁峰,李 彤,等.一種化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑在血液篩查中的應(yīng)用評(píng)估[J].中國(guó)輸血雜志,2016,29(06):581.