錢亮棗莊礦業(yè)集團棗莊醫(yī)院檢驗科，山東棗莊 277101

結(jié)核性腹膜炎（Tuberculous peritonitis,TBP）是指結(jié)核肝菌所致的腹膜彌漫性、慢性炎癥，主要由血行播散或腹膜內(nèi)結(jié)核直接蔓延而來。由于TBP發(fā)病隱匿，加之臨床癥狀與體征無特異性與典型性，所以極易發(fā)生漏診與誤診[1]。T細胞斑點試驗（T-SPOT.TB）又稱為結(jié)核感染干擾素釋放試驗，其通過預先設計完成的抗體捕獲細胞分泌的特殊因子，并利用酶聯(lián)斑點顯色方式檢測，檢測時間僅為16～24 h，為患者診療爭取了寶貴的時間。腺苷脫氨酶（adenosine deaminase,ADA）主要存在于胸腺、脾與其他淋巴組織內(nèi)，是診斷結(jié)核性胸膜炎的重要指標之一[2]。為了進一步完善TBP的臨床診斷質(zhì)量，該研究回顧性分析2016年5月—2017年5月該院收治的68例結(jié)核性腹膜炎患者的臨床資料，分析TSPOT.TB檢測聯(lián)合ADA應用于TBP診斷中的價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析該院收治的68例TBP患者的臨床資料，其中男 23 例，女 45 例；年齡 18～73 歲，平均（48.5±5.6）歲。納入標準：所有患者經(jīng)腹腔鏡、超聲引導下腹腔穿刺獲取腹膜組織，并經(jīng)病理診斷證實；該次研究內(nèi)容已告知患者與其家屬知情，并已簽署同意書。排除標準：伴有其他免疫系統(tǒng)疾病與血液系統(tǒng)疾病。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 儀器：自動酶標儀，水浴鍋、CO2培養(yǎng)箱。T-SPOT.TB試劑盒由英國Oxford Immunotec提供，ADA試劑由北京世紀沃德生物科技有限公司提供。

1.2.2 檢測方法 該組68例TBP患者均采用T-SPOT.TB與ADA檢驗。T-SPOT.TB：采集患者靜脈血5 mL，之后以枸櫞酸鈉抗凝，分離靜脈血得到單個核細胞，制成2.0×106/mL細胞懸液（陰性對照），陽性對照為植物血凝素，刺激抗原為結(jié)核分枝桿菌特性抗原培養(yǎng)濾液蛋白與早期分泌抗原靶蛋白。將細胞懸液2.5×105/mL個細胞加入每個孔中，并放置在5%二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)時間為18～20 h。完成洗板后加入生物素標記的二抗，在2～8℃的狀態(tài)下反應1 h，再次洗板，之后加入顯色劑，顯色時間7 min，去離子水沖洗，干燥通風處培養(yǎng)2～3 h，最后在顯微鏡觀察下記錄斑點數(shù)。評價標準：實驗孔斑點數(shù)-空白孔斑點數(shù)在6個或以上，空白孔內(nèi)斑點數(shù)在6個以下為陽性；實驗孔斑點數(shù)是空白孔斑點數(shù)的2倍及以上，空白孔斑點數(shù)在6個及以上為陽性。ADA：經(jīng)腹腔穿刺獲取患者腹水，標本采集后以3 000 r/min的速度離心15 min，留置上清液，分裝后存儲在-70℃冰箱內(nèi)待檢，具體檢驗方法嚴格按照說明書內(nèi)容執(zhí)行。評價標準：ADA≥40 U/L為陽性。

1.3 觀察指標

①對比單純T-SPOT.TB、ADA檢驗與T-SPOT.TB+ADA聯(lián)合檢測該組TBP的陽性率；②對比單純TSPOT.TB、ADA檢驗與T-SPOT.TB+ADA聯(lián)合檢測該組TBP的敏感性、特異性、陽性與陰性預測值。

1.4 統(tǒng)計方法

該研究數(shù)據(jù)均采用SPSS 15.0統(tǒng)計學軟件處理與分析，計數(shù)資料以[n（%）]表示，組間對比以 χ2檢驗，檢驗水準α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 單純T-SPOT.TB、ADA與T-SPOT.TB+ADA聯(lián)合檢測TBP的陽性率對比

T-SPOT.TB+ADA檢驗該組TBP的陽性率為100.00%，高于單純T-SPOT.TB的91.18%與ADA的89.71%（χ2=4.359、5.422，P＜0.05）；單純 T-SPOT.TB 與ADA檢驗該組TBP的陽性率對比差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.851，P＞0.05）。 見表 1。

表1 單純T-SPOT.TB、ADA檢驗與T-SPOT.TB+ADA聯(lián)合檢測TBP的陽性率對比[n（%）]

2.2 單純T-SPOT.TB、ADA檢驗與T-SPOT.TB+ADA聯(lián)合檢測TBP的敏感性、特異性、陽性與陰性預測值對比

T-SPOT.TB+ADA檢測該組TBP的敏感性、特異性、陽性預測值與陰性預測值分別為100.00%、98.53%、100.00%、98.53%，均高于單純T-SPOT.TB的91.18%、87.88%、88.57%、90.63%與 ADA 的 89.71%、89.39%、89.71%、89.39%（與 T-SPOT.TB 對比，χ2=4.526、4.052、4.868、4.256，P＜0.05； 與 ADA 對 比 ，χ2=4.856、4.756、4.856、4.756，P＜0.05）。 單純 T-SPOT.TB 與 ADA 檢驗該組TBP的敏感性、特異性、陽性預測值與陰性預測值對比差異無統(tǒng)計學意義 （χ2=0.845、1.526、1.056、0.685，P＞0.05）。 見表 2。

表2 單純T-SPOT.TB、ADA檢驗與T-SPOT.TB+ADA聯(lián)合檢測TBP的敏感性、特異性、陽性與陰性預測值對比（%）

3 討論

據(jù)相關調(diào)查顯示，TBP的發(fā)生率約占腹部結(jié)核的31%～58%，在肺外結(jié)核中位列第6名[3-4]。目前，TBP診斷除了依靠患者腹腔積液常規(guī)化驗，以及臨床癥狀與體征，最常用的方法則為結(jié)核菌素試驗。然而，部分研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)核菌素試驗、非結(jié)核分枝桿菌與卡介菌的抗原易出現(xiàn)交叉反應，而在我國非結(jié)核分枝桿菌感染率與卡介苗接種率較高的情況下，結(jié)核菌素試驗診斷TBP的假陽性情況十分常見，且特異度較低[5-6]。同時，結(jié)核菌素試驗可以受到免疫因素的影響，對于慢性營養(yǎng)不良、年老體虛、妊娠女性、嬰幼兒、HIV感染等群體均可出現(xiàn)假陰性，靈敏度不夠理想。雖然腹水培養(yǎng)是診斷TBP 的“金標準”，但檢驗周期過長（1～2個月），易延誤患者的治療時機[7]。壞死肉芽組織等病理學方法也可以診斷TBP，但因獲取病理對機體損傷性較大，所以臨床開展仍有一定的局限性[8]。因此，探尋一種有效的檢驗手段，保證TBP患者的診療質(zhì)量十分必要。

T-SPOT.TB是診斷結(jié)核分枝桿菌的新技術，因其高敏感度，現(xiàn)已在臨床得到了廣泛的應用[9]。T-SPOT.TB的原理是：機體在結(jié)核桿菌抗原的刺激作用下，其外周血核淋巴細胞形成特異性T淋巴細胞，此類T淋巴細胞與同類抗原結(jié)合后可以產(chǎn)生γ-干擾素。T-SPOT.TB通過檢測體內(nèi)分泌γ-干擾素的細胞數(shù)目，繼而判定有無結(jié)核桿菌感染。學者鐘一鳴等[10]報道，T-SPOT.TB診斷肺結(jié)核的特異度為87.93%，敏感率為90.63%。同時，ADA是嘌呤核苷代謝中重要的酶類，主要分布在胸腺、脾和其他淋巴組織中[11-12]。結(jié)核是T淋巴細胞所介導的細胞免疫，TBP患者腹水與血清內(nèi)ADA活性均明顯增高。學者周樂亮等[13]將ADA≥30 U/L作為陽性診斷界值，檢測TBP的特異度為100.00%，敏感度為36.4%。ADA在體內(nèi)活性較高，且與機體免疫系統(tǒng)具有密切的相關性，當免疫細胞受到刺激時，細胞內(nèi)ADA水平即可呈現(xiàn)出高表達[14]?，F(xiàn)階段，已有許多研究證實TSPOT.TB與ADA在結(jié)核性胸膜炎、胸腔積液等疾病的診斷中具有重要的應用價值，但對于二者應用于TBP診斷中的報道十分少見[15]。該研究對T-SPOT.TB檢測聯(lián)合ADA應用于TBP診斷中的效果進行分析，結(jié)果顯示，T-SPOT.TB+ADA檢驗該組TB檢測聯(lián)合ADA應用于TBP患者中，可以有效提高診斷質(zhì)量，具有顯著的臨床應用價值。

[1]景安薇,葉賢偉,張湘燕.結(jié)核感染T細胞斑點試驗在胸部結(jié)核中的診斷價值[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2017,33(23):3571-3572，3577.

[2]吳長靜.腦脊液與外周血T-SPOT.TB檢測在結(jié)核性腦膜炎診斷中的臨床應用價值[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2017,38(22):3122-3124.

[3]石學萍,王晶,王鑫,等.結(jié)核分枝桿菌感染T細胞斑點試驗在疑診肺結(jié)核患者中的臨床應用[J].解放軍醫(yī)學雜志,2017,42(11):996-1000.

[4]石學萍,吳劍,劉丹玉,等.菌陽肺結(jié)核患者結(jié)核感染T細胞斑點試驗陰性臨床分析[J].新疆醫(yī)學,2017,47(10):1176-1178.

[5]Geurts M,Scheijmans FE,van Seeters T,et al.Temporal profile of body temperature in acute ischemic stroke:relation to infarct size and outcome[J].BMC Neurol,2016,20(1):233．

[6]聶仁,宋懷宇.少數(shù)民族地區(qū)結(jié)核性腹膜炎87例臨床特點研究[J].臨床合理用藥雜志,2017,10(15):164-168.

[7]黃漢鵬.比較結(jié)核感染T細胞斑點試驗、結(jié)核菌素試驗以及血清結(jié)核抗體檢測對診斷肺結(jié)核的價值[J].中外醫(yī)療,2016,35(35):41-42，45.

[8]唐鳳英,張偉,楊銀利,等.結(jié)核感染T細胞斑點試驗在結(jié)核性胸腹水診斷中的應用[J].臨床醫(yī)學研究與實踐,2016,1(23):1-4.

[9]雷立軍.腹腔積液常用生化指標在基層醫(yī)院的診斷價值[J].實用醫(yī)技雜志,2016,23(9):990-991.

[10]鐘一鳴,谷秀梅,劉文恩,等.T細胞斑點試驗輔助診斷不同部位肺外結(jié)核感染的應用[J].中華醫(yī)院感染學雜志,2014,24(17):4415-4417.

[11]白文靜,胡型忠,施伎嬋,等.外周血結(jié)核感染T細胞斑點試驗在結(jié)核病中的應用價值研究[J].浙江醫(yī)學,2015,37(14):1209-1211，1218.

[12]王永,姜巖.結(jié)核感染T細胞斑點試驗診斷結(jié)核性腹腔積液的臨床價值[J].哈爾濱醫(yī)科大學學報,2015,49(2):165-167.

[13]周樂亮,沈守榮,何苗,等.結(jié)核感染 T細胞斑點試驗對結(jié)核性腹膜炎的診斷價值[J].中南大學學報：醫(yī)學版，2013,38(5):526-531.

[14]Schneider T,Brownlee W,Zhang H,et al.Sensitivity of multishell NODDI to multiple sclerosis white matterchanges:a pilot study[J].Funct Neurol,2017,12(2):97-101．

[15]王強,徐柳,單寶珍,等.T淋巴細胞斑點試驗在結(jié)核性腹膜炎診斷中的臨床應用價值[J].臨床消化病雜志,2014,26(1):9-10.