杜忠偉 胡志強(qiáng) 亢學(xué)平 王 旭 王 鑫 崔長(zhǎng)根

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晶粒鬼傘母種培養(yǎng)基的篩選試驗(yàn)

杜忠偉 胡志強(qiáng) 亢學(xué)平 王 旭 王 鑫*崔長(zhǎng)根

（延邊朝鮮族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院，吉林 延邊 133000）

通過(guò)分別設(shè)置不同的氮源（蛋白胨、硝酸銨、谷氨酸、尿素）、碳源（葡萄糖、蔗糖、淀粉、玉米粉）和pH（5、6、7、8）培養(yǎng)基對(duì)晶粒鬼傘子實(shí)體組織分離獲得的菌種進(jìn)行培養(yǎng)，測(cè)試不同培養(yǎng)基對(duì)菌絲生長(zhǎng)速度和長(zhǎng)勢(shì)的影響，結(jié)果為：適宜的碳源為玉米粉，氮源為硝酸銨，pH為5。

晶粒鬼傘；組織分離；菌絲生長(zhǎng)；培養(yǎng)基；碳源；氮源；pH

菌物是生物中的一個(gè)龐大的類(lèi)群，我國(guó)已知真菌約14 060種[1]。我國(guó)野生大型真菌分布廣泛，種類(lèi)繁多，采集大型真菌標(biāo)本進(jìn)行鑒定和研究可以使我們更深入了解不同真菌的特點(diǎn)。

晶粒鬼傘，又稱(chēng)晶粒小鬼傘（），春、秋季叢生或群生于闊葉林地面，分布廣泛[2]。據(jù)報(bào)道，其初期幼嫩時(shí)可食，最好不與酒同吃，以免中毒；晶粒鬼傘對(duì)小白鼠肉瘤180的抑制率為70%，對(duì)艾氏癌的抑制率為80%；其還可產(chǎn)生腺嘌呤、膽堿和色胺等生物堿[3]。

本試驗(yàn)以晶粒鬼傘子實(shí)體組織分離獲得的菌種作為研究對(duì)象，設(shè)計(jì)制作不同的碳源、氮源、pH培養(yǎng)基，觀察菌絲長(zhǎng)勢(shì)并測(cè)定平均生長(zhǎng)速度，以篩選出晶粒鬼傘適宜的營(yíng)養(yǎng)組成配方，為馴化栽培提供基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試菌種為2015年8月在長(zhǎng)白山采集獲得的晶粒鬼傘子實(shí)體，經(jīng)組織分離置于PDA培養(yǎng)基斜面試管中，25 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)獲得，菌種編號(hào)YBC-1。母種培養(yǎng)基配方設(shè)置如下。

（1）不同碳源培養(yǎng)基配方。馬鈴薯200 g（煮汁過(guò)濾），瓊脂20 g，水1 000 mL。分別用葡萄糖、蔗糖、淀粉、玉米粉各20 g作為碳源，pH中性。

（2）不同氮源培養(yǎng)基配方。葡萄糖20 g、瓊脂20 g、水1 000 mL，分別用蛋白胨、硝酸銨、谷氨酸、尿素各20 g代替PDA培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸汁作為氮源，pH中性。

（3）不同pH培養(yǎng)基配方。馬鈴薯200 g（煮汁過(guò)濾）、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、水1 000 mL。分別用10%鹽酸和10%氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至5、6、7、8。

配制好的培養(yǎng)基分別裝入經(jīng)標(biāo)記的三角瓶中，與包好的培養(yǎng)皿平板一起121 ℃高壓滅菌30 min，滅菌完畢后，快速取出并移入超凈工作臺(tái)中紫外殺菌30 min，然后趁熱將培養(yǎng)基倒入平板培養(yǎng)皿中，標(biāo)記，備用。

1.2 試驗(yàn)方法

（1）菌種提純。將子實(shí)體分離獲得的試管菌種，無(wú)菌操作接種至PDA平板培養(yǎng)皿中，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)至菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿。

表1 不同碳源、氮源和pH培養(yǎng)基的菌絲生長(zhǎng)速度和長(zhǎng)勢(shì)

注：菌絲長(zhǎng)速為7天4次重復(fù)的平均值；＋＋＋表示菌絲生長(zhǎng)勢(shì)好，＋＋表示菌絲生長(zhǎng)勢(shì)一般，＋表示菌絲生長(zhǎng)勢(shì)差。同列不同小寫(xiě)字母表示差異顯著（＜0.05）。

（2）碳氮源、pH試驗(yàn)。將提純后的菌絲體沿菌落的邊緣用5 mm打孔器接種于培養(yǎng)皿平板中央，每個(gè)處理4次重復(fù)，25 ℃恒溫培養(yǎng)。

每天早晚定時(shí)觀察菌落的生長(zhǎng)狀況，從接種的第二天開(kāi)始測(cè)量培養(yǎng)皿中的菌落半徑，采用十字劃線法，分別在早上8時(shí)和晚上8時(shí)觀察菌落并劃線，測(cè)定時(shí)間為7天。以平板中菌落半徑日增長(zhǎng)量計(jì)算菌絲平均生長(zhǎng)速度，并觀察記錄菌絲顏色，氣生菌絲量，分析菌絲生長(zhǎng)速度的差異性及不同碳氮源、pH對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響，以判斷菌絲對(duì)培養(yǎng)基的適應(yīng)能力[4]。

注：培養(yǎng)皿A～D分別表示在葡萄糖、蔗糖、淀粉、玉米粉培養(yǎng)基中形成的菌落；培養(yǎng)皿E～H分別表示在蛋白胨、硝酸銨、尿素、谷氨酸培養(yǎng)基中形成的菌落；培養(yǎng)皿I～L分別表示在pH 5、6、7、8的培養(yǎng)基中形成的菌落。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同碳源培養(yǎng)基菌絲生長(zhǎng)情況

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，晶粒鬼傘在玉米粉為碳源的培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)快，長(zhǎng)勢(shì)好，菌落形態(tài)好，菌絲潔白；在淀粉和蔗糖培養(yǎng)基中菌絲生長(zhǎng)緩慢，但菌落形態(tài)較好；在葡萄糖培養(yǎng)基中菌絲生長(zhǎng)慢，長(zhǎng)勢(shì)稀疏（表1，圖1的ABCD）。分析原因，可能是因?yàn)橛衩追蹱I(yíng)養(yǎng)成分較豐富，而蔗糖為二糖，淀粉為多糖，均好于單糖葡萄糖。碳源種類(lèi)豐富的培養(yǎng)基，菌絲生長(zhǎng)更好。

2.2 不同氮源培養(yǎng)基菌絲生長(zhǎng)情況

試驗(yàn)結(jié)果顯示，以硝酸銨作為氮源，晶粒鬼傘菌絲生長(zhǎng)快，長(zhǎng)勢(shì)好，菌落形態(tài)好，菌絲潔白；以尿素為氮源菌絲不生長(zhǎng)，可能是由于尿素培養(yǎng)基堿性太強(qiáng)，抑制菌絲生長(zhǎng)；以蛋白胨和谷氨酸為氮源，菌絲生長(zhǎng)速度較慢，長(zhǎng)勢(shì)一般，但蛋白胨作為氮源形成的菌落好于谷氨酸（表1，圖1的EFGH）。

2.3 不同pH培養(yǎng)基菌絲生長(zhǎng)情況

從試驗(yàn)結(jié)果看，晶粒鬼傘菌絲最適pH為5，在酸性培養(yǎng)基中生長(zhǎng)快，長(zhǎng)勢(shì)好，菌落形態(tài)好；在pH 6和7的培養(yǎng)基中菌絲生長(zhǎng)速度一般，菌落形態(tài)相當(dāng)，長(zhǎng)勢(shì)一般；在pH為8時(shí)菌絲生長(zhǎng)慢，長(zhǎng)勢(shì)差，菌落形態(tài)聚集不規(guī)則（表1，圖1的IJKL），由此可知，堿性條件抑制菌絲生長(zhǎng)。

3 小 結(jié)

在菌物資源馴化過(guò)程中，不同種類(lèi)對(duì)生長(zhǎng)條件都有其選擇特異性，同一個(gè)種的不同菌株也會(huì)存在差異。碳源、氮源、酸堿度等是大型真菌生長(zhǎng)的必需條件，對(duì)其進(jìn)行試驗(yàn)研究可以為菌株資源的后期利用提供條件。

本研究選擇的晶粒鬼傘是野外采集常見(jiàn)的一種大型真菌，通過(guò)采用不同碳源、氮源和pH培養(yǎng)基對(duì)晶粒鬼傘進(jìn)行菌絲培養(yǎng)，研究其菌絲生長(zhǎng)的適宜條件，結(jié)果為，晶粒鬼傘適宜碳源為玉米粉，適宜氮源為硝酸銨，適宜酸堿度為5。

[1] 戴玉成, 莊劍云. 中國(guó)菌物已知種數(shù)[J]. 菌物學(xué)報(bào), 2010, 29(5): 625-628.

[2] 李玉, 李泰輝, 楊祝良, 等. 中國(guó)大型菌物資源圖鑒[M].鄭州: 中原農(nóng)民出版社, 2015: 772.

[3] 宋剛, 孫麗華, 王黎元. 賀蘭山大型真菌圖鑒[M]. 銀川:黃河出版?zhèn)髅郊瘓F(tuán)寧夏人民出版社, 2011: 114-145.

[4] 李丹, 戴月婷, 李玉. 對(duì)采自黑龍江五個(gè)大型真菌菌株最佳培養(yǎng)條件的篩選[J]. 北方園藝, 2014(22): 154-157.

王鑫，女，研究員，從事食藥用菌栽培育種研究，E-mail: ybnkysyj@163.com。

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