王琳琳 劉蕾

摘 要：目的 通過(guò)研究CDX2、CYP24A1在大腸癌中的表達(dá)研究，探討CDX2和CYP24A1的相關(guān)性。方法 應(yīng)用免疫組化S-P法檢測(cè)100例大腸癌組織及20例正常大腸癌組織中CDX2和CYP24A1的表達(dá)。結(jié)果 大腸癌組織中的CDX2和CYP24A1的蛋白表達(dá)低于正常大腸癌組織中的表達(dá)（P<0.05）， 以正常大腸組織作為對(duì)照，CDX2 的蛋白水平表達(dá)量為100.00%， 癌旁組織和大腸癌組織的 CDX2 蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為77.12%、46.65%。CYP24A1 的蛋白水平表達(dá)量為 43.81%， 癌旁組織和大腸癌組織的 CYP24A1 蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為75.00%、96.82%。通過(guò)Pearson相關(guān)分析顯示CDX2蛋白表達(dá)水平與CYP24A1蛋白表達(dá)水平之間呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系（P<0.05）。結(jié)論 CDX2和CYP24A1是具有較高敏感性的腸上皮特異性標(biāo)志物，聯(lián)合檢測(cè)CDX2和CYP24A1的表達(dá)有助于鑒別良惡性大腸腫瘤。

關(guān)鍵詞：CDX2；CYP24A1；大腸癌；免疫組織化學(xué)

中圖分類號(hào)：R735.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.07.023

文章編號(hào)：1006-1959（2018）07-0072-03

The Expression of CDX2 and CYP24A1 in Colorectal Cancer

WANG Lin-lin1，2，LIU Lei1

（1.Jiamusi University，Jiamusi 154007，Heilongjiang，China；

2.Mudanjiang Medical University，Mudanjiang 157000，Heilongjiang，China）

Abstract：Objective To study the expression of CDX2 and CYP24A1 in colorectal cancer and to explore the correlation between CDX2 and CYP24A1.Methods The expression of CDX2 and CYP24A1 in 100 cases of colorectal carcinoma and 20 cases of normal colorectal carcinoma were detected by immunohistochemical S-P method.Results The expression is lower than that of normal colorectal carcinoma in colorectal carcinoma CDX2 and CYP24A1 protein expression（P<0.05），in normal colorectal tissues as the control group， the protein level of CDX2 expression was 100.00%， the relative expression of carcinoma and colorectal cancer CDX2 protein were 77.12% and 46.65%.The protein level of CYP24A1 was 43.81%，and the relative expression of CYP24A1 protein in para cancer tissue and colorectal carcinoma tissue was 75.00% and 96.82%，respectively.The Pearson correlation analysis showed a significant negative correlation between CDX2 protein expression and CYP24A1 protein expression（P<0.05）.Conclusion CDX2 and CYP24A1 are highly specific intestinal epithelial specific markers.The combined detection of CDX2 and CYP24A1 expression is helpful to distinguish between benign and malignant colorectal tumors.

Key words：CDX2；CYP24A1；Colorectal cancer；Immunohistochemistry

近些年，我國(guó)大腸癌發(fā)病率迅速上升，在黑龍江地區(qū)大腸癌發(fā)生率位居第二位。隨著分子生物學(xué)，基因?qū)W的發(fā)展，人們逐漸認(rèn)識(shí)到只有從基因水平著手才能從根本上治愈腫瘤[1] 。CDX2和CYP24A1分別是近年來(lái)國(guó)內(nèi)外報(bào)道的與腸癌相關(guān)的分子標(biāo)記物，但研究成果較少，還需進(jìn)一步研究證實(shí)。CDX2 （caudal type ho-meobox transcriptionfactor 2）是一種新發(fā)現(xiàn)的特異性的核轉(zhuǎn)錄因子對(duì)腸道上皮細(xì)胞增殖、 分化的調(diào)控起著重要作用，可能具有抑癌基因的作用。 已有研究表明，CDX2 對(duì)大腸癌在內(nèi)的消化道惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移具有抑制作用，但具體機(jī)制尚未明確[2-4]。有研究報(bào)道活性維生素D（1α，25（OH）2D3）不僅能夠抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞分化與凋亡、增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)作用，還可以降低癌癥發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[5，6]，維生素D的限速酶CYP24A1是一個(gè)潛在的癌基因，在乳腺癌、肺癌、食管癌等組織中異常表達(dá)且與腫瘤惡性程度及患者不良預(yù)后相關(guān)[7-9]。本研究通過(guò)免疫組化法探討CDX2與CYP24A1在大腸癌發(fā)生的過(guò)程中的作用及的相互關(guān)系，為臨床診斷、治療大腸腫瘤提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料 本實(shí)驗(yàn)收集牡丹江市腫瘤醫(yī)院2015年1月～2017年1月手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的石蠟包埋組織標(biāo)本100例，男54例，女46例，年齡32～89，平均年齡（59.5±11.4）歲。術(shù)前均未行放化療。取近端距腫瘤5 cm的10例癌旁組織及病理學(xué)檢查證實(shí)，無(wú)癌腫浸潤(rùn)的10例正常腸粘膜組織做對(duì)照。

1.2主要試劑與方法 兔抗人CYP24A1單克隆抗體、兔抗人CDX2單克隆抗體、SP試劑盒和DAB顯色劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)公司。實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)法SP法（鏈酶卵白素-過(guò)氧化酶法）。以大腸癌陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替第一抗體隱性對(duì)照。

1.3結(jié)果判定 CDX2和CYP24A1均采用隨機(jī)選擇 5 個(gè)高倍鏡視野（400×）進(jìn)行判斷，結(jié)果判定以細(xì)胞內(nèi)染色強(qiáng)度和染色陽(yáng)性百分率得分的乘積進(jìn)行評(píng)分，按四級(jí)分法綜合評(píng)定。CDX2判定標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性細(xì)胞占視野10%～25%（+）， 25%～50%（++）， >50%（+++），陽(yáng)性細(xì)胞 <10%為（-）。CYP24A1判定標(biāo)準(zhǔn)：①無(wú)染色為 0 分，淡黃色為 1 分，棕黃色為 2 分，棕褐色為 3 分；②細(xì)胞陽(yáng)性率陰性為 0 分，陽(yáng)性細(xì)胞≤10%為 1 分，>10%～50%為 2 分，>50%～75%為 3 分，>75%為4 分。將上述 2 種評(píng)分相乘之積作為評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，分?jǐn)?shù)為 3分及以上作為陽(yáng)性結(jié)果，<3 分作為陰性結(jié)果。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用 SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料使用（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，方差分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 CDX2在不同大腸組織中的表達(dá) 以正常大腸組織作為對(duì)照，CDX2 的蛋白水平表達(dá)量為 100.00%， 癌旁組織和大腸癌組織的 CDX2 蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為77.12%、46.65%，見(jiàn)圖 1。 正常大腸組織、癌旁組織、大腸癌組織的 CDX2 RNA 水平及蛋白水平的表達(dá)均呈遞減趨勢(shì)。正常大腸上皮組織中CDX2 陽(yáng)性染色位于細(xì)胞核，而細(xì)胞質(zhì)不著色，見(jiàn)圖2。

圖1 不同大腸組織CDX2 蛋白的相對(duì)表達(dá)量

注：A為正常組織；B為癌旁組織 ；C為大腸癌組織

圖2 正常大腸上皮組織中CDX2 陽(yáng)性染色

2.2 CYP24A1在不同大腸癌組織中的表達(dá) 正常大腸組織蛋白水平表達(dá)量為43.81%；癌旁組織和大腸癌組織的 CYP24A1 蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為75.00%、96.82%。正常大腸組織、癌旁組織、大腸癌組織的表達(dá)呈遞增趨勢(shì)，見(jiàn)圖3；CYP24A1陽(yáng)性染色位于細(xì)胞質(zhì)，以核周及核膜明顯，有的胞質(zhì)內(nèi)呈彌漫性均質(zhì)性陽(yáng)性，細(xì)胞核不著色，見(jiàn)圖4。

圖 3 蛋白含量

注：A為正常組織；B為癌旁組織 ；C為大腸癌組織

圖4 CYP24A1陽(yáng)性染色

2.3 CDX4與CYP24A1表達(dá)與大腸癌臨床病理因素的關(guān)系 見(jiàn)表1。

2.4 CDX4與CYP24A1之間的相關(guān)性 在100例大腸癌患者中，CYP24A1-/CDX2-11 例，CYP24A1+/CDX2-39 例，CYP24A1-/CDX2+45例，CYP24A1+/CDX2+5 例。Pearson相關(guān)性分析顯示CDX4與CYP24A1蛋白表達(dá)之間成負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.673，P<0.05）。

3討論

3.1 CDX2在大腸組織的表達(dá)及其與臨床病理因素的關(guān)系 CDX2 是一種尾型同源盒基因，主要分布在十二指腸到肛管的腸道上皮細(xì)胞中，其主要作用是調(diào)節(jié)正常腸道上皮細(xì)胞的正常發(fā)育和分化，研究證實(shí)CDX2是一種腫瘤抑制基因，如果 CDX2 的表達(dá)降低或者缺失就會(huì)引起一系列的基因調(diào)控異常而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。本研究結(jié)果顯示，CDX2陽(yáng)性染色位于細(xì)胞核中，在正常大腸黏膜、癌旁組織及大腸腫瘤中的表達(dá)率分別為100.00%、77.12%、46.65% ，呈現(xiàn)下調(diào)表達(dá)趨勢(shì)，在直結(jié)腸癌中的表達(dá)隨著細(xì)胞分化程度的減低而減少，部分癌組織中表達(dá)缺失。說(shuō)明CDX2參與了大腸癌的發(fā)生，是鑒別大腸腫瘤良惡性非常好的生物學(xué)標(biāo)志物之一，促進(jìn)CDX2的表達(dá)有可能抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移。CDX2在結(jié)直癌組織中的表達(dá)與浸潤(rùn)深度、Dukes分期、腫瘤的分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

3.2 CYP24A1在大腸組織的表達(dá)及其與臨床病理因素的關(guān)系 許多流行病學(xué)證據(jù)表明，維生素 D 缺乏會(huì)增加多種癌癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，維生素 D的活性成分，1α，25-二羥基維生素 D3，1α，25（OH）2D3可減低小鼠腸道炎癥程度和范圍[10]，對(duì)肝癌、胃癌、結(jié)直腸癌、肺癌、鱗狀細(xì)胞癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌和前列腺癌等具有一定的抗腫瘤作用，它不僅能抑制腫瘤細(xì)胞增殖，還能誘導(dǎo)細(xì)胞分化與凋亡。CYP24A1 是主要的1α，25（OH）2D3鈍化酶，被認(rèn)為是決定 1α，25（OH）2D3生理半衰期的關(guān)鍵因子。CYP24A1 的高表達(dá)可能是影響癌癥發(fā)生、發(fā)展的重要因素之一，CYP24A1的表達(dá)與血清25（OH）2D3水平呈負(fù)相關(guān)，抑制 CYP24A1 的活性是延緩活性維生素 D3的降解和增強(qiáng)其生理功能的有效方法。研究證實(shí)，在結(jié)腸癌的發(fā)生過(guò)程中1α，25（OH）2D3的代謝酶 CYP24A1的表達(dá)量顯著增加，且 CYP24A1 水平越高，大腸癌的惡性程度越高。抑制CYP24A1的表達(dá)將增強(qiáng)1α，25（OH）2D3的抗腫瘤活性。

3.3 CDX2和CYP24A1在大腸癌中表達(dá)的相關(guān)性 本研究通過(guò)Pearson相關(guān)分析顯示CDX2蛋白表達(dá)水平與CYP24A1蛋白表達(dá)水平之間呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系（P<0.05），提示二者可能存有機(jī)制上的相關(guān)性，因此，通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)CDX2、CYP24A1的表達(dá)，更能客觀的反應(yīng)大腸腫瘤的惡性程度。

綜上所述，CDX2和CYP24A1是具有較高敏感性的腸上皮特異性標(biāo)志物，在大腸癌的發(fā)生中具有重要作用，通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)CDX2和CYP24A1的表達(dá)有助于鑒別良惡性大腸腫瘤，并且在指導(dǎo)臨床治療，判斷患者的預(yù)后具有一定的指導(dǎo)意義。

參考文獻(xiàn)：

[1]駱禮波.VEGF-A和MVD在大腸癌中的表達(dá)及預(yù)后意義[D].遵義醫(yī)學(xué)院，2014.

[2]趙航，宋燕，姜洋，等.PTEN與CDX2在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2009，13（02）：235-236.

[3]王敏，尚培中，張鵬，等.CDX2和p120ctn在結(jié)直腸癌組織中的臨床意義[J].山東醫(yī)藥，2012，52（16）：84-86，107.

[4]孫東升，曾兆林，劉世丹，等.大腸癌組織中P38-MAPK通路對(duì)CDX2表達(dá)影響的研究[J].中國(guó)現(xiàn)代普通外科進(jìn)展，2014，17（02）：130-133.

[5]龐田田，李游山，白瑜，等.基于CYP24A1的癌癥治療研究進(jìn)展[J].陜西理工學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2016，32（03）：65-70，77.

[6]孫鴻燕.結(jié)直腸癌中CYP24A1異常表達(dá)的臨床意義及調(diào)控機(jī)制的研究[D].吉林大學(xué)，2017.

[7]Chen X Q，Mao J Y，Li W B，et al.Association betweenCYP24A1polymorphisms and the risk of colonic polyps and colon cancer in a Chinese population[J].World Journal of Gastroenterology，2017，23（28）：5179-5186.

[8]袁磊，隆霜，田茗源.VDR和CYP24A1在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2017，33（11）：1625-1627，1631.

[9]譚芳，張明亮.CDX2與LI-cadherin在人大腸腺癌中的表達(dá)及意義[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2011，9（16）：80-81.

[10]高群廣.CDX2、KISS-1在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及相關(guān)性研究[D].河北醫(yī)科大學(xué)，2011.

收稿日期：2017-12-29；修回日期：2018-1-31

編輯/李樺