張熙　陳德波　王青蘭

【摘要】 目的：探討CD44+/CD24-細胞在乳腺癌患者不同時期外周血中的表達。方法：隨機選取2011年1月-2013年6月筆者所在醫(yī)院收治的乳腺癌患者30例，將其作為乳腺癌組，另選取筆者所在醫(yī)院同期收治的30例乳腺良性病患者為良性組，對兩組患者不同時期外周血中CD44+/CD24-細胞表達情況進行分析。結果：乳腺癌組化療后和淋巴結陽性患者外周血中CD44+/CD24-細胞表達均顯著高于良性組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），但術前、術后、淋巴結陰性患者外周血中CD44+/CD24-細胞表達和良性組之間差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），而化療后患者外周血中CD44+/CD24-細胞表達顯著高于術前、術后，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），淋巴結陽性患者外周血中CD44+/CD24-細胞表達顯著高于淋巴結陰性患者，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論：檢測CD44+/CD24-細胞在乳腺癌患者不同時期外周血中的表達能夠為臨床患者病情的評估及預后的判斷工作提供有效依據，值得臨床充分重視。

【關鍵詞】 CD44+/CD24-細胞； 乳腺癌； 不同時期； 外周血

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2018.3.043 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2018）03-0083-02

相關醫(yī)學研究表明，轉移與復發(fā)極易在微轉移的情況下發(fā)生，腫瘤干細胞（tumor stem cells，TSC）的提出將新的理論基礎提供給了腫瘤早期微轉移[1-2]。大多數腫瘤細胞處于有限增殖或不增殖狀態(tài)，但是TSC的轉移侵襲能力更強，對外周血中TSC的存在進行檢測具有極為重要的臨床意義[3]。本研究探討了CD44+/CD24-細胞在乳腺癌患者不同時期外周血中的表達，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取2011年1月-2013年6月筆者所在醫(yī)院收治的乳腺癌患者30例，作為乳腺癌組。納入標準：所有患者均經病理學檢查確診為初治原發(fā)性浸潤性導管癌，均為女性，將抽血前接受過治療的患者排除在外。患者年齡45～85歲，平均（65.3±10.2）歲。在化療方案方面，6例為多西他賽+環(huán)磷酰胺，10例為多西他賽+表柔比星+環(huán)磷酰胺，14例為表柔比星+環(huán)磷酰胺+5FU；在淋巴結轉移方面，16例有，14例無。另選取筆者所在醫(yī)院同期收治的乳腺良性病患者為良性組，年齡46～85歲，平均（66.2±10.4）歲。兩組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 采用美國BD公司生產的CD44-APC、異硫氰酸熒光素（CD24-FITC）、流式細胞儀（FACSCalibur，美國），高速離心機Centrifuge 5810R（Eppendorf），日本東芝公司生產的超低溫冰箱（-80℃），生物倒置顯微鏡系統(tǒng)（OLYMPUS）。

1.2.2 測定方法 術前1 d督促兩組患者空腹，不接受任何治療，取出其2 ml外周靜脈血，抗凝后送檢。將10 μl CD24、CD44抗體加入其中，混勻，進行15 min的避光，將500 μl溶血素加入其中，混勻，進行10 min的避光，將2 ml PBS加入其中，以1 500 r/min的速率進行5 min離心，將上清液棄去，瀝干，將500 μl PBS加入其中，混勻，上機檢測。

1.3 陽性判斷標準

乳腺癌的陽性判斷標準為CD44呈胞膜著色、CD24呈胞質著色。上機檢測，對CD44+/CD24-淋巴細胞數和陽性細胞數進行計數，計算陽性率[4]。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件處理數據，CD44+/CD24-細胞表達情況以（x±s）表示，采用F或t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

乳腺癌組化療后和淋巴結陽性患者外周血中CD44+/CD24-細胞表達均顯著高于良性組（t=6.294 4、3.169 9，P=0.000 0、0.002 4），但術前、術后、淋巴結陰性患者外周血中CD44+/CD24-細胞表達和良性組之間差異無統(tǒng)計學意義（t=0.102 4、0.131 3、0.843 3，P=0.918 8、0.896 0、0.402 5），而化療后患者外周血中CD44+/CD24-細胞表達又顯著高于術前、術后（t=4.943 7、5.871 2，P=0.000 0、0.000 0），淋巴結陽性患者外周血中CD44+/CD24-細胞表達顯著高于淋巴結陰性患者（t=3.373 7，P=0.001 3），見表1。

3 討論

近年來，在我國，乳腺癌的基礎及臨床研究發(fā)展迅速，在極大程度上改善了患者的生活質量，但是仍然具有較高的死亡率，而死亡極易在遠處轉移的情況下發(fā)生[5]。相關醫(yī)學研究將這種和腫瘤類似的細胞從死于癌癥的患者的外周血中分離出來，將循環(huán)腫瘤細胞（Circulating tumor cell，CTC）的概念提了出來[6]。乳腺癌初期就能夠檢測CTC，患者預后受到臨床分期、是否轉移的直接影響。轉移灶并不一定在存在CTC的情況下形成，TSC學說認為，大多數CTC只具有有限的增殖能力或不具有分化增殖能力，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著極為重要作用的TSC僅占總數較小的比例[7]。TSC概念的提出將新的方向提供給了乳腺癌微轉移的研究。相關醫(yī)學研究表明，外周血TSC表達和淋巴結轉移情況呈顯著的正相關關系，以此認為對TSC進行明確檢測，一方面能夠將有效依據提供給臨床評估乳腺癌患者病情工作，另一方面還能夠將有效依據提供給臨床對乳腺癌患者預后的判斷工作[8-10]。

本研究結果表明，乳腺癌組患者術前、化療后、術后外周血中CD44+/CD24-細胞表達分別為（20.7±9.4）%、（31.9±8.1）%、（20.7±6.6）%，淋巴結陽性、淋巴結陰性患者外周血中CD44+/CD24-細胞表達分別為（27.5±10.2）%、（19.4±8.3）%，良性組患者外周血中CD44+/CD24-細胞表達為（20.9±5.1）%。乳腺癌組化療后、淋巴結陽性患者外周血中CD44+/CD24-細胞表達均顯著高于良性組（P<0.05），但術前、術后、淋巴結陰性患者外周血中CD44+/CD24-細胞表達和良性組之間比較，差異均不顯著（P>0.05），而化療后患者外周血中CD44+/CD24-細胞表達又顯著高于術前、術后（P<0.05），淋巴結陽性患者外周血中CD44+/CD24-細胞表達顯著高于淋巴結陰性患者（P<0.05），和上述相關醫(yī)學研究結果一致。發(fā)生這一現象的原因可能為化療一方面能夠將腫瘤細胞殺傷，另一方面也會殺傷包括淋巴細胞在內的正常細胞。與TSC減少情況相比，淋巴細胞數量減少情況顯著較高，從而提升了其比值?？梢灶A測治療結束一段時間后，患者恢復了免疫狀態(tài)，可能會導致患者外周血中具有顯著較低的TSC檢測比值。本試驗良性疾病患者系導管內乳頭狀瘤、乳腺葉狀腫瘤等，其病情和癌前期病變接近[11-12]。趙長嘯等[13]研究報告中，采取流式細胞術相關雙染技術對50例存在原發(fā)性乳腺浸潤性導管癌的患者在術前、術后2周、2個周期化療之后和50例存在良性乳腺疾病的患者其外周血中淋巴細胞內CD44+/CD24-細胞數值，結果提示，CD44+/CD24-細胞于乳腺癌患者和良性乳腺疾病患者中的外周血淋巴細胞內都存在表達現象，而且，乳癌患者2個周期化療之后的CD44+/CD24-細胞數值（31.882 8%）和術前（20.725 8%）對比，差異顯著（P<0.05），而且，化療之后的CD44+/CD24-細胞數值顯著提升，乳癌患者術后的外周血淋巴細胞內CD44+/CD24-細胞數值（20.696 2%）和術前（20.725 8%）對比，差異不顯著（P>0.05）。乳癌患者術前和乳腺良性腫瘤患者的外周血淋巴細胞中CD44+/CD24-細胞數值對比（20.725 8%、20.874 6%），差異不顯著（P>0.05）。存在淋巴結轉移組和不存在淋巴結轉移組的外周血淋巴細胞內CD44+/CD24-細胞數值對比（27.573 7%、19.460 9%），差異顯著（P<0.05）。與此文結果具有相似之處。不過，本文研究仍存在不足，本研究并沒有比較乳腺癌患者和健康者的情況，下一步試驗應該將健康者的資料收集起來進行進一步深入研究。

總之，檢測CD44+/CD24-細胞在乳腺癌患者不同時期外周血中的表達能夠為臨床患者病情的評估及預后的判斷工作提供有效依據，值得臨床充分重視。

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（收稿日期：2017-01-03）