于穎

摘 要：本實驗采用不同廠家的色譜柱對乙酰螺旋霉素原料中的單乙酰螺旋霉素Ⅱ、單乙酰螺旋霉素Ⅲ、雙乙酰螺旋霉素Ⅱ、雙乙酰螺旋霉素Ⅲ的進(jìn)行了含量測定。方法：采用C18 色譜柱，乙腈-0.1mol/L醋酸銨溶液（60：40）（用醋酸調(diào)PH值至7.2）為流動相，檢測波長為232nm，流速為1.0ml/min。單乙酰螺旋霉素Ⅱ、單乙酰螺旋霉素Ⅲ、雙乙酰螺旋霉素Ⅱ、雙乙酰螺旋霉素Ⅲ總回收率為99.5%。結(jié)論：本法簡便、準(zhǔn)確，可用于乙酰螺旋霉素原料中單乙酰螺旋霉素Ⅱ、單乙酰螺旋霉素Ⅲ、雙乙酰螺旋霉素Ⅱ、雙乙酰螺旋霉素Ⅲ的含量測定。采用不同廠家的色譜柱對乙酰螺旋霉素原料的測定結(jié)果無明顯影響。

關(guān)鍵詞：乙酰螺旋霉素原料；含量；測定

乙酰螺旋霉素為堿性的多組分抗生素，是單乙酰螺旋霉素Ⅱ、單乙酰螺旋霉素Ⅲ、雙乙酰螺旋霉素Ⅱ和雙乙酰螺旋霉素Ⅲ四個組分為主的混合物。乙酰螺旋霉素適應(yīng)癥為適用于敏感葡萄球菌、鏈球菌屬和肺炎鏈球菌所致的輕、中度感染，如咽炎、扁桃體炎、鼻竇炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作、皮膚軟組織感染等，為治療妊娠期婦女弓形體病的選用藥物。本實驗采用不同廠家的色譜柱對乙酰螺旋霉素原料中的單乙酰螺旋霉素Ⅱ、單乙酰螺旋霉素Ⅲ、雙乙酰螺旋霉素Ⅱ、雙乙酰螺旋霉素Ⅲ的進(jìn)行了含量測定。

1儀器與試藥

1.1儀器：HWP-5實驗室蒸餾水器（鄭州澤銘科技有限公司）；HAD-KQ-300GVDV三頻恒溫數(shù)控超聲波清洗器（北京恒奧德儀器儀表有限公司）；賽默飛Spectronic 200可見分光光度計（百道亨儀器設(shè)備（北京）有限公司）；依利特iChrom 5100高效液相色譜儀（廣州艾欣科學(xué)儀器有限公司 ）；FA1004A電子天平（成都市科恒達(dá)儀器設(shè)備有限責(zé)任公司）；WC-52B1精密恒溫槽（上海思爾達(dá)科學(xué)儀器有限公司）。

1.2色譜柱：C18色譜柱（220 mm×4.6mm，5μm）。

1.3對照品：乙酰螺旋霉素

1.4試劑：甲醇（武漢強(qiáng)松精細(xì)化學(xué)品有限公司）、乙腈（永華化學(xué)科技（江蘇）有限公司）、十二烷基磺酸鈉（武漢強(qiáng)松精細(xì)化學(xué)品有限公司）、三乙胺（武漢強(qiáng)松精細(xì)化學(xué)品有限公司）、磷酸（武漢強(qiáng)松精細(xì)化學(xué)品有限公司）、磷酸二氫鈉（武漢強(qiáng)松精細(xì)化學(xué)品有限公司）。

2測定方法確定

2.1色譜條件

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[1-5]。流動相：乙腈-0.1mol/L醋酸銨溶液（60：40）（用醋酸調(diào)PH值至7.2）為流動相，檢測波長：232nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取乙酰螺旋霉素對照品適量，置容量瓶中，加流動相制成每1mL含1.0mg的溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備

取供試品適量，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入流動相10mL，密塞，精密稱定重量，超聲處理5分鐘，放冷，精密稱定，用流動相補(bǔ)足重量，濾過。取續(xù)濾液，即得。

2.4精密度試驗

精密稱取乙酰螺旋霉素對照品適量，加流動相使溶解，制成濃度為1.0mg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄單乙酰螺旋霉素Ⅱ、單乙酰螺旋霉素Ⅲ、雙乙酰螺旋霉素Ⅱ、雙乙酰螺旋霉素Ⅲ總峰面積。結(jié)果，RSD=0.67%，表明本方法精密度良好。

2.5重現(xiàn)性試驗

稱取同一批的乙酰螺旋霉素原料樣品6份，按測定方法項下的方法制備供試品溶液，測定單乙酰螺旋霉素Ⅱ、單乙酰螺旋霉素Ⅲ、雙乙酰螺旋霉素Ⅱ、雙乙酰螺旋霉素Ⅲ總含量并計算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.72%，結(jié)果表明此方法重現(xiàn)性較好。

2.6準(zhǔn)確度試驗

精密稱取已知含量的樣品9份，分別精密加入乙酰螺旋霉素對照品，按項下方法制備成120% 140%、160%。取模擬樣品照試驗方法試驗，計算單乙酰螺旋霉素Ⅱ、單乙酰螺旋霉素Ⅲ、雙乙酰螺旋霉素Ⅱ、雙乙酰螺旋霉素Ⅲ總回收率為99.5%， RSD為0.92%。

2.7樣品穩(wěn)定性試驗

取同一批乙酰螺旋霉素原料樣品，按2.3項下的供試品制備方法制備供試品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、1、2、3、4小時，精密吸取供試品溶液10μl 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測定乙酰螺旋霉素原料中單乙酰螺旋霉素Ⅱ、單乙酰螺旋霉素Ⅲ、雙乙酰螺旋霉素Ⅱ、雙乙酰螺旋霉素Ⅲ總峰面積的RSD=0.83%。結(jié)果表明供試品4小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.8樣品含量測定

依照上述含量測定方法，采用不同廠家的色譜柱測定乙酰螺旋霉素原料三批樣品中單乙酰螺旋霉素Ⅱ、單乙酰螺旋霉素Ⅲ、雙乙酰螺旋霉素Ⅱ、雙乙酰螺旋霉素Ⅲ總含量，結(jié)果表明采用不同廠家的色譜柱對乙酰螺旋霉素原料的測定結(jié)果無明顯影響。

3討論

分別考察乙腈-0.1mol/L醋酸銨溶液（60：40）（用醋酸調(diào)PH值至7.2），甲醇-0.1mol/L醋酸銨溶液（60：40）（用醋酸調(diào)PH值至7.2），乙腈-0.1mol/L醋酸銨溶液（70：30）（用醋酸調(diào)PH值至7.2），乙腈-0.033 mol/L磷酸二氫鉀溶液（40：60），乙腈-0.1mol/L醋酸銨溶液（60：40）（用醋酸調(diào)PH值至7.5），乙腈-0.1%磷酸（50：50，每100mL加十二烷基磺酸鈉0.1g）不同比例的流動相，結(jié)果以乙腈-0.1mol/L醋酸銨溶液（60：40）（用醋酸調(diào)PH值至7.2）為流動相為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈-0.1mol/L醋酸銨溶液（60：40）（用醋酸調(diào)PH值至7.2）為流動相。本實驗表明此方法分離效果好、方法簡便、快捷、準(zhǔn)確，、專屬性好，可用于乙酰螺旋霉素原料中乙酰螺旋霉素的含量測定。采用不同廠家的色譜柱對乙酰螺旋霉素原料的測定結(jié)果無明顯影響。

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