王姣

摘 要：本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)復(fù)方依托紅霉素洗劑中的依托紅霉素的進(jìn)行了含量測(cè)定。方法：采用C18 色譜柱，10mmol/L十二烷基硫酸鈉溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（55：45：0.2：0.01）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為205nm，流速為1.0ml/min。依托紅霉素在0.1～2.5mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.99995）。依托紅霉素平均回收率分別為99.5%。結(jié)論：本法簡便、準(zhǔn)確，可用于復(fù)方依托紅霉素洗劑中依托紅霉素的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：復(fù)方依托紅霉素洗劑；含量；測(cè)定

依托紅霉素為紅霉素丙酸酯的十二烷基硫酸鹽，中文別名為紅霉素丙酸脂十二烷基硫酸鹽、紅霉素硫酸月桂酸酯、無味紅霉素干糖漿、紅霉素丙酸酯十二烷基硫酸鹽、無味紅霉素。依托紅霉素對(duì)葡萄球菌屬、各組鏈球菌和革蘭陽性桿菌均具抗菌活性。依托紅霉素系抑菌劑，但在高濃度時(shí)對(duì)某些細(xì)菌也具殺菌作用。高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography ＼ HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等，該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)復(fù)方依托紅霉素洗劑中的依托紅霉素的進(jìn)行了含量測(cè)定。

1儀器與試藥

1.1儀器：賽默飛Spectronic 200可見分光光度計(jì)（百道亨儀器設(shè)備（北京）有限公司）；Agilent 1260 液相色譜儀（上?？茖W(xué)儀器有限公司）；HWP-5實(shí)驗(yàn)室蒸餾水器（鄭州澤銘科技有限公司）；HAD-KQ-300GVDV三頻恒溫?cái)?shù)控超聲波清洗器（北京恒奧德儀器儀表有限公司）；Sail（賽爾）1000液相色譜儀（月旭科技（上海）股份有限公司）；DTA-27多功能靜音型臺(tái)式超聲波清洗機(jī)（鼎泰（湖北）生化科技設(shè)備制造公司）。

1.2色譜柱：迪馬C18鉆石色譜柱（220 mm×4.6mm，5μm）。

1.3對(duì)照品：依托紅霉素

1.4試劑：甲醇（武漢強(qiáng)松精細(xì)化學(xué)品有限公司）、乙腈（武漢強(qiáng)松精細(xì)化學(xué)品有限公司）、磷酸（上海江萊生物科技有限公司）、十二烷基磺酸鈉（武漢強(qiáng)松精細(xì)化學(xué)品有限公司）、三乙胺（武漢強(qiáng)松精細(xì)化學(xué)品有限公司）、磷酸二氫鈉（上海江萊生物科技有限公司）、氫氧化鈉（上海江萊生物科技有限公司）。

2測(cè)定方法確定

2.1色譜條件

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[3-5]。流動(dòng)相：10mmol/L十二烷基硫酸鈉溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（55：45：0.2：0.01）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長：205nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按依托紅霉素峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2對(duì)照品溶液的制備

精密稱取依托紅霉素對(duì)照品適量，置容量瓶中，加流動(dòng)相制成每1mL含1.0mg的依托紅霉素溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備

取復(fù)方依托紅霉素洗劑，精密量取，置10毫升容量瓶內(nèi)，用流動(dòng)相定容，搖勻，濾過，即得。

2.4精密度試驗(yàn)

精密吸取10μl依托紅霉素對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.66%，表明本方法精密度良好。

2.5對(duì)照品的線性考察

精密稱取適量依托紅霉素對(duì)照品，加入流動(dòng)相溶液使溶解分別配制成每毫升含0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5毫克的溶液。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，依托紅霉素在0.1～2.5mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6陰性溶液的制備

依照處方取除依托紅霉素以外的原輔料等，按樣品制備工藝制成陰性對(duì)照樣品，依上述方法測(cè)定，結(jié)果在依托紅霉素出峰處陰性液無色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.7重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的復(fù)方依托紅霉素洗劑樣品6份，測(cè)定含量并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.72%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8準(zhǔn)確度試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品9份，分別精密加入依托紅霉素對(duì)照品。取模擬樣品照試驗(yàn)方法試驗(yàn)，計(jì)算回收率為99.5%， RSD為0.71%。

2.9樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批復(fù)方依托紅霉素洗劑樣品，按2.3項(xiàng)下的供試品制備方法制備供試品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、1、2、3、4小時(shí)，精密吸取供試品溶液10μl 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測(cè)定復(fù)方依托紅霉素洗劑中依托紅霉素的RSD=0.83%。結(jié)果表明供試品4小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.10樣品含量測(cè)定

測(cè)定復(fù)方依托紅霉素洗劑三批樣品中依托紅霉素的含量，結(jié)果三批樣品的含量分別為標(biāo)示量的100.1%、99.8%、100.2%。

3討論

分別考察0.005 mol·L-1磷酸二氫鈉溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.7）-乙腈（54∶46），0.02 mol·L-1磷酸二氫鉀（氫氧化鈉調(diào)pH至6.0）-甲醇（4∶1），10mmol/L十二烷基硫酸鈉溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（55：45：0.2：0.01），乙腈-0.033 mol/L磷酸二氫鉀溶液（40：60），10mmol/L十二烷基硫酸鈉溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（50：50：0.1：0.01），乙腈-0.1%磷酸（40：60，每100mL加十二烷基磺酸鈉0.1g），不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以10mmol/L十二烷基硫酸鈉溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（55：45：0.2：0.01）為流動(dòng)相為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用10mmol/L十二烷基硫酸鈉溶液-乙腈-磷酸-三乙胺（55：45：0.2：0.01）為流動(dòng)相。本實(shí)驗(yàn)表明此方法分離效果好、方法簡便、快捷、準(zhǔn)確、專屬性好，可用于復(fù)方依托紅霉素洗劑中依托紅霉素的含量測(cè)定。

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