宮君相

摘 要：目的：運(yùn)用雙定性類型雙定量類型相似度作為基礎(chǔ)指標(biāo)，構(gòu)建復(fù)方丹參片指紋圖譜類型質(zhì)量控制措施。方法：運(yùn)用RP-HPLC檢測(cè)方式，并在試驗(yàn)中使用CenturySIL柱。優(yōu)化條件：在對(duì)指紋圖譜數(shù)據(jù)分析結(jié)果進(jìn)行優(yōu)化的時(shí)候，將指紋圖譜數(shù)據(jù)分析中的指數(shù)F當(dāng)做為數(shù)據(jù)優(yōu)化條件。流動(dòng)相：本實(shí)驗(yàn)中的流動(dòng)相為質(zhì)量分?jǐn)?shù)百分之一醋酸水溶液以及質(zhì)量分?jǐn)?shù)為百分之一的醋酸甲醇水溶液，進(jìn)行試驗(yàn)中的流動(dòng)洗。同時(shí)在實(shí)驗(yàn)中的紫外檢測(cè)波的波長(zhǎng)為290nm，控制實(shí)驗(yàn)反應(yīng)柱的柱溫?cái)?shù)值在30℃左右，檢測(cè)設(shè)備當(dāng)中的進(jìn)樣量速度設(shè)定為5微升。確定雙定性類型相似度標(biāo)準(zhǔn)的時(shí)候，要對(duì)20批的CSMT進(jìn)行系統(tǒng)的分析檢測(cè)，并以其中10批的CSMT數(shù)據(jù)檢測(cè)結(jié)果作為參照標(biāo)準(zhǔn)，生成相應(yīng)的指紋圖譜。之后就以REP為實(shí)驗(yàn)的計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)中共計(jì)20批次的CSMT進(jìn)行雙定性類型雙定量類型的數(shù)據(jù)分析，以色譜圖當(dāng)中指紋圖譜指數(shù)F為分析標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)分析中出現(xiàn)的42個(gè)實(shí)驗(yàn)信息數(shù)據(jù)進(jìn)行實(shí)際分析。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)分析中主要以異酚酸作為主要的參照物，根據(jù)數(shù)據(jù)分析確定了40個(gè)指紋峰峰位，確立了CMTS數(shù)據(jù)分析以及HPLC數(shù)據(jù)分析的指紋圖譜。在采用雙定性類型雙定量類型分析方式對(duì)20批次的實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)進(jìn)行分析檢驗(yàn)的時(shí)候，發(fā)現(xiàn)有8批次的實(shí)驗(yàn)樣品在其化學(xué)組成成分?jǐn)?shù)量方面、化學(xué)成分分布比例方面均為合的，其中有5批次實(shí)驗(yàn)樣品在檢驗(yàn)存在雙定性檢測(cè)數(shù)據(jù)不合格的問(wèn)題，而剩余的7批次實(shí)驗(yàn)分析數(shù)據(jù)顯示其含量偏低。結(jié)論：在采用隨機(jī)選擇方式抽查了20批次CMTS后，通過(guò)HPLC類型指紋圖譜鑒定檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，各方面數(shù)據(jù)完全合格的產(chǎn)品共計(jì)有8批次，在雙定性類型檢測(cè)中結(jié)果不合格的共有5批次，在相似度數(shù)據(jù)檢測(cè)中顯示產(chǎn)品不合格的共計(jì)有7批次。因此，該實(shí)驗(yàn)當(dāng)中所建立的CSMT類型HPLC數(shù)據(jù)指紋圖譜檢技術(shù)能被用作于CSMT藥物生產(chǎn)中的質(zhì)量控制環(huán)節(jié)。也表明了使用指紋圖譜類型數(shù)據(jù)分析技術(shù)以及變量類型的參數(shù)控技術(shù)能保證藥物生產(chǎn)當(dāng)中的質(zhì)量控制的效果。

關(guān)鍵詞：質(zhì)量控制；指紋圖譜；復(fù)方丹參片；質(zhì)量檢驗(yàn)

復(fù)方丹參片療效確切、不良反應(yīng)小且價(jià)格低廉，臨床應(yīng)用廣泛，主要用于冠心病、心絞痛、心肌梗塞等心血管疾病的預(yù)防和治療。復(fù)方丹參片主要含有水溶性的丹酚酸A、丹酚酸B、丹參素、原兒茶酸等酚酸類化合物和脂溶性的丹參酮ⅡA、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、二氫丹參酮Ⅰ等二萜醌類化合物及其他結(jié)構(gòu)類型的丹參內(nèi)酯類、生物堿類等多種化學(xué)成分。多數(shù)含量測(cè)定方法僅對(duì)其中的1種或幾種成分進(jìn)行檢測(cè)分析，無(wú)法從整體上控制其質(zhì)量。在本次實(shí)驗(yàn)分析中收集了不同藥物生產(chǎn)廠家所生產(chǎn)的20批次藥物進(jìn)行了分析，運(yùn)用雙定性類型雙定量類型相似度作為基礎(chǔ)指標(biāo)，構(gòu)建復(fù)方丹參片指紋圖譜類型質(zhì)量控制措施。

1 儀器與材料

Agilent1100型液相色譜儀（配有DAD、低壓四元梯度泵、在線脫氣裝置、自動(dòng)進(jìn)樣器，ChemStation工作站，美國(guó)Agilent公司），KQ-50B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），KDM型控溫電熱套（山東鄄城華魯儀器公司），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE52（上海亞榮生化儀器廠），SarturiusBS110S分析天平（北京賽多利斯天平有限公司）。甲醇、乙腈（色譜純，山東禹王實(shí)業(yè)有限公司禹城化工廠），冰乙酸（色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心），其他試劑均為分析純，水為去離子水。

2 方法以及實(shí)驗(yàn)條件

2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取原兒茶醛對(duì)照品5.0mg，置25mL量瓶中，用體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。精密稱取丹參酮ⅡA對(duì)照品5.0mg，置25mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。精密稱取丹酚酸B對(duì)照品5.0mg，置25mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 供試品溶液的制備

取5片復(fù)方丹參片（糖衣片去糖衣），研碎，加水50mL，回流提取2h，濾過(guò)，殘?jiān)铀?0mL繼續(xù)回流提取1.5h，濾過(guò)，合并2次濾液，減壓濃縮至20mL，加乙醇至體積分?jǐn)?shù)為80%冷處避光放置、醇沉24h，濾過(guò)，將樣品液濃縮至12.5mL，用甲醇稀釋至25mL，搖勻備用。另取5片復(fù)方丹參片（糖衣片去糖衣），研碎，加體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇溶液50mL，回流提取2h，濾過(guò)，殘?jiān)芋w積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇溶液50mL繼續(xù)回流提取1.5h，濾過(guò)，合并2次濾液，減壓濃縮至20mL，加水至體積分?jǐn)?shù)為80%，冷處避光放置24h，濾過(guò)，將樣品液濃縮至12.5mL，用甲醇稀釋至25mL，搖勻備用。將上述2種溶液等體積混合即得供試品溶液。進(jìn)樣前用0.45μm濾膜過(guò)濾。

2.3 實(shí)驗(yàn)條件分析

運(yùn)用RP-HPLC檢測(cè)方式，并在試驗(yàn)中使用CenturySIL柱。優(yōu)化條件：在對(duì)指紋圖譜數(shù)據(jù)分析結(jié)果進(jìn)行優(yōu)化的時(shí)候，將指紋圖譜數(shù)據(jù)分析中的指數(shù)F當(dāng)做為數(shù)據(jù)優(yōu)化條件。流動(dòng)相：本實(shí)驗(yàn)中的流動(dòng)相為質(zhì)量分?jǐn)?shù)百分之一醋酸水溶液以及質(zhì)量分?jǐn)?shù)為百分之一的醋酸甲醇水溶液，進(jìn)行試驗(yàn)中的流動(dòng)洗。同時(shí)在實(shí)驗(yàn)中的紫外檢測(cè)波的波長(zhǎng)為290nm，控制實(shí)驗(yàn)反應(yīng)柱的柱溫?cái)?shù)值在30℃左右，檢測(cè)設(shè)備當(dāng)中的進(jìn)樣量速度設(shè)定為5微升。確定雙定性類型相似度標(biāo)準(zhǔn)的時(shí)候，要對(duì)20批的CSMT進(jìn)行系統(tǒng)的分析檢測(cè)，并以其中10批的CSMT數(shù)據(jù)檢測(cè)結(jié)果作為參照標(biāo)準(zhǔn)，生成相應(yīng)的指紋圖譜。之后就以REP為實(shí)驗(yàn)的計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)中共計(jì)20批次的CSMT進(jìn)行雙定性類型雙定量類型的數(shù)據(jù)分析，以色譜圖當(dāng)中指紋圖譜指數(shù)F為分析標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)分析中出現(xiàn)的42個(gè)實(shí)驗(yàn)信息數(shù)據(jù)進(jìn)行實(shí)際分析。

3 結(jié)果分析

3.1 精密度試驗(yàn)

精密吸取S2供試液5μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，以丹酚酸B為參照物峰，計(jì)算各指紋峰相對(duì)保留時(shí)間RSD<1.0%，相對(duì)峰面積RSD<3.0%，表明檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)樣精密度合格。

3.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取S2樣品制備供試液后，分別在0、3、6、12、24、36、48h進(jìn)樣檢測(cè)，記錄色譜圖。以丹酚酸B為參照物峰，計(jì)算樣品在24h內(nèi)各指紋峰相對(duì)保留時(shí)間RSD<1.0%，相對(duì)峰面積RSD<3.0%。36h后個(gè)別小指紋峰相對(duì)峰面積RSD超過(guò)6%，表明樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定。

3.3 重復(fù)性試驗(yàn)

取S2樣品5份，照“2.3”條平行制備6份供試液，在HPLC儀上進(jìn)樣檢測(cè)，記錄色譜圖。以丹酚酸B為參照物峰，計(jì)算各指紋峰相對(duì)保留時(shí)間RSD<1.0%，相對(duì)峰面積RSD<3.0%。表明方法重復(fù)性良好。

3.3 數(shù)據(jù)分析

實(shí)驗(yàn)分析中主要以異酚酸作為主要的參照物，根據(jù)數(shù)據(jù)分析確定了40個(gè)指紋峰峰位，確立了CMTS數(shù)據(jù)分析以及HPLC數(shù)據(jù)分析的指紋圖譜。在采用雙定性類型雙定量類型分析方式對(duì)20批次的實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)進(jìn)行分析檢驗(yàn)的時(shí)候，發(fā)現(xiàn)有8批次的實(shí)驗(yàn)樣品在其化學(xué)組成成分?jǐn)?shù)量方面、化學(xué)成分分布比例方面均為合的，其中有5批次實(shí)驗(yàn)樣品在檢驗(yàn)存在雙定性檢測(cè)數(shù)據(jù)不合格的問(wèn)題，而剩余的7批次實(shí)驗(yàn)分析數(shù)據(jù)顯示其含量偏低。

4 實(shí)驗(yàn)討論

在采用隨機(jī)選擇方式抽查了20批次CMTS后，通過(guò)HPLC類型指紋圖譜鑒定檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，各方面數(shù)據(jù)完全合格的產(chǎn)品共計(jì)有8批次，在雙定性類型檢測(cè)中結(jié)果不合格的共有5批次，在相似度數(shù)據(jù)檢測(cè)中顯示產(chǎn)品不合格的共計(jì)有7批次。因此，該實(shí)驗(yàn)當(dāng)中所建立的CSMT類型HPLC數(shù)據(jù)指紋圖譜檢技術(shù)能被用作于CSMT藥物生產(chǎn)中的質(zhì)量控制環(huán)節(jié)。也表明了使用指紋圖譜類型數(shù)據(jù)分析技術(shù)以及變量類型的參數(shù)控技術(shù)能保證藥物生產(chǎn)當(dāng)中的質(zhì)量控制的效果。

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