文/崔晨光

（河北省石家莊市行唐縣畜牧工作總站）

當(dāng)前，隨著人民生活水平的日益提高，對(duì)乳制品的需求量不斷增加，促進(jìn)了奶牛養(yǎng)殖業(yè)規(guī)模化的快速發(fā)展，生鮮乳及其制品已成為人們生活必不可少的食品之一。在奶牛養(yǎng)殖過程中，對(duì)奶牛疾病的治療離不開抗生素的使用，經(jīng)常被用來治療奶牛的各種感染性疾病，而抗生素在代謝過程中可殘留于生鮮乳中，如果人們飲用含抗生素殘留的生鮮乳及其制品，也就相當(dāng)于低劑量地?cái)z入抗生素，從而破壞人體的正常機(jī)能，也易產(chǎn)生耐藥性等問題，不利于人體健康和今后疾病的治療。因此隨著人們生活質(zhì)量的提高和消費(fèi)者食品安全意識(shí)的增強(qiáng)，在生鮮乳收購過程中，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)生鮮乳中抗生素的檢測(cè)，將抗生素奶拒之門外。

河北省石家莊市行唐縣作為奶牛養(yǎng)殖大縣，基層單位在生鮮乳抗生素殘留快速檢測(cè)過程中最常用的為戴爾沃牛奶廣譜抗生素檢測(cè)試劑盒（Delvotest?），該試劑由荷蘭帝斯曼生產(chǎn)，是國(guó)際乳品聯(lián)合會(huì)推薦的最適合中國(guó)國(guó)情用于生鮮乳的唯一的廣譜檢測(cè)方法，可檢測(cè)到β-內(nèi)酰胺類、磺胺類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類、氯霉素等抗生素，其中對(duì)青霉素和磺胺類抗生素特別靈敏，是全球抗生素殘留仲裁的“金標(biāo)準(zhǔn)”，其特點(diǎn)是靈敏度高、使用方便、結(jié)果可靠、經(jīng)濟(jì)有效、廣譜檢測(cè)。其原理是利用微生物嗜熱芽胞菌在64 ℃條件下培養(yǎng)2.5～3.0 h后會(huì)產(chǎn)酸，引起指示劑BCP（溴甲酚紫）變?yōu)辄S色，若牛生鮮乳中不含抗生素，培養(yǎng)后樣品呈黃色；如有抗生素，嗜熱芽胞菌生長(zhǎng)受到抑制而無法產(chǎn)酸，樣品中指示劑將不變色，為藍(lán)紫色。本試驗(yàn)將戴爾沃牛奶廣譜抗生素檢測(cè)試劑運(yùn)用到生鮮乳抗生素殘留檢測(cè)中，以驗(yàn)證其在青霉素G、磺胺嘧啶兩種抗生素的檢測(cè)效果及靈敏度。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

戴爾沃牛奶廣譜抗生素檢測(cè)試劑“Delvotest?”：由北京優(yōu)尼賽斯科技有限公司提供。對(duì)于青霉素G檢出限為1～2 ppb；對(duì)于磺胺類藥物檢出限為25～100 ppb。

三元純牛奶250 mL/盒，奶罐生鮮乳200 mL。

1.2 試驗(yàn)設(shè)備

K30電熱恒溫孵育器1 臺(tái)，20～200 μL微量移液器1 把。

1.3 試驗(yàn)方法

先用裁紙刀或剪子將鋁箔沿分割線切開，取出所用試劑微孔，但不要破壞剩余試劑的鋁箔，以防培養(yǎng)基變干。用微量移液器將100 μL牛奶樣品注入微孔內(nèi)，每吸取一個(gè)奶樣更換一個(gè)干凈的吸頭，避免污染。用封口膜將微孔密封，放入已預(yù)熱至64 ℃的恒溫孵育器中培養(yǎng)，3 h后取出觀察顏色變化，也可按照對(duì)照組變黃為試驗(yàn)終止時(shí)間，如果底部2/3的固體介質(zhì)是黃色，則為陰性；若底部2/3的固體介質(zhì)是紫色，則為陽性。

2 樣品制備

本試驗(yàn)主要采用青霉素G、磺胺嘧啶兩種抗生素，將其配制成不同梯度溶液，添加到樣品中進(jìn)行檢測(cè)檢測(cè)。

2.1 空白對(duì)照

三元純牛奶做空白對(duì)照，冰箱放置，備用。

2.2 添加抗生素的生鮮乳樣品制備

在奶罐生鮮乳中添加青霉素G的濃度分別為1、2、3、4 ppb。添加磺胺嘧啶的濃度分別為 20、25、50、100、125 ppb。每個(gè)濃度做2個(gè)平行組，進(jìn)行抗生素檢測(cè)，防止結(jié)果出現(xiàn)偏差。

3 檢測(cè)結(jié)果

3.1 試劑盒判定檢測(cè)結(jié)果

用戴爾沃廣譜抗生素檢測(cè)試劑盒判定檢測(cè)結(jié)果對(duì)照?qǐng)D（圖1）。若生鮮乳樣品中含有抗生素為陽性，試劑顯示為藍(lán)紫色，紫色越深說明抗生素含量越高。若生鮮乳樣品中不含抗生素為陰性，試劑顯示為黃色。

圖1 戴爾沃廣譜抗生素檢測(cè)試劑盒判定檢測(cè)結(jié)果對(duì)照?qǐng)D

3.2 試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果

試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果情況見表1。結(jié)果顯示，三元純牛奶作為對(duì)照樣品，檢測(cè)結(jié)果為陰性，奶罐生鮮乳檢測(cè)結(jié)果為陰性，說明隨機(jī)抽取的奶罐生鮮乳是合格的，是陰性樣品，在奶罐生鮮乳添加了不同濃度的青霉素G和磺胺嘧啶后，檢測(cè)的結(jié)果均為陽性。

3.3 青霉素G 檢測(cè)結(jié)果

青霉素G 檢測(cè)結(jié)果如圖2所示。結(jié)果顯示，青霉素G濃度在1 ppb時(shí)，戴爾沃牛奶廣譜抗生素檢測(cè)試劑盒即可檢出。

3.4 磺胺嘧啶檢測(cè)結(jié)果

磺胺嘧啶檢測(cè)結(jié)果如圖3所示。結(jié)果顯示，戴爾沃檢測(cè)試劑盒對(duì)磺胺類藥物十分敏感，在20 ppb時(shí)即可檢出。

圖2 青霉素G 檢測(cè)結(jié)果

圖3 磺胺嘧啶檢測(cè)結(jié)果

4 小結(jié)

用戴爾沃牛奶廣譜抗生素檢測(cè)試劑盒測(cè)定生鮮乳中抗生素的殘留，優(yōu)點(diǎn)為：（1）該方法靈敏度高，結(jié)果可靠，對(duì)于青霉素G檢出限為1 ppb，磺胺類藥物檢出限為20 ppb，完全能夠達(dá)到要求；（2）廣譜抗生素檢測(cè)性強(qiáng)，可檢測(cè)β-內(nèi)酰胺類、磺胺類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類、氯霉素等抗生素；（3）使用方便，只需嚴(yán)格按照規(guī)定的方法進(jìn)行操作，即能獲得理想的效果，同時(shí)不要求檢測(cè)人員具備較高的專業(yè)知識(shí)，無需對(duì)樣品進(jìn)行任何處理；（4）樣品需要量少，只需100 μL即可測(cè)定，無需太復(fù)雜的檢測(cè)設(shè)備；（5）經(jīng)濟(jì)便宜，與市售其它抗生素檢測(cè)試劑條相比（市售進(jìn)口β-內(nèi)酰胺類抗生素快速檢測(cè)試劑每條檢測(cè)一個(gè)樣品約20 元，國(guó)產(chǎn)約為10 元，磺胺類藥物殘留檢測(cè)試劑盒國(guó)產(chǎn)約為8元），檢測(cè)價(jià)格相對(duì)合理，易被廣大養(yǎng)殖者所接受；缺點(diǎn)是相對(duì)于其它抗生素檢測(cè)試劑盒檢測(cè)（檢測(cè)時(shí)間約為8 min），培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，約需3 h。

5 注意事項(xiàng)

5.1 由于戴爾沃牛奶廣譜抗生素檢測(cè)試劑盒對(duì)于抗菌物質(zhì)極其敏感（如抗生素、磺胺類藥物以及其它消毒劑、清洗劑等），因此應(yīng)在檢測(cè)過程中避免與該類物質(zhì)接觸，在開始檢測(cè)前應(yīng)徹底清洗雙手，在干凈的臺(tái)面進(jìn)行檢測(cè)；否則容易出現(xiàn)假陽性，影響檢測(cè)結(jié)果。

5.2 本試劑檢測(cè)時(shí)使用的是恒溫培養(yǎng)設(shè)備，推薦使用干式恒溫孵育器，該機(jī)器恒溫，相對(duì)于其它恒溫設(shè)備，不會(huì)出現(xiàn)過多的溫度波動(dòng)，在無條件的情況下可使用電熱恒溫水浴鍋或電熱恒溫培養(yǎng)箱，但應(yīng)注意在使用電熱恒溫水浴鍋時(shí)，在樣品加好后，使用封口膜將微孔密封，最好裝進(jìn)自封口塑料袋中封好口，放進(jìn)水浴鍋中，防止水淹沒試劑，造成無效檢測(cè)；電熱恒溫培養(yǎng)箱因?yàn)殚_關(guān)箱門易造成溫度大幅變動(dòng)，因此可適當(dāng)增加培養(yǎng)時(shí)間，不局限于3 h，可按照陰性樣品變成黃色的時(shí)間為終止試驗(yàn)的時(shí)間。

5.3 在試驗(yàn)過程中一定要加陰性和陽性樣品作為對(duì)照，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。C