馮芷媚 袁秦 黃敏菊 李繼彥 國家食品藥品監(jiān)督管理總局廣州醫(yī)療器械質量監(jiān)督檢驗中心 （廣東 廣州 510663）

膠原蛋白是一種白色、不透明、無支鏈的纖維蛋白質。已經有研究證實，膠原蛋白作為細胞外間質的主要成分，在皮膚損傷后的修復過程中發(fā)揮著重要的作用。膠原蛋白具有引導上皮細胞遷入缺損區(qū)的能力，還可誘導產生趨化因子，如血小板生長因子和纖維連接蛋白等，從而對細胞的生長有趨化作用，提示膠原蛋白可能與皮膚損傷的修復密切相關[1]。膠原蛋白廣泛應用于醫(yī)藥衛(wèi)生領域，代表性的醫(yī)療器械產品包括：膠原貼敷料、膠原蛋白海綿、膠原凝膠、膠原縫合線、膠原骨修復材料等。

1.凱氏定氮法測定

膠原貼敷料屬于Ⅱ類醫(yī)療器械產品，是國家食品藥品監(jiān)督管理部門最早批準的，對于痤瘡、皮炎及美容后修復護理有良好作用，能有效地改善皮膚微循環(huán)，有利于清潔皮膚角質層、污垢和粉刺黑頭等，并對燒燙傷有良好的修復治療作用。

膠原凝膠主要由膠原、醫(yī)用級防腐劑、醫(yī)用級增稠劑等輔料組成。膠原凝膠具有獨特的生物相容性和表面活性，加速傷口愈合速度，預防和減少疤痕，提高愈合及修復質量。對干燥、難愈性慢性創(chuàng)面、燒燙傷創(chuàng)面等具有良好的營養(yǎng)修復作用。

膠原蛋白海綿主要以活性醫(yī)用膠原為組分，在無菌環(huán)境中凍干制成的海綿狀產品，屬于Ⅲ類醫(yī)療器械產品，適用于手術殘腔充填，創(chuàng)面止血，促進創(chuàng)面愈合。能夠起到暫時保護傷口、防止污染、促進愈合的醫(yī)用材料。有一定的機械強度，柔軟，不產生變形；透氣，透水汽，保濕，生物相容性好[2]。

凱氏定氮法是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法，是測定試樣中總有機氮最準確和最簡單的方法之一。由于蛋白質含氮量比較恒定，可由其氮量計算蛋白質含量，故此法是經典的蛋白質定量方法。

故本文以該法為基礎，對不同的膠原類產品中蛋白質的含量進行檢測。根據(jù)常規(guī)的檢測方法，在檢測過程中發(fā)現(xiàn)，不同產品中由于輔料的不同，非蛋白質氮含量也有差異。經鎢酸沉淀后可制備無蛋白質的濾液，測定供試品的總氮含量以及無蛋白質濾液中氮含量，可得出產品中的蛋白質含量。

2.結果

實驗樣品清單見表1。

取一定量的樣品，按上文條件進行測定。其結果見表2。海綿、原料測定結果見表3。

3.討論

根據(jù)以上實驗過程及結果，可以初步得出以下推論：膠原貼敷料是由無紡布、膠原原液、水組成，在檢測中，采用分別來自兩家生產商的樣品A-1、A-2，其檢測標準值分別為1.0%、2.0%，總氮含量分別為79.8%、80.2%，而在經鎢酸沉淀后制備的無蛋白質濾液中，氮含量分別為78.6%、77.6%，經計算，樣品A-1與樣品A-2的蛋白質含量分別為1.2%、2.4%，接近檢測標準值。膠原凝膠主要由膠原、醫(yī)用級防腐劑、醫(yī)用級增稠劑等輔料組成，在檢測中，采用分別來自兩家生產商的樣品B-1、B-2，其檢測標準值均為1.0%，總氮含量分別為9.9%、10.0%，而在經鎢酸沉淀后制備的無蛋白質濾液中，氮含量分別為8.9%、8.8%，經計算，樣品B-1與樣品B-2的蛋白質含量分別為1.0%、1.2%，接近檢測標準值。

膠原蛋白海綿是以活性醫(yī)用膠原為組分，在無菌環(huán)境中凍干制成的，不含其他基材及輔料。在檢測中，采用分別來自兩家生產商的樣品C-1、C-2，其檢測標準值分別為90%、95%，經計算，樣品C-1與樣品C-2的蛋白質含量分別為90.2%、96.0%。同時，也對兩個廠家的膠原原液D-1、D-2進行檢測，其檢測標準值分別為95%、90%，蛋白質含量分別為96.1%、92.0%。樣品C-1與樣品C-2的蛋白質含量接近于膠原原液的蛋白質含量。

表1.實驗樣品清單(%)

表2.敷貼、凝膠測定結果(%)

表3.海綿、原料測定結果(%)

在膠原貼產品中，由于添加不同成分的基材和輔料，基材和輔料中的氮含量具有不確定性，因此給膠原貼敷料的蛋白質檢測帶來了困難，如果要采用凱氏定氮法對膠原類產品進行檢測，首先得排出非蛋白氮的干擾。

[1]周雪松.膠原蛋白肽產業(yè)現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2013,39 (6):111-115.

[2]潘志娟.膠原蛋白在醫(yī)用創(chuàng)傷敷料中的應用[J].皮革科學與工程,2002,12(1):46-49.