◎ 孫 翌，李京雨，劉冀捷，王虹懿，彭 景

（揚州大學(xué)，江蘇 揚州 225127）

豆腐柴（Premna microphylla Turcz）又名腐婢、觀音草、臭黃荊、土黃芪（浙江）、滿山香、止血草等，為馬鞭草科豆腐柴屬多年生落葉灌木，多生于山坡或林下等地，主要分布于熱帶及亞熱帶區(qū)域，如亞洲、澳大利亞、非洲等地，是一種重要的藥食兩用植物[1]。在我國，豆腐柴廣泛分布于華東、華中、華南、四川、貴州等省區(qū)，是一種較為多見的藥食兩用植物[2]?！吨兴庌o?！酚涊d，豆腐柴性寒、味苦澀、主治瘧疾、瀉痢、癰、腫痛?！侗静菡x》記載，豆腐柴味苦氣寒，專主溫?zé)嵝安?，實熱蘊結(jié)及癰瘡腫毒諸癥，可服食，可外敷[3]。民間常用來治療創(chuàng)傷出血、清熱解毒、跌打損傷、燒傷、毒蛇咬傷及痢疾等癥[4]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，豆腐柴具有增加體重但不增加脂肪含量、抗疲勞、抗炎、抗菌、抗氧化等作用。豆腐柴葉子中含有大量的果膠成分，可用來制作綠色果凍類食品，具有很高的食用價值。果蠅模型是經(jīng)典的抗衰老模型之一，本實驗以果蠅為實驗對象，觀察豆腐柴提取物對果蠅壽命的影響，以期為豆腐柴的開發(fā)利用提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 豆腐柴提取物的制備

取市售豆腐柴粉末120 g，加入蒸餾水于30 ℃水浴鍋中浸泡24 h后進行過濾得到濾液，后經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到提取物，于50 ℃干燥箱中干燥，制成粉末。

1.1.2 實驗動物

美國野生型Oregon K黑腹果蠅，由南京醫(yī)科大學(xué)提供。

1.2 方法

1.2.1 果蠅培養(yǎng)基

共制備4組果蠅培養(yǎng)基。普通培養(yǎng)基參考王彥平等人[5]的方法制備：玉米粉25 g，白糖25 g，瓊脂粉1.875 g，酵母粉0.7 g，水250 mL。實驗組培養(yǎng)基共設(shè)立低、中、高3種不同劑量，其豆腐柴提取物的濃度分別為1.2、2.4、3.6 mg/mL。

1.2.2 果蠅的處理及培養(yǎng)

取8 h內(nèi)羽化未交配的果蠅成蟲，乙醚麻醉后雌雄分管培養(yǎng)，對照組用普通培養(yǎng)基，實驗組設(shè)為低、中、高3組含不同豆腐柴提取物劑量的培養(yǎng)基，每組雌雄果蠅各60只，每根培養(yǎng)管中裝入20只果蠅，即每組有3管雌果蠅和3管雄果蠅共120只，在溫度（25±1）℃，相對濕度為50%～60%的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每4 d更換1次培養(yǎng)基。

1.2.3 壽命統(tǒng)計

每天統(tǒng)計果蠅的生存數(shù)和死亡數(shù)（對于飛走和非正常死亡的果蠅不計入統(tǒng)計），全部果蠅壽命的算術(shù)平均數(shù)為果蠅的平均壽命，前半數(shù)果蠅壽命的算術(shù)平均數(shù)為果蠅的半數(shù)死亡期，每組最后死亡的10只果蠅的算術(shù)平均數(shù)為果蠅的最高壽命。

1.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

利用Excel和SPSS 16.0統(tǒng)計軟件方差分析對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，數(shù)據(jù)以平均值±標準差（x-±s）表示。

2 結(jié)果

2.1 豆腐柴提取物對果蠅平均壽命的影響

由表1可知，低劑量組和中劑量組均能延長雌性果蠅的平均壽命，其中低劑量組延長幅度比中劑量組大，低劑量組與對照組相比具有極顯著差異（P＜0.01），中劑量組與對照組相比具有顯著差異（P＜0.05），高劑量組則減少雌性果蠅的平均壽命，與正常組相比具有極顯著差異（P＜0.01）。低、中、高劑量組均可以增加雄性果蠅的平均壽命，延長幅度低劑量組最好，高劑量組最差，與對照組相比低劑量組具有極顯著差異（P＜0.01），中劑量組具有顯著差異（P＜0.05）。

表1 豆腐柴水提取物對果蠅平均壽命的影響表s）

表1 豆腐柴水提取物對果蠅平均壽命的影響表s）

注：*表示與正常組相比存在顯著差異，P＜0.05；**表示與正常組相比存在極顯著差異，P＜0.01。

對照組 雌性 53 41.77±3.10雄性 54 36.48±3.05低劑量組 雌性 59 48.08±5.42** 15.11雄性 57 43.96±5.33** 20.86中劑量組 雌性 50 43.74±4.60* 4.71雄性 57 38.05±3.80* 4.61高劑量組 雌性 58 39.09±3.37** -6.43雄性 54 37.74±3.18 3.75

2.2 豆腐柴提取物對果蠅半數(shù)死亡期的影響

由表2可知，低、中劑量組可以延長雌性果蠅的半數(shù)死亡期，低劑量組的延長幅度最大，低劑量組與正常組相比具有極顯著差異（P＜0.01），高劑量組則可以降低雌性果蠅的半數(shù)死亡期，且與正常組相比具有極顯著差異（P＜0.01）。低、中、高劑量組均能延長雄性果蠅的半數(shù)死亡期，其中低劑量組的延長幅度最大，中、高劑量組延長幅度相近，低劑量組與正常組相比具有極顯著差異（P＜0.01）。

表2 豆腐柴水提取物對果蠅半數(shù)死亡期的影響表（s）

表2 豆腐柴水提取物對果蠅半數(shù)死亡期的影響表（s）

注：**表示與正常組相比存在極顯著差異，P＜0.01。

組別 性別 果蠅數(shù) 半數(shù)死亡期/d 延長幅度/%對照組 雌性 27 39.74±3.03雄性 27 34.22±2.26低劑量組 雌性 30 44.33±4.18** 11.56雄性 29 39.52±2.53** 15.47中劑量組 雌性 25 40.08±3.28 0.85雄性 29 35.17±2.48 2.78高劑量組 雌性 29 36.24±1.79** -8.81雄性 27 35.15±2.03 2.71

2.3 豆腐柴提取物對果蠅最高壽命的影響

由表3可知，低、中劑量組可以延長雌性果蠅的最高壽命，其中低劑量組的延長幅度最大，低、中劑量組與對照組相比均具有極顯著差異（P＜0.01），高劑量組對延長雌性果蠅的最高壽命有副作用，與對照組相比不具有顯著差異（P＞0.05）。低、中、高劑量組均可以增加雄性果蠅的最高壽命，低劑量組延長幅度最大，中劑量組次之，高劑量組延長幅度最小，低、中劑量組與對照組相比均具有極顯著差異（P＜0.01），高劑量組與對照組相比具有顯著差異（P＜0.05）。

表3 豆腐柴水提取物對果蠅最高壽命的影響表（s）

表3 豆腐柴水提取物對果蠅最高壽命的影響表（s）

注：*表示與正常組相比存在顯著差異，P＜0.05；**表示與正常組相比存在極顯著差異，P＜0.01。

對照組 雌性 53 45.00±0.67雄性 54 40.60±0.97低劑量組 雌性 59 56.00±2.45** 24.44雄性 57 51.90±1.66** 27.83中劑量組 雌性 50 49.40±1.26** 9.78雄性 57 43.50±1.78** 7.14高劑量組 雌性 58 43.90±1.20 -2.44雄性 54 42.00±0.82* 3.45

3 討論

果蠅是一種真核多細胞生物，具有生命周期短、可在短時間內(nèi)大量繁殖、飼養(yǎng)簡單、反應(yīng)靈敏等優(yōu)點，其代謝系統(tǒng)、生理功能、生長發(fā)育等同哺乳動物基本相似，所以在衰老與抗衰老研究中，果蠅以其自身的諸多優(yōu)勢成為研究抗衰老的實驗材料。衰老是一個十分復(fù)雜的現(xiàn)象，研究表明衰老與機體的氧化損傷有關(guān)，是由于機體代謝產(chǎn)生的活性氧成分造成的損傷累積引起的[6]。前期有報道指出豆腐柴根的三氯甲烷-甲醇（2∶1）提取物可增強機體非特異性免疫功能[7]。此外，從豆腐柴葉中分離得到的一種三萜皂苷具有顯著的抗菌作用及細胞毒性[8]。XU等[9]研究發(fā)現(xiàn)豆腐柴根和葉中抗壞血酸及β-胡蘿卜素含量豐富，此二者均具有明顯的抗氧化作用[10]。謝娟平[11]研究了犁頭草、商陸、車前草、豆腐柴及箭葉淫羊藿5種天然植物的抗氧化能力，實驗證明這5種天然植物均具有較強的抗氧化能力，但其中抗氧化作用最強的是豆腐柴。

在本實驗的研究中，添加不同劑量的豆腐柴提取物的低、中、高3組實驗組與對照組相比，低劑量組對果蠅的平均壽命、半數(shù)死亡期和最高壽命的延長幅度最佳。產(chǎn)生這一現(xiàn)象的可能原因是豆腐柴提取物具有的味道果蠅并不喜歡，所以濃度增大對于果蠅的攝入量會有影響。同時觀察得到不同劑量組對果蠅壽命的影響存在性別上的差異，高劑量組對雌性果蠅的壽命延長具有不利的影響，而對雄性果蠅的壽命延長能產(chǎn)生有利影響，造成這種差異的原因有待于進一步研究。本實驗初步得到適當濃度的豆腐柴提取物可以延長果蠅壽命，具備一定的抗衰老作用，但仍需要進一步研究從而闡明其內(nèi)在的影響機制，為豆腐柴今后的充分開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

[1]Ayinampudi S，Domala R，Merugu R，et al.New icetexane diterpenes with intestinal α-glucosidase inhibitory and free-radical scavenging activity isolated from Premna.tomentosa roots[J].Fitoterapia，2012，83（1）：88-92.

[2]中國科學(xué)院植物所.中國高等植物圖鑒[M].北京：科學(xué)出版社，1983.

[3]高燕妮，路 鋒，高 昂，等.豆腐柴藥學(xué)研究概況[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（32）：19811-1982.

[4]HU Z，XUE Y，YAO G，et al. Chemical constituents from the leaves of Premna microphylla turcz[J].J Chin Pharmaceutical Sci，2013，22（5）：431-434.

[5]王彥平，曹 婭，謝克英，等.紫山藥多糖抗氧化及延長果蠅壽命的作用[J].營養(yǎng)學(xué)報，2017（4）：386-389.

[6]Harman D. The aging process[J].Proc Natl Acad Sci USA，1981（78）：7124-7128.

[7]高貴珍，曹穩(wěn)根，劉曉陽，等.豆腐柴根提取物對小鼠非特異性免疫功能的影響[J].生物學(xué)雜志，2003，20（1）：25-26.

[8]ZHAN Z，TANG L，SHAN W. A new triterpene glycoside from Premna microphylla[J].Chem Nat Comp，2009，45（2）：197-199.

[9]XU F，LI L，HUANG X，et al. Antioxidant and antibacterial properties of the leaves and stems of Premna microphylla[J].J Med Plants Res，2010，4（23）：2544-2550.

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[11]謝娟平，姜雄波.5種天然植物及其不同部位提取物抗氧化能力比較研究[J].食品科學(xué)，2010，31（21）：173-175.