伍 濤陳 勇

（1重慶市畜牧科學(xué)院，重慶 402460；2重慶市榮昌區(qū)雙河街道獸醫(yī)站，重慶 402460）

金霉素（Chlortetracycline）屬四環(huán)素類藥物，飼料級金霉素產(chǎn)品主要成分為金霉素鈣鹽，是目前我國飼料中添加量最大的抗生素之一[1]。課題組在前期研究中，為金霉素引入了一些具有生物學(xué)活性的金屬元素進行配位，制備了鋅、鎂、銅和鈷4個金霉素金屬鹽，并對其結(jié)構(gòu)表征、穩(wěn)定性、生物活性、藥物安全性等進行深入研究，獲得了一些研究成果[2]。在本試驗中，比較了制備的4種金霉素金屬鹽與現(xiàn)有飼料級金霉素鈣鹽產(chǎn)品在豬體內(nèi)的生物利用度，并通過對育肥豬生長性能的研究，篩選出現(xiàn)有飼料級金霉素的最佳換代產(chǎn)品。

1 生物利用度試驗

通過考察鋅、鎂、銅和鈷4種金霉素配合物在健康豬體內(nèi)的釋藥特征，并與金霉素鈣鹽比較，分析得出制備的4種金霉素金屬鹽的相對生物利用度。

1.1 試驗方法

1.1.1 試驗動物及分組

選取胎次、日齡、長勢一致的健康架子豬（體重25～30 kg/頭）30頭，隨機分為鋅鹽、鎂鹽、銅鹽和鈷鹽4個試驗組、金霉素鈣鹽對照組和空白對照組，共6組，每組各5頭。采用ELISA測定血清中的金霉素濃度。

1.1.2 試驗藥物

金霉素鈣鹽購于河南省駐馬店市某公司，4種金屬鹽為實驗室合成。金霉素ELISA試劑盒購于上海某公司。

1.1.3 預(yù)飼期

預(yù)飼期7天，采用不含任何抗生素的粉料，每天定點飼喂。

1.1.4 藥物添加量

考慮到我國在飼料中允許的金霉素添加量僅為75 mg/kg，同時金霉素ELISA試劑盒的檢測下限為0.05μg/kg，再結(jié)合Nielsen等[3]的研究，本試驗采用一次性給藥方式，加藥量為每頭試驗豬10 mg/kg·bw（以金霉素含量計）。

1.2 血樣采集與處理

試驗期間所有試驗豬禁食，自由飲水。采血時間點分別為投藥后的第0小時、0.5小時、1小時、1.5小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、8小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、21小時、24小時，共17次。采血方法為豬前腔靜脈取血，每次采血4～5 mL，分離血清后低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 結(jié)果及分析

嚴格按照金霉素ELISA試劑盒說明書進行含量檢測，并根據(jù)各組試驗豬血清中金霉素含量，繪制血藥濃度—時間曲線（圖1）。同時，采用DAS 2.0藥代動力學(xué)分析軟件計算各組給藥后的藥代動力學(xué)參數(shù)（表1）。

圖1 配合物的藥時曲線圖

各組擬合方程分別為C＝1.92e-0.11t－2.40e－0.38t（鈣鹽對照組），C＝2.18e-0.093t－3.16e－0.82t（鋅鹽），C＝2.24e-0.10t－2.92e－0.59t（鎂鹽），C＝2.25e-0.12t－2.53e－0.33t（鈷鹽），C＝1.42e-0.092t－1.81e－0.35t（銅鹽）。用1室、2室模型分別模擬藥物在體內(nèi)的過程，結(jié)果顯示，4種配合物與對照組均符合一級吸收一室模型，即金霉素配合物吸收較為迅速，血藥濃度在較短時間達到最大值，該結(jié)論與Nelson的研究結(jié)果相似[4]。用Turkey HSD檢驗法對各組藥物代謝動力學(xué)參數(shù)進行比較分析得到以下結(jié)果。

1.3.1 半衰期（T1/2）

藥物在代謝階段，4種配合物和對照組的半衰期基本一致，無顯著差異（＞0.05），基本半衰期保持在6～8小時之間。這可能是由于配合物在胃腸道中分解成為金屬離子的游離形式（或相似分子形式），再吸收入血引起的[5]，因此各組藥物在動物體內(nèi)的半衰期基本保持一致。

1.3.2 表觀分布容積（V1）

在假設(shè)生物利用度均為F＝100%的情況下，只有銅鹽組表觀分布容積與其他組存在顯著差異（＜0.05），說明銅離子配位金霉素會導(dǎo)致其在血清中濃度減小。這可能是由于配合物進入血液中被分解，配位的銅離子與血清白蛋白結(jié)合能力較強，競爭抑制了金霉素分子與白蛋白的結(jié)合，使金霉素分子在組織中的分布較廣、作用較強[6]。另外3個試驗組的配合物主要存在于血漿中，組織分布相對較少，作用時間相對較長，這可能是由于動物口服這3種配合物后，藥物與血清白蛋白的結(jié)合能力較強，血漿駐留時間較長引起的。

1.3.3 血漿清除率（CL）

與其他組相比，鋅鹽組血漿清除率較低，這說明鋅配合物不易被機體清除，這可能是由于鋅配合物進入機體與蛋白分子有一定的結(jié)合，且其中的鋅離子可以增加血漿中蛋白的含量，從而進一步提高了藥物與分子結(jié)合程度，最終抑制了金霉素在動物體內(nèi)的代謝排出過程[7]。

1.3.4 吸收速率常數(shù)（Ka）

分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，只有鋅鹽組吸收速率常數(shù)值與對照組及3個試驗組存在極顯著差異（＜0.01），而另外3個試驗組吸收速率差異不顯著（＞0.05）。這說明，鋅鹽相對于其他4個配合物，動物口服后藥物達峰時間更短，吸收更迅速。

1.3.5 最大血藥濃度 （Cma）x

在口服相同劑量藥物的情況下，鋅配合物最大血藥濃度明顯高于對照組和其他3個試驗組，經(jīng)顯著性分析證實，只有鋅鹽組與對照組最大血藥濃度存在顯著差異（＜0.05）。這說明鋅配合物可以顯著提高金霉素在動物體內(nèi)的有效濃度。

表1 金霉素配合物的藥代動力學(xué)參數(shù)對比表

1.3.6 相對生物利用度（F0-）t

經(jīng)過顯著性分析，除銅鹽組外，其他3個試驗組的相對生物利用度與對照組結(jié)果相比都有所提高，其中只有鋅鹽組AUC0-t顯著大于對照組（＜0.05），相對生物利用度達138%。進一步證實了鋅離子的配位會對金霉素在動物體內(nèi)的吸收過程有一定的促進作用，提高了金霉素的生物利用度。

2 生長性能試驗

通過對比研究在育肥豬日糧中添加金霉素鋅鹽、鎂鹽和鈣鹽后的促生長效果，確定最佳的飼料級金霉素優(yōu)化產(chǎn)品。

2.1 試驗方法

2.1.1 試驗動物

選取重慶市榮昌區(qū)七里梗豬場胎次、體重相近的70日齡的三元雜交保育豬90頭，隨機分成3個處理組，每個處理組各30頭，各處理間、組間、組內(nèi)各重復(fù)初始重?zé)o顯著差異，公母各半。試驗從70日齡開始至出欄結(jié)束。

2.1.2 試驗藥物

金霉素鈣鹽購于河南駐馬店市某公司，金霉素鋅鹽和鎂鹽為實驗室合成。

表2 金霉素配合物對育肥豬生長性能的影響

2.1.3 日糧組成

試驗全部日糧在重慶某飼料公司定制加工，不含任何抗生素。試驗期間，3個試驗組的金霉素添加量均為75 mg/kg（以金霉素含量計算）。每噸試驗日糧中玉米、麥麩、豆粕、魚粉、預(yù)混料含量分別為660 kg、110 kg、150 kg、40 kg和40 kg。

2.1.4 飼養(yǎng)管理

試驗期間，豬群飼養(yǎng)管理免疫等程序均按照養(yǎng)殖場正常管理進行，每天觀察豬只的精神狀況，分別記錄其發(fā)病和用藥情況。

2.1.5 測定指標

在試驗開始時和試驗結(jié)束時對試驗豬進行空腹稱重。計算試驗全程的平均日增重、平均日采食量和料肉比。計算公式如下：

平均日增重（ADG，g/天）＝每個重復(fù)試驗期的總增重（g）÷試驗期天數(shù)（天）÷重復(fù)頭數(shù)；平均日采食量（ADFI，g/天）＝每個重復(fù)試驗期的總投料量（g）÷試驗期天數(shù)（天）÷重復(fù)頭數(shù)；料肉比（FCR）＝ADFI÷ADG

2.2 試驗結(jié)果

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件對所得數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，得到3個試驗組的試驗天數(shù)、初始平均體重、末期平均體重、ADG、ADFI和FCR等數(shù)據(jù)。

由表2可知，3個組的ADG從高到低排列為鋅＞鎂＞鈣，其中鋅鹽組較鈣鹽組提高6.3%，差異極顯著（＜0.01），而鎂鹽組較鈣鹽組提高4.7%，差異顯著（＜0.05）；ADFI從高到低排列為鎂＞鈣＞鋅，但差異均不顯著（＞0.05）；FCR從高到低排列為鈣＞鎂＞鋅，鈣鹽組與鎂鹽組相比差異不顯著（＞0.05），但與鈣鹽組相比，差異顯著（＜0.05）。此外，3個組在試驗期間并無明顯消化道病或呼吸道病癥狀出現(xiàn)，未出現(xiàn)死亡病例，也沒有進行大規(guī)模的治療。

3 小結(jié)

通過前期研究[2]和中試放大驗證，金霉素鋅鹽雖然收率略低，但在雜質(zhì)含量、體外抑菌活性和GHS急性毒性分類等方面與其他3種金霉素金屬螯合物未見顯著差異，然而金霉素鋅鹽的生物利用度是幾種金屬鹽中最高的，在臨床試驗中也表現(xiàn)出了顯著的促生長性能，并取得了良好的經(jīng)濟效益。因此，課題組將金霉素鋅鹽作為飼料級金霉素鈣鹽的最佳換代產(chǎn)品開展下一步研究。以期減少傳統(tǒng)飼料級金霉素的耐藥性，促進和拓展新型飼料級金霉素的生產(chǎn)與銷售。

[1]張憬,唐煜,梁斌.飼料中金霉素使用現(xiàn)狀分析[J].飼料研究,2016(8):45-47.

[2]伍濤,楊旭,郭紅偉,等.飼料級金霉素新品的制備[J].中國豬業(yè),2016(10):68-71.

[3]Nielsen P,Gyrd HN.Bioavailability of oxytetracycline,tetracycline and chlortetracycline after oral administration to fed and fasted pigs[J].Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics,1996,19(4):305-311.

[4]Nelson ML.Chemical and biological dynamics of tetracyclines[J].Advances in Dental Research,1998,12(2):5-11.

[5]Wrzesinski J,Brzezowska M,Szczepanik W,et al.Inhibition of the catalytic activity of transacting antigenomic δ ribozyme by selected antibiotics and their Cu2+complexes[J].Biochemical and Biophysical Research Communications,2006,349(4):1394-1400.

[6]郭明,黃鳳琴,李銘慧,等.金屬元素組與血清白蛋白的競爭結(jié)合反應(yīng)性能研究[J].無機化學(xué)學(xué)報,2014,30(7):1549-1558.

[7]呂廣宙,陸治年,丁曉明.低鋅日糧補鋅對斷奶前后犢牛免疫機能的影響[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報,1995,26(3):207-213.