□ 聶榮榮 沈 潔 何嘯峰 丘增萍 梅州市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所

有機(jī)磷農(nóng)藥，是指含磷元素的有機(jī)化合物農(nóng)藥，主要用于防治植物病、蟲(chóng)、草害，是一類最常用的農(nóng)用殺蟲(chóng)劑，多數(shù)屬高毒或中等毒類，少數(shù)為低毒類。氨基甲酸酯類農(nóng)藥，是在有機(jī)磷酸酯之后發(fā)展起來(lái)的合成農(nóng)藥，氨基甲酸酯類農(nóng)藥一般無(wú)特殊氣味，在酸性環(huán)境下穩(wěn)定，遇堿分解。大多數(shù)品種毒性較有機(jī)磷酸酯類低。農(nóng)藥被大量用于控制農(nóng)業(yè)、工業(yè)和人類生活場(chǎng)所的害蟲(chóng)。在農(nóng)藥的幫助下，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)顯著增加，但農(nóng)藥的無(wú)節(jié)制和過(guò)度使用正在污染環(huán)境、食品、水和農(nóng)產(chǎn)品[1]。

目前，食品中農(nóng)藥及其化學(xué)品殘留檢測(cè)方法主要有《水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB/T 20769-2008）[2]， 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 水果和蔬菜中500種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定 氣相色譜-質(zhì)譜法》（GB 23200.8-2016 ）[3]，《中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》（NY/T 761-2008 ）[4]等檢測(cè)方法。食品種類多，農(nóng)藥種類各異，檢測(cè)方法又各不相同，給日常食品檢驗(yàn)檢測(cè)帶來(lái)諸多不便。

本項(xiàng)目致力于使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定蔬菜、水果和茶葉等各種食品中的農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留，旨在解決目前不同食品不同農(nóng)殘檢驗(yàn)檢測(cè)方法各異，實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢測(cè)過(guò)程中同一樣品不同農(nóng)殘需不同方法處理的問(wèn)題。提高實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢測(cè)效率。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

北京油菜、茄子、蘋(píng)果、綠茶、紅茶，購(gòu)于梅州市樂(lè)萬(wàn)家超市；46種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，來(lái)自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所。

乙腈、甲苯（Anaqua chemical supply，色譜純）；丙酮（Honeywell，色譜純）；氯化鈉（廣州化學(xué)試劑廠，優(yōu)級(jí)純）；無(wú)水硫酸鈉（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，優(yōu)級(jí)純）；TPT固相萃取柱。

島津氣相色譜儀（2010PLUS）；島津QP-2010質(zhì)譜儀；氣相色譜柱DB-1701 （美國(guó)安捷倫公司生產(chǎn)）；固相萃取儀、氮吹儀（北京萊伯泰科股份有限公司）；漩渦儀（上海瀘西分析儀器有限公司）；搖床（金壇市宏華儀器廠）；離心機(jī)（湘鷹TD5AWS臺(tái)式低速離心機(jī)）。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確吸取各標(biāo)準(zhǔn)品，用丙酮稀釋為10 μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于-18℃保存。為去除基質(zhì)影響，選用空白北京油菜樣品代替純?nèi)軇┳鳛橄♂屢簩?biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋成濃度分別為 0.2、0.4、0.6、0.8、1 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3 樣品的提取和凈化

1.3.1 樣品提取

稱取20.0 g（精確至0.001 g）樣品置于100 mL離心管中，加入40 mL乙腈后于振蕩器上振蕩提取30 min，過(guò)濾至加有6.0～8.0 g NaCl的離心管中，旋渦1 min，4 000轉(zhuǎn)離心5 min，取上清液于10 mL至氮吹管中，氮吹濃縮至近干，加入1 mL丙酮溶解待凈化。

1.3.2 凈化

用5 mL乙腈：甲苯（3∶1）活化TPT固相萃取柱，棄去淋洗液，將樣品溶液轉(zhuǎn)移至固相萃取柱中，用10 mL乙腈：甲苯（3∶1）分3次洗脫固相萃取柱，合并洗滌液于氮吹管中，氮吹至近干，加丙酮定容至1.0 mL，過(guò)0.22 μm 濾膜，上機(jī)。

1.4 儀器條件

載氣：高純氦氣（99.999%）。進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣。色譜柱：DB-1701石英毛細(xì)管柱。接口溫度：220℃。進(jìn)樣口溫度：220 ℃。柱溫箱：程序升溫，初始120 ℃，再以每分鐘10 ℃升至220 ℃，再以每分鐘5 ℃升至250 ℃，保持8 min，再以每分鐘20 ℃升至280 ℃，保持5 min。進(jìn)樣量 1.0 μL。電子轟擊電離源（EI），離子源溫度25 ℃；溶劑延遲2 min。

1.5 回收率、檢測(cè)限和定量限的確定

為去除基質(zhì)影響，選用空白北京油菜樣品代替純?nèi)軇┳鳛橄♂屢海渲?.4 μg/m L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定其回收率，重復(fù)3次并計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。以不含目標(biāo)物的空白北京油菜樣品作為基質(zhì)，配制不同濃度梯度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，以3倍的最低濃度比信噪比確定該方法的檢出限，以10倍的最低濃度比信噪比作為定量限。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

提取條件優(yōu)化：本研究比較了振蕩和均質(zhì)2種提取方式，分別為振蕩提取30 min、均質(zhì)提取1 min。結(jié)果表明，振蕩提取與均質(zhì)提取平均回收率均在80%～120 %，差異不顯著（P＞0.05）。均質(zhì)提取操作危險(xiǎn)，耗時(shí)耗力。振蕩提取操作簡(jiǎn)便，適合大批量樣品，由此本研究選擇振蕩30 min作為提取方式[5]。

固相萃取柱的選擇：本研究首先對(duì) Florisil、TPT和 Sep-Pak Vac 3種固相萃取柱分離萃取的效果進(jìn)行了對(duì)比。結(jié)果表明：TPT固相萃取柱去除雜質(zhì)和色素的效果明顯優(yōu)于Florisil和Sep-Pak Vac固相萃取柱，平均回收率均在80%～120%之間，差異顯著（P＜0.05）。因此選用TPT固相萃取柱進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

洗滌液的選擇：本研究對(duì)乙腈∶甲苯（3∶1）、乙酸乙酯∶環(huán)己烷（2∶8）、乙酸乙酯：正己烷（1∶1）這3種洗滌劑進(jìn)行了對(duì)比，分別計(jì)算相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品回收率。結(jié)果表明，采用乙腈∶甲苯（3∶1）回收率高，差異顯著（p＜0.05），色素雜質(zhì)去除效果好，因此選用乙腈∶甲苯（3∶1）作為T(mén)PT柱的洗滌劑。

在選定的優(yōu)化條件下，首先通過(guò)全掃描監(jiān)測(cè)方式，對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行定性分析，并選擇特征監(jiān)測(cè)離子，之后使用SIM模式，對(duì)其進(jìn)行定量分析。農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流色譜如圖1所示。

2.2 方法的線性關(guān)系及檢出限

以濃度分別為橫坐標(biāo)，以各自峰面積為縱坐標(biāo)計(jì)算回歸方程，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。在空白北京油樣品中，添加不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，以3倍的最低濃度比信噪比確定該方法的檢出限，以10倍的最低濃度比信噪比確定該方法的定量限，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3 回收率和精密度

圖1 農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流色譜圖

表1 46種農(nóng)藥的保留時(shí)間、定性定量離子、檢出限與定量限

上接表1

在空白樣品基質(zhì)中加入0.4 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，在優(yōu)化的處理?xiàng)l件下對(duì)46種農(nóng)藥殘留進(jìn)行測(cè)定計(jì)算，添加回收率在80%～120%。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜10%，符合農(nóng)藥殘留檢測(cè)的要求。

2.4 樣品的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)選取北京油菜、茄子、蘋(píng)果、綠茶、紅茶，分別按上述方法對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)分析，通過(guò)農(nóng)殘?zhí)卣麟x子峰掃描得到結(jié)果，得出本試驗(yàn)所購(gòu)北京油菜、茄子、蘋(píng)果樣品不含46種有機(jī)磷、有機(jī)氯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥。綠茶、紅茶檢出聯(lián)苯菊酯殘留。根據(jù)GB 2763規(guī)定的茶葉中聯(lián)苯菊酯的最大殘留限量為5 mg/kg[6]。樣品的測(cè)定結(jié)果顯示，綠茶、紅茶中檢測(cè)出聯(lián)苯菊酯分別為0.85 mg/kg和1.21 mg/kg，含量均小于限量5 mg/kg，因此本次所選取的樣品均合格。由試驗(yàn)結(jié)果可得：該方法穩(wěn)定可靠，能滿足同時(shí)測(cè)定食品中有機(jī)磷、有機(jī)氯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留定量分析方法的技術(shù)要求。

3 結(jié)論

本文運(yùn)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，建立了不同種類食品中46種有機(jī)磷、有機(jī)氯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量同時(shí)分析測(cè)定的方法。該方法優(yōu)化了樣品前處理過(guò)程，采用TPT固相萃取柱凈化，并以乙腈∶甲苯（3∶1）為淋洗液，達(dá)到對(duì)不同種類食品中46種有機(jī)磷、有機(jī)氯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量同時(shí)準(zhǔn)確分析測(cè)定的目的。對(duì)空白樣品進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，46種農(nóng)藥的平均回收率在90 %～110 %，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）＜10 %，滿足農(nóng)藥殘留分析的要求。本文首次利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)不同種類食品中46種有機(jī)磷、有機(jī)氯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量進(jìn)行同時(shí)測(cè)定分析，此方法樣品前處理過(guò)程簡(jiǎn)便、快捷，實(shí)現(xiàn)了樣品的自動(dòng)化分析且檢測(cè)靈敏度好，適用于不同種類食品中有機(jī)磷、有機(jī)氯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的定性和定量測(cè)定，從而為不同種類食品中有機(jī)磷、有機(jī)氯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留檢測(cè)提供了一種簡(jiǎn)便有效的方法。