□ 范翠翠 張曉蕊 張春宇 徐長隆 漢臣氏（沈陽）兒童制品有限公司

酵乳桿菌能調節(jié)宿主體內微生物菌群的平衡，改善宿主體內系統(tǒng)環(huán)境，對宿主健康具有促進作用。生長因子是指能促進乳酸菌生長繁殖的一類結構和性質不同的物質。通過研究篩選出能促進發(fā)酵乳桿菌增殖的促生長因子及最適添加量[1]。

1 材料與儀器

1.1 菌種與培養(yǎng)基

發(fā)酵乳桿菌H0801，由漢臣氏（沈陽）兒童制品有限公司提供。MRS培養(yǎng)基：用于發(fā)酵乳桿菌H0801增殖培養(yǎng)[2]。

1.2 儀器與設備

醫(yī)用低溫保存箱（DW-86L388(J)，青島海爾特種電器有限公司）；精密電子天平（JA2003N，上海佑科儀器儀表有限公司）；電熱恒溫培養(yǎng)箱（DHP-420BS 北京市永光明醫(yī)療器械有限公司）；厭氧培養(yǎng)箱（LAI-3DT，上海龍躍儀器設備有限公司）；超純水儀（UPTB-10，上海申分分析儀器有限公司）。

2 方法

2.1 菌種活化

取存于低溫冰箱內的發(fā)酵乳桿菌H0801菌泥凍存管，通過菌種復蘇得到活化1代菌懸液，并以2%接種量至MRS培養(yǎng)基中，35 ℃厭氧培養(yǎng)箱恒溫靜置培養(yǎng)20 h。

2.2 菌種擴大培養(yǎng)

菌種活化后，按5%接種量，35 ℃、100 rpm振蕩培養(yǎng)10 h，測其菌液活菌數。

2.3 促生長因子的篩選

采用單因素試驗設計，將低聚異麥芽糖（按2%添加量）、低聚果糖（按2%添加量）、菊粉（按1%添加量）、棉籽糖（按1.5%添加量）和乳糖（按2%添加量）添加到發(fā)酵乳桿菌MRS培養(yǎng)基中，進行菌種擴大培養(yǎng)，同時做空白實驗，以菌液活菌數和菌泥收率為評價指標，篩選出具有明顯促進作用的生長因子。

其中，活菌數的測定方法：平板計數法。收率的測定方法：將培養(yǎng)后得到的菌液進行離心（10 000 rpm、10 min），收集菌泥。收率=菌懸液離心后得到的菌泥質量（g）/培養(yǎng)基裝液體積（mL）×100%。

2.4 促生長因子添加量的確定

向發(fā)酵乳桿菌MRS培養(yǎng)基中添加不同濃度促生長因子，進行菌種擴大培養(yǎng)，以菌液活菌數和菌泥收率為評價指標，確定促生長因子的最適添加量。

3 結果與分析

3.1 促生長因子初步篩選

不同促生長因子對發(fā)酵乳桿菌H0801培養(yǎng)的影響見表1。

由表1表明，低聚異麥芽糖作為促生長因子培養(yǎng)發(fā)酵乳桿菌，菌液的活菌數和菌泥收率高于空白對照組和其他對照組，顯示出明顯的促生長優(yōu)勢，初步確定低聚異麥芽糖為發(fā)酵乳桿菌的促生長因子[3]。

3.2 促生長因子添加量的確定

分別添加低聚異麥芽糖且為1.5%、2%、2.5%的添加量向發(fā)酵乳桿菌MRS培養(yǎng)基中，在相同的條件下培養(yǎng)，通過測定確定低聚異麥芽糖的最適添加量。

表1 不同促生長因子對發(fā)酵乳桿菌H0801培養(yǎng)的影響

圖1 低聚異麥芽糖的添加量對發(fā)酵乳桿菌H0801培養(yǎng)的影響

圖1顯示，當促生長因子低聚異麥芽糖的添加量為2%時，發(fā)酵乳桿菌菌液的活菌數和菌泥收率最高，確定低聚異麥芽糖的最適添加量為2%。

4 結論

研究不同種類促生長因子對發(fā)酵乳桿菌H0801培養(yǎng)的影響，結果表明：在發(fā)酵乳桿菌H0801的MRS培養(yǎng)基中添加低聚異麥芽糖，對菌液活菌數和菌泥收率具有優(yōu)勢作用；當低聚異麥芽糖的添加量為2%時，效果尤為顯著。