□ 翁利平 黑龍江省集賢縣市場監(jiān)督管理檢驗檢測中心

分光光度法測定亞硝酸鹽的含量的原理是在酸性條件下，亞硝酸鹽可與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮的產(chǎn)物與鹽酸乙二胺發(fā)生偶合作用，產(chǎn)生顯色物質(zhì)[1]。

1 儀器與試劑

UV1700紫外-可見分光光度計，分析天平，濾紙、過濾裝置一套，比色皿2個，香腸180 g，絞肉機1臺，2 mL刻度吸管2個，5 mL1個，20 mL吸管1個，燒杯4個（3個500 mL，1個100 mL容量）， 容量瓶15個（25 mL 1個，500 mL 4個，50 mL 8個，100 mL 2個。亞鐵氰化鉀溶液、飽和硼砂溶液、飽和乙酸鋅溶液、20%的鹽酸、0.2%α-萘胺溶液、0.4%對氨基苯磺酸溶液、亞硝酸鈉標準溶液（200.6μg/mL）、亞硝酸鈉標準溶液。

2 實驗步驟

2.1 樣品預處理

把香腸放在絞肉機內(nèi)攪碎。稱取絞碎后混合均勻試樣10 g放置于100 mL的燒杯中，加入15 mL的硼砂飽和溶液，200 mL 80 ℃的蒸餾水，先用玻璃棒攪和均勻，再倒入500.00 mL的容量瓶中，放于在沸水浴中加熱15 min，取出后加入5 mL亞鐵氰化鉀溶液，輕輕晃動搖勻，再加入10 mL乙酸鋅溶液。冷卻后定容，在室溫下放置2 min，去掉懸浮的脂肪，取濾液備用。

2.2 確定最大吸收波長

將1.0 mL亞硝酸鈉標準溶液移入100.00 mL容量瓶中，加入5.0 mL對氨基苯磺酸溶液（0.4%），輕輕搖勻，后靜置5 min， 再移入5 mL 0.2% α-萘胺溶液（0.2%），搖勻后室溫下靜置12 min， 放在1 cm比色皿中，然后用同樣方法用蒸餾水配置空白溶液，在 500～600 nm掃描。得到吸光度分別 為 0.019、0.028、0.036、0.045、0.049、0.053、0.048、0.042、0.030、0.020、0.009.

2.3 最佳顯色劑用量

進行吸光度比較，分別用1.00、1.50、2.00、2.50、3.00 mL的鹽酸萘乙二胺溶液為試樣在上述條件下吸光度分別為0.001、0.055、0.068、0.060、0.058。

2.4 選擇合適的空白溶液

向50.00 mL比色管中分別加氯化鈉溶液和空白試劑后加水至刻度，在最大吸收波長處進行吸光度比較。得空白試劑、氯化鈉、去離子水的吸光度分別為 0.070 、0.060 、0.075。

2.5 選取顯色時間

將標液，從0開始時開始計時，分別在靜置5、10、15、20、25 min測得吸光度分別為0.065、0.070、0.070、0.071、0.075、0.070。

2.6 亞硝酸鹽含量的測定

用移液管吸取濃度為5.015 μg/mL的亞硝酸鈉標準液，0.50、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30 mL分別放入100 mL的容量瓶中，定容至50 mL后各加5.00 mL 0.4%對氨基苯磺酸溶液搖至均勻勻，靜置4 min ，各加入5.00 mL萘胺溶液，定容至100.00 mL，后靜置10 min后測式樣吸光度，再以同樣方法做空白對照試驗。繪制亞硝酸鹽的標準曲線，確定標準偏差，據(jù)標準曲線方程算得相應的亞硝酸鈉濃度（μg/mL），計算試樣中亞硝酸鹽（以亞硝酸鈉計）的含量。

3 實驗結(jié)果與數(shù)據(jù)分析

3.1 最佳試驗條件

由實驗得到，亞硝酸鹽的最大吸收波長應為550 nm；當指示劑用量為2.0 mL時，吸光度達到最大值；選用去離子水作為空白溶液時，所得到的吸光度最大，因此本試驗的最佳條件為最大吸收波長550 nm，去離子水作為空白溶液；顯色時間為20 min時，隨著放置時間增加，吸光度增大。但是10 min后，吸光度增大程度不明顯，所以，決定選取10 min作為放置時間，以獲得最大的吸光度和節(jié)省實驗時間。

3.2 亞硝酸含量結(jié)果的計算

當比色液中亞硝酸鈉濃度為0～0.30 μg/mL時，兩者呈線性關(guān)系。Y=0.505x+0.0011，本法的標準偏差為±3.0%，樣品中亞硝酸鹽含量測定結(jié)果：樣品重量5.000 g；吸光度0.015A；未知樣品中亞硝酸鹽含量0.0270 μg/mL。肉類產(chǎn)品品中亞硝酸鹽含量為3.35 mg/kg。

4 結(jié)果與討論

本實驗在確定紫外分觀光度計最佳實驗條件下對肉類產(chǎn)品中亞硝酸鹽的含量進行檢測，得到標準方程式，得到了香腸中亞硝酸鹽的含量為3.35 mg/kg，低于國家標準5 mg/kg?？煞判氖秤?。紫外分光光度法所用儀器簡單、廉價，分析操作也簡便。而且有較高的準確度和分析速度。因此，應用廣泛，既可進行定性分析，也可進行定量分析。