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        等毒性劑量芥子氣誘導(dǎo)大鼠肺損傷炎性因子和蛋白表達(dá)變化

        2018-05-24 08:49:15于丹鐘玉緒李源謝劍煒祝筱姬
        實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志 2018年9期
        關(guān)鍵詞:丙二醇肺泡炎性

        于丹 鐘玉緒 李源 謝劍煒 祝筱姬

        1濰坊醫(yī)學(xué)院研究生部(山東淮坊261053);2軍事醫(yī)學(xué)研究院毒物藥物研究所,毒理學(xué)與抗毒藥物國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(北京 100850);3解放軍第89醫(yī)院呼吸科(山東濰坊 261021)

        芥子氣(sulfur mustard,SM)是一種能導(dǎo)致DNA烷化,蛋白修飾,細(xì)胞膜損傷的化學(xué)性毒劑[1-2]。SM可經(jīng)呼吸道、皮膚、眼睛及消化道等不同途徑染毒,但不同途徑中毒的毒理學(xué)特點(diǎn)各異[3-6]。研究表明,不同途徑SM染毒的分子毒理學(xué)與其毒性作用的分子靶標(biāo)和代謝差異密切相關(guān)。SM損傷的分子毒理機(jī)制主要涉及炎性反應(yīng)、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡、DNA損傷等,但其具體的分子機(jī)制迄今仍未明確[7]。肺是SM損傷的主要靶器官之一,一旦染毒將會(huì)導(dǎo)致高的致殘率和致死率[8-9]。前期研究發(fā)現(xiàn),SM誘導(dǎo)大鼠急性肺損傷后,其血清炎性因子水平和肺泡間隔炎性細(xì)胞浸潤及肺泡支氣管灌洗液細(xì)胞和蛋白含量明顯增多[10-11]。然而,在SM等毒性劑量(1LD50)下,經(jīng)兩種染毒途徑誘導(dǎo)急性肺損傷炎性反應(yīng)是否存在差別,文獻(xiàn)未見報(bào)道。本文通過建立經(jīng)腹腔和氣管途徑SM(1LD50)誘導(dǎo)大鼠急性肺損傷模型,比較2種模型血清炎性因子水平和肺泡間隔相關(guān)蛋白表達(dá)的差異性,并探討SM肺損傷的分子機(jī)制,為其藥物防治提供理論依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 試劑與儀器 白細(xì)胞介素-23(interleukine-23,IL-23)、γ-干擾素(interferon gamma-γ,INF-γ)、白細(xì)胞介素-4(interleukine-4,IL-4)Elisa試劑盒,由上海繪辛生物科技有限公司提供;細(xì)胞核因子-β1(nuclear transcription factor-β1,NF-κβ1)、細(xì)胞核因子-βp65(nuclear transcription factor-βp65,NF-κβp65)、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signalregulated kinase,ERK)、c-Jun氨基端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、p38激活絲裂原活化蛋白酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)免疫組化試劑盒,由北京博奧森生物技術(shù)有限公司提供;Versa Max酶標(biāo)儀,美國Molecular Devices公司;Image-Pro Plus 6.0病理細(xì)胞圖像分析系統(tǒng),美國Media Cybernetics公司。

        1.2 動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)分組 健康雄性SD大鼠(SPF級(jí),軍事醫(yī)學(xué)研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,合格證號(hào):0015902)136只,體質(zhì)量280~300 g,年齡15周。預(yù)實(shí)驗(yàn),經(jīng)過霍恩氏法計(jì)算,腹腔途徑SM(0.96 LD50=8 mg/kg)和經(jīng)氣管途徑SM(0.98 LD50=2 mg/kg)的半數(shù)致死量(median lethal dose,LD50),然后通過等毒性劑量SM(1LD50)染毒。將大鼠分為腹腔SM組(32只)、腹腔丙二醇組(32只)、氣管SM組(32只)、氣管丙二醇組(32只)、正常對照組(8只)。SM液(純度96%)臨用前用丙二醇稀釋至所需濃度。(1)氣管途徑染毒動(dòng)物模型建立:實(shí)驗(yàn)前氣管SM組和氣管丙二醇組皮下注射阿托品(0.05 mg/kg),30 min后腹腔內(nèi)注射鹽酸氯胺酮(100 mg/kg)實(shí)施麻醉,氣管內(nèi)注入稀釋的SM 0.1 mL(1LD50=2 mg/kg),氣管丙二醇組注入丙二醇0.1 mL。(2)腹腔途徑染毒動(dòng)物模型建立:同氣管途徑方法實(shí)施麻醉。腹腔SM組大鼠腹腔內(nèi)注入稀釋的SM 0.1 mL(1LD50=8 mg/kg),腹腔丙二醇組注入丙二醇0.1 mL。正常對照組不做任何處理。

        1.3 ELISA法檢測血清炎性因子 將腹腔SM組、腹腔丙二醇組、氣管SM組、氣管丙二醇組、正常對照組不同時(shí)間段獲取的大鼠血2 mL,37℃水浴1 h,4 ℃ 過夜,血標(biāo)本離心(223.6g,10 min),取上清液,分裝在無菌小瓶中,-80℃保存?zhèn)溆?。采用Versa Max酶標(biāo)儀,檢測血清IL-23、INF-γ、IL-4水平。所有流程嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作。

        1.4 免疫組化(SP法)染色 收集各組大鼠肺組織標(biāo)本。石蠟切片,脫蠟,水化,枸櫞酸緩沖液抗原修復(fù),PBS洗滌,3%雙氧水封閉,正常山羊血清封閉,滴加兔抗大鼠 NF-κβ1、NF-κβp65、ERK、JNK、p38MAPK單克隆抗體 20 μL/片,DAB顯色,蘇木素復(fù)染,脫水,中性樹膠封片。PBS代替一抗作陰性對照,用已知陽性切片作陽性對照。采用Image-Pro Plus 6.0病理細(xì)胞圖像分析系統(tǒng),選取測量參數(shù),測定陽性率和強(qiáng)陽性率,每間隔1個(gè)高倍視野(400倍)選取1個(gè)視野進(jìn)行觀察,每張切片至少觀察5個(gè)高倍視野,計(jì)算其肺泡間隔陽性細(xì)胞比率(=5個(gè)高倍視野的陽性細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%)并計(jì)算其平均值。

        1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件,數(shù)據(jù)用xˉ±s表示,多組間用重復(fù)測量的多因素方差分析,兩兩比較采用SNK-q法,P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 SM(1LD50)不同途徑對大鼠血清炎性因子的影響 腹腔和氣管SM組:血清IL-23、INF-γ水平24 h達(dá)高峰,然后逐漸下降;血清IL-4水平24 h達(dá)低峰,然后逐漸升高,72 h達(dá)高峰。5組不同時(shí)間血清炎性因子水平分別比較:(1)腹腔和氣管SM組不同時(shí)間點(diǎn)間血清IL-23、INF-γ、IL-4水平分別比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;(2)腹腔SM組與其他4組分別比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;(3)腹腔SM組與氣管SM組變化趨勢分別比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;IL-23、INF-γ呈遞減趨勢,IL-4呈遞增趨勢(圖1 A~C)。

        2.2 SM(1LD50)不同途徑對大鼠肺泡間隔NF-κβ1、NF-κβp65、ERK、JNK、p38MAPK蛋白表達(dá)的影響 腹腔和氣管SM組6 h肺泡間隔NF-κβ1、NF-κβp65、ERK、JNK、p38MAPK 蛋白陽性表達(dá)呈帶狀分布,24 h聚集成簇,48、72 h呈團(tuán)簇狀。丙二醇和正常對照組呈零星分布(圖2)。5組不同時(shí)間肺泡間隔相關(guān)蛋白陽性表達(dá)率分別比較:(1)腹腔和氣管SM組不同時(shí)間點(diǎn)間的NF-κβ1、NF-κβp65、ERK、JNK、p38MAPK蛋白陽性表達(dá)率分別比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;(2)腹腔SM組與其他4組蛋白陽性表達(dá)率分別比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;(3)腹腔SM組與氣管SM組蛋白陽性表達(dá)率變化趨勢分別比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,呈遞增趨勢。

        3 討論

        本研究發(fā)現(xiàn),腹腔和氣管SM組各時(shí)間段血清INF-γ、IL-23水平24 h達(dá)最高峰,然后逐漸下降;血清IL-4水平24 h最低峰,48 h后呈現(xiàn)升高趨勢。本研究提示,在SM誘導(dǎo)肺損傷的急性期,促炎因子INF-γ和IL-23水平呈一過性升高,抗炎因子IL-4水平則一過性降低。可見,SM誘導(dǎo)大鼠血清炎性因子反應(yīng)屬一種生理和(或)病理代償性反應(yīng),已達(dá)到促炎與抗炎反應(yīng)新的平衡。文獻(xiàn)報(bào)道,這種反應(yīng)可誘發(fā)氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡,導(dǎo)致SM對肺組織更進(jìn)一步病理學(xué)改變[7,12]。SM誘導(dǎo)肺損傷急性期,促炎因子升高已形成共識(shí)[13-14]。在SM肺損傷慢性期,促炎因子可出現(xiàn)下調(diào)現(xiàn)象,這可能與免疫功能下降有關(guān)[15]。本研究還證實(shí),作為SM的稀釋劑丙二醇,不能誘導(dǎo)大鼠血清炎性因子反應(yīng)。筆者認(rèn)為,炎性因子源于炎細(xì)胞釋放并能啟動(dòng)炎性反應(yīng)的重要因子,其分子水平的級(jí)聯(lián)效應(yīng)是肺損傷的基礎(chǔ)。因此,炎性反應(yīng)是SM肺損傷的分子機(jī)制之一,同樣如何抗炎則是SM誘導(dǎo)急性肺損傷防治的重要措施之一[16-17]。

        圖1 大鼠血清IL-23、INF-γ、IL-4水平變化趨勢Fig.1 The trends in serum IL-23,INF-,IL-4 levels and the positive expression ratio of proteins-related in rats with SM(1LD50)

        圖2 大鼠肺泡間隔NF-Kβ1、NF-Kβp65、ERK、JNK、p38MAPK蛋白陽性表達(dá)(× 400)Fig.2 The positive expression of NF-Kβ1,NF-Kβp65,ERK,JNK,p38MAPK proteins in the alveolar septum of rats with SM(1LD50)

        本研究還發(fā)現(xiàn),腹腔SM組大鼠肺組織各時(shí)間段肺泡間隔 NF-κβ1、NF-κβp65、ERK、JNK、p38MAPK蛋白陽性表達(dá)率顯著升高,提示腹腔SM組大鼠肺泡間隔炎性反應(yīng)嚴(yán)重。這與我們前期研究的腹腔SM組大鼠肺泡間隔炎性細(xì)胞浸潤(淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)增多結(jié)果一致[18]。本研究結(jié)果說明,肺泡間隔相關(guān)炎性蛋白表達(dá)與炎性細(xì)胞浸潤密切相關(guān)。肺泡間隔相關(guān)炎性蛋白表達(dá)的增加,揭示了SM誘導(dǎo)肺損傷炎性反應(yīng)在分子水平的變化,且這些蛋白通道的激活對炎癥的發(fā)展起著關(guān)鍵性作用[19]。在正常情況下,胞漿中NF-κβ(包括 NF-κβ1和 NF-κβp65)與其抑制蛋白結(jié)合不具有活性。當(dāng)機(jī)體受到刺激時(shí),抑制蛋白被磷酸化并迅速降解,NF-κβ釋放和激活并轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi),結(jié)合特異性DNA位點(diǎn),啟動(dòng)相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄[20]。ERK和JNK能應(yīng)答多種細(xì)胞外刺激,參與調(diào)解細(xì)胞的生命過程,其信號(hào)功能失調(diào)與炎癥密切相關(guān)[21]。研究發(fā)現(xiàn),SM誘導(dǎo)急性肺損傷可增加TGF-β1和Smad蛋白表達(dá),結(jié)果提示有潛在肺纖維化形成的可能性[22]。同時(shí),TGF-β1則可介導(dǎo)ERK通道,增強(qiáng)特定核轉(zhuǎn)錄因子NF-κβ活化,有利于促進(jìn)膠原的合成[23]。ERK信號(hào)通道還可激活NF-κβ信號(hào)通道,兩者之間存在關(guān)聯(lián)性。因此,SM誘導(dǎo)急性肺損傷炎性反應(yīng)可能與在轉(zhuǎn)錄水平ERK和NF-κβ細(xì)胞內(nèi)信號(hào)蛋白激活有關(guān)[16]。另外,缺氧也可迅速激活ERK、JNK、p38MAPK蛋白,通過MAPK、ERK、JNK信號(hào)通道產(chǎn)生炎性反應(yīng)[24]。研究表明,SM可產(chǎn)生細(xì)胞應(yīng)激,磷酸化后激活p38MAPK信號(hào)通道,使促炎因子(如 IL-8、IL-6、TNF-α、IL-1β)表達(dá)上調(diào)[25]。也有學(xué)者認(rèn)為,ERK信號(hào)通道的激活,可增加MMP-2活性。而炎性因子活性依賴于MAPK信號(hào)通道,誘導(dǎo)MAPK/ERK信號(hào)通道活化,可激活NF-κβ和ERK蛋白轉(zhuǎn)錄至細(xì)胞核調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子活性,產(chǎn)生相應(yīng)的細(xì)胞效應(yīng)[19,23]。本研究表明,SM誘導(dǎo)急性肺損傷相關(guān)炎性蛋白表達(dá)與炎性因子水平關(guān)系密切。促炎因子可增加JNK和p38MAPK的活化作用,并通過活化的MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)錄通道調(diào)節(jié)基因表達(dá)水平和蛋白功能[26-27]。筆者認(rèn)為,腹腔和氣管途徑SM(1LD50)對肺所產(chǎn)生的生物化學(xué)效應(yīng)(炎性因子和相關(guān)炎性蛋白)的差異性,推測可能與SM對腹腔的腹膜和氣管的黏膜局部屏障作用的機(jī)制和作用的面積不同導(dǎo)致毒素吸收入血濃度的差異有關(guān)。SM可誘導(dǎo)肺巨噬細(xì)胞釋放促炎介質(zhì)和細(xì)胞因子,刺激中性粒細(xì)胞溢出和集聚[15]。在損傷部位,中性粒細(xì)胞通過脫顆粒和髓過氧化物酶釋放改變肺組織的微環(huán)境,從而啟動(dòng)肺損傷[28]。

        綜上所述,SM(1LD50)染毒,經(jīng)腹腔注射大鼠血清炎性因子水平和肺泡間隔相關(guān)蛋白表達(dá)明顯高于經(jīng)氣管灌注,提示SM誘導(dǎo)的肺炎性反應(yīng)與染毒途徑有關(guān)。不同途徑SM(1LD50)誘導(dǎo)急性肺損傷,取決于毒物作用的靶器官和代謝的基礎(chǔ)。SM誘導(dǎo)的急性肺損傷毒理學(xué)機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜,引發(fā)的細(xì)胞和分子水平的炎性反應(yīng)是啟動(dòng)肺損傷的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。建立經(jīng)腹腔和氣管途徑SM(1LD50)誘導(dǎo)急性肺損傷模型,可為SM肺損傷的抗炎靶向治療提供理論依據(jù)。

        參考文獻(xiàn)

        [1]NOURANI M R,F(xiàn)ARAJPOUR Z,NAJAFI A,et al.Trefoil factor family 1 is involved in airway remodeling of mustard lung[J].Iran J Allergy Asthma Immunol,2016,15(4):275-282.

        [2]JOSEPH LB,COMPOSTO G M,HECK D E.Tissue injury and repair following cutaneous exposure of mice to sulfur mustard[J].Ann N Y Acad Sci,2016,1378(1):118-123.

        [3]BENSON J M,TIBBETTS B M,WEBER W M,et al.Uptake,tissue distribution,and excretion of 14C-sulfur mustard vapor following inhalation in F344 rats and cutaneous exposure in hairless guinea pigs[J].J Toxicol Environ Health,2011,74(13):875-885.

        [4]JAFARI M.Dose-and time-dependent effects of sulfur mustard on antioxidant system in liver and brain of rat[J].Toxicology,2007,231(1):30-39.

        [5]VIJAYARAGHAVAN R,KULKARNI A,PANT S C,et al.Differential toxicity of sulfur mustard administered through percutaneous,subcutaneous,and oral routes[J].Toxicol Appl Pharmacol,2005,202(2):180-188.

        [6]SHARMA M,VIJAYARAGHAVAN R,GANESAN K.Comparison of toxicity of selected mustard agents by percutaneous and subcutaneous routes[J].Indian J Exp Biol,2008,46(12):822-830.

        [7]NOURANI M R,MAHMOODZADEH HOSSEINI H,IMANI FOOLADI A A.Cellular and molecular mechanisms of acute exposure to sulfur mustard:a systematic review[J].J Recept Signal Transduct Res,2017,37(2):200-216.

        [8]RAHMANI H,JAVADI I,SHIRALI S.Respiratory complications due to sulfur mustard exposure[J].Int J Curr Res Acad Rev,2016,4(6):143-149.

        [9]PANAHI Y,GHANEI M,VAHEDI E,et al.Efficacy of probiotic supplementation on quality of life and pulmonary symptoms due to sulfur mustard exposure:a randomized double-blind placebo-controlled trial[J].Drug Chem Toxicol,2017,40(1):24-29.

        [10]ZHU X J,XU R,MENG X,et al.Mechanistic insights of sulfur mustard-induced acute tracheal injury in rats[J].Int J Toxicol,2014,33(5):382-392.

        [11]XIAOJI Z,XIAO M,RUI X,et al.Mechanism underlying acute lung injury due to sulfur mustard exposure in rats[J].Toxicol Ind Health,2016,32(8):1345-1357.

        [12]MOSAYEBZADEH M,GHAZANFARI T,DELSHAD A,et al.Evaluation of apoptosis in the lung tissue of sulfur mustard-exposed individuals[J].Iran J Allergy Asthma Immunol,2016,15(4):283-288.

        [13]WEINBERGER B,MALAVIYA R,SUNIL V R,et al.Mustard vesicant-induced lung injury:Advances in therapy[J].Toxicol Appl Pharmacol,2016,305:1-11.

        [14]BOSKABADY M H,AMERY S,VAHEDI N,et al.The effect of vitamin E on tracheal responsiveness and lung inflammation in sulfur mustard exposed guinea pigs[J].Inhal Toxicol,2011,23(3):157-165.

        [15]ASKARI N,GHAZANFARI T,YARAEE R,et al.Association between acne and serum pro-inflammatory cytokines(il-1α,il-1β,il-1ra,il-6,il-8,il-12 and rantes)in mustard gas-exposed patients:sardasht-iran cohort study[J].Arch Iran Med,2017,20(2):86-91.

        [16]KANNAN G M,KUMAR P,BHASKAR A S,et al.Prophylactic efficacy of S-2(2-aminoethylamino)ethyl phenyl sulfide(DRDE-07)against sulfur mustard induced lung toxicity in mice[J].Drug Chem Toxicol,2016,39(2):182-189.

        [17]PLAHOVINSAK J L,BUCCELLATO M A,REID F M,et al.Selection of non-steroidal anti-inflammatory drug and treatment regimen for sulfur mustard-induced cutaneous lesions[J].Cutan Ocul Toxicol,2016,35(3):208-217.

        [18]YU D,BEI Y Y,LI Y,et al.In vitro the differences of inflammatory and oxidative reactions due to sulfur mustard induced acute pulmonary injury underlying intraperitoneal injection and intratracheal instillation in rats[J].Int Immunopharmacol,2017,47:78-87.

        [19]FENG J,ZHANG Q,MO W,et al.Salidroside pretreatment attenuates apoptosis and autophagy during hepatic ischemia-reperfusion injury by inhibiting the mitogen-activated protein kinase pathway in mice[J].Drug Des Devel Ther,2017,11:1989-2006.

        [20]BEN-YEHUDA GREENWALD M,F(xiàn)RU?I?-ZLOTKIN M,SOROKA Y,et al.A novel role of topical iodine in skin:Activation of the Nrf2 pathway[J].Free Radic Biol Med,2017,104:238-248.

        [21]SUN Y,ZHANG D,MAO M,et al.Roles of p38 and JNK protein kinase pathways activated by compound cantharidin capsules containing serum on proliferation inhibition and apoptosis of human gastric cancer cell line[J].Exp Ther Med,2017,14(2):1809-1817.

        [22]WEI H,YUANYUAN B,DAN Y,et al.The differences of apoptosis and pulmonary fibrosis following sulfur mustard-induced acute pulmonary injury via intraperitoneal injection and intratracheal instillation in rats[J].Int J Clin Exp Med,2017,10(12):15974-15990.

        [23]GHAFFARPOUR S,GHAZANFARI T,KABUDANIAN ARDESTANI S,et al.Correlation between MMP-9 and MMP-9/TIMPs complex with pulmonary function in sulfur mustard exposed civilians:sardasht-iran cohort study[J].Arch Iran Med,2017,20(2):74-82.

        [24]ZHOU Y H,HAN Q F,WANG L H,et al.High mobility group box 1 protein attenuates myocardial ischemia reperfusion injury via inhibition of the p38 mitogen-activated protein kinase signaling pathway[J].Exp Ther Med,2017,14(2):1582-1588.

        [25]DILLMAN JF 3RD,MCGARY K L,SCHLAGER J J.An inhibitor of p38 MAP kinase downregulates cytokine release induced by sulfur mustard exposure in human epidermal keratinocytes[J].Toxicol In Vitro,2004,18(5):593-599.

        [26]CAI X,WANG X,LI J,et al.Protective effect of glycyrrhizin on myocardial ischemia/reperfusion injury-induced oxidative stress,inducible nitric oxide synthase and inflammatory reactions through high-mobility group box 1 and mitogen-activated protein kinase expression[J].Exp Ther Med,2017,14(2):1219-1226.

        [27]ZHOU S,DU X,XIE J,et al.Interleukin-6 regulates iron-related proteins through c-Jun N-terminal kinase activation in BV2 microglial cell lines[J].PLoS One,2017,12(7):e0180464.

        [28]PANAHI Y,JADIDI-NIARAGH F,JAMALKANDI SA,et al.Immunology of chronic obstructive pulmonary disease and sulfur mustard induced airway injuries:implications for immunotherapeutic interventions[J].Curr Pharm Des,2016,22(20):2975-2996.

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