王鈞 李蔚范

(1.北京市豐臺(tái)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院婦產(chǎn)科，北京 100072；2.北京大學(xué)腫瘤醫(yī)院婦科，北京 100142)

宮頸癌是常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一，我國(guó)72個(gè)腫瘤登記地區(qū)宮頸癌發(fā)病率為12.96/10萬(wàn)，死亡率為3.28/10萬(wàn)，宮頸癌發(fā)病率和死亡率均隨著年齡的增加而增加[1]。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，一些與腫瘤預(yù)后有關(guān)的血清學(xué)指標(biāo)受到越來(lái)越多的重視。血清前梯度蛋白2(anterior gradient-2，AGR2)是從乳腺癌細(xì)胞系MCF7的cDNA文庫(kù)中篩選出非洲爪蟾AGR2的同源基因[2]。AGR2在多種惡性腫瘤中過(guò)量表達(dá)，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，是一個(gè)潛在的早期診斷、療效及預(yù)后判斷的標(biāo)志性基因[3-5]。目前有關(guān)AGR2在宮頸癌中的臨床意義尚不清楚，相關(guān)的報(bào)道極少。本研究通過(guò)檢測(cè)宮頸癌患者手術(shù)前后血清及病變組織AGR2水平變化，分析其與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系，為AGR2輔助診斷宮頸癌及療效、預(yù)后判斷提供一定的參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取從2014年6月～2016年6月在我院就診并經(jīng)手術(shù)治療、術(shù)后病理確診的宮頸癌30例(宮頸癌組)及宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(CIN)患者(CIN組)20例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①首次經(jīng)病理學(xué)確診的原發(fā)性宮頸癌。②術(shù)前未接受放化療及其他輔助抗腫瘤治療，無(wú)其他系統(tǒng)腫瘤病史。③患者均知情同意并自愿參加。年齡51～67歲，平均年齡(52.7±8.3)歲。宮頸瘤組病理類(lèi)型：鱗癌26例，腺癌4例。腫瘤大?。耗[瘤直徑≤4cm 21例，>4cm 9例；FIGO分期：I期19例，II期11例；分化程度：高分化4例，中分化15例，低分化11例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移4例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例。CIN組20例，其中，CIN II級(jí)7例，CIN III級(jí)13例，年齡43～64歲，平均年齡(50.4±5.8)歲。另外采集20例在我院健康體檢婦女血清標(biāo)本以及20例因子宮肌瘤行全子宮切除術(shù)的正常宮頸組織標(biāo)本為正常對(duì)照組。

1.2 方法

血清及病變組織AGR2水平檢測(cè)宮頸癌組及CIN組患者于手術(shù)前和手術(shù)后1周、健康體檢(對(duì)照組)女性于清晨采集空腹靜脈血3mL，3000r/min，離心10min，取上清置于-80℃冰箱保存，集中檢測(cè)。術(shù)中將切除的新鮮宮頸病變組織生理鹽水沖洗后放入預(yù)冷的塑料瓶，投入液氮中保存。從液氮中取出組織標(biāo)本，用預(yù)冷的粉碎器將標(biāo)本粉碎，用天平稱(chēng)取100mg標(biāo)本，放入勻漿緩沖液試管中，制成勻漿，4℃條件下，5000r/min，離心15min，取上清置于-80℃冰箱保存，集中檢測(cè)。病變組織前梯度蛋白2(AGR2)和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA) 試劑盒購(gòu)自北京易科攀博生物科技有限公司，采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定AGR2水平，按試劑盒說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格操作。

2 結(jié)果

2.1 手術(shù)前后宮頸癌及CIN患者血清及病變組織中AGR2水平的比較 宮頸癌組患者手術(shù)前血清及癌組織AGR2水平明顯高于CIN組和正常對(duì)照組(均P<0.01)，CIN組患者術(shù)前血清AGR2水平略高于正常對(duì)照組，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；CIN患者病變組織中AGR2水平略高于正常宮頸組織，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；宮頸癌及CIN患者術(shù)后血清AGR2水平較術(shù)前明顯降低(均P<0.01)，見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 各組血清AGR2水平比較

Figure1ComparisonofserumAGR2levelsinthethreegroups

注：與同組術(shù)后比較①P<0.01；與CIN組術(shù)后比較②P<0.01;與宮頸癌組術(shù)前比較③P<0.01

圖2 各組宮頸組織AGR2水平比較

Figure2ComparisonofAGR2levelsincervicaltissuesinthethreegroups

注：與CIN和正常組宮頸組織AGR2水平比較，①P<0.01

2.2 宮頸癌血清及組織中AGR2水平與臨床病理特征的關(guān)系 宮頸癌血清及組織中AGR2水平與腫瘤大小、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，與年齡、病理類(lèi)型、分化程度無(wú)關(guān)(P>0.05)，見(jiàn)表1。

2.3 宮頸癌組織與血清AGR2水平之間的關(guān)系 相關(guān)分析顯示，宮頸癌及CIN患者術(shù)前血清AGR2與術(shù)后血清AGR2水平呈正相關(guān)(r=0.747，P=0.000)，宮頸組織AGR2水平與手術(shù)前后血清AGR2水平均呈正相關(guān)(r=0.789，P=0.000；r=0.700，P=0.000)，見(jiàn)圖3、4、5。

表1宮頸癌血清及組織中AGR2水平與臨床病理特征的關(guān)系

Table1TherelationshipbetweenSerumandtissuelevelsofAGR2incervicalcancerandclinicopathologicalfeatures

項(xiàng)目n血清AGR2(ng/mL)術(shù)前術(shù)后宮頸組織年齡(歲) ≤501121.27±4.2012.34±2.0342.27±8.75 >501924.51±3.3714.02±2.9345.47±9.59腫瘤大小(cm) ≤42122.15±3.9312.48±2.4742.10±7.89 >4926.06±4.85①15.60±2.31②49.44±10.66①病理類(lèi)型 鱗癌2623.39±3.9213.42±2.5744.18±8.92 腺癌422.88±8.3013.38±4.5045.10±12.91FIGO分期 Ⅰ期1921.80±3.2612.15±1.5741.16±8.15 Ⅱ期1125.95±5.30①15.59±3.16②49.72±8.88①分化程度 高分化422.38±2.0112.68±1.9240.35±4.89 中分化1522.65±1.3913.30±1.0945.17±5.90 低分化1124.58±1.1313.69±1.2644.55±5.34淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 有418.48±1.2111.30±1.5234.10±3.16 無(wú)2624.06±1.54①13.74±1.28①45.87±4.56①

注：與同項(xiàng)目前項(xiàng)比較①P<0.05,②P<0.01

圖3宮頸癌及CIN患者術(shù)前血清AGR2水平與術(shù)后血清水平相關(guān)性分析

Figure3ThecorrelationanalysisbetweenpreoperativeserumAGR2levelsandpostoperativeserumlevelsofAGR2incervicalcancerandCINpatients.

3 討論

研究表明，腫塊直徑、腫瘤分期、HPV檢測(cè)、分化程度對(duì)宮頸癌的臨床預(yù)后影響較大,臨床干預(yù)中需要提供相關(guān)指標(biāo)的監(jiān)測(cè)效能，有針對(duì)性的早期干預(yù)[6]。手術(shù)前后檢測(cè)相關(guān)腫瘤指標(biāo)水平，可以為宮頸癌早期診斷、療效評(píng)價(jià)及預(yù)后判斷提供了一定的參考價(jià)值。宮頸病變及宮頸癌的起源細(xì)胞為儲(chǔ)備細(xì)胞，儲(chǔ)備細(xì)胞增殖、增生、發(fā)生癌變而形成癌變上皮[7]。Sato等[8]研究通過(guò)人源性多能干細(xì)胞(iPSCs)再生子宮頸儲(chǔ)備細(xì)胞樣特性的方法，誘導(dǎo)出類(lèi)似于儲(chǔ)備細(xì)胞樣的細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)該細(xì)胞存在AGR2表達(dá)。已有的研究證實(shí)，AGR2在乳腺癌、胃癌、胰腺癌等疾病中呈過(guò)量表達(dá)，與腫瘤的形成和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[9-11]。AGR2是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)駐留的蛋白質(zhì)二硫化物異構(gòu)酶超家族成員，是脊椎動(dòng)物中包括胚盤(pán)形成和肢體再生的基本生物學(xué)特性的主要效應(yīng)因子。AGR2可干擾并影響疾病進(jìn)程，包括癌癥進(jìn)展和耐藥性等[12]。Pohler等[13]研究證實(shí)，AGR2通過(guò)抑制P53磷酸化及其活性，細(xì)胞失去正常調(diào)控導(dǎo)致癌變。王巍巍等[14]研究發(fā)現(xiàn)，二亞硝基哌嗪(DNP)通過(guò)在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)AGR2的表達(dá)，參與鼻咽癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。李躍進(jìn)等[15]研究表明，AGR2在鼻咽癌細(xì)胞系5-8F中明顯高表達(dá)，干擾AGR2可使癌細(xì)胞遷移和侵襲功能明顯減弱，使其體外成瘤能力顯著降低。采用RNAi技術(shù)特異地剔除AGR2基因，可明顯減少肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移[16]。由此可見(jiàn)，AGR2增高具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等作用。因此，AGR2是一個(gè)潛在的腫瘤診斷、療效及預(yù)后判斷的生物標(biāo)志物。目前AGR2在宮頸癌中的表達(dá)尚不清楚，相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道極少。本研究探討了AGR2在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用，通過(guò)ELISA法檢測(cè)了宮頸癌及CIN患者血清及病變組織的AGR2水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，宮頸癌患者手術(shù)前血清及癌組織AGR2水平明顯高于CIN和正常對(duì)照組，宮頸癌及CIN患者術(shù)后血清AGR2水平較術(shù)前明顯降低，相關(guān)性分析表明，宮頸癌及CIN組術(shù)前與術(shù)后血清AGR2水平呈正相關(guān)，宮頸組織AGR2水平與手術(shù)前后血清AGR2水平均呈正相關(guān)，因此，推測(cè)術(shù)后血清AGR2水平下降可能與體內(nèi)腫瘤組織切除后AGR2分泌入血減少有關(guān)，在一定程度上可作為判斷手術(shù)療效的參考指標(biāo)。

圖4宮頸組織AGR2水平與術(shù)前血清AGR2水平的相關(guān)性分析

Figure4CorrelativeanalysisbetweenAGR2levelsincervicaltissueandpreoperativeserumAGR2levels.

圖5宮頸組織AGR2水平與術(shù)后血清AGR2水平的相關(guān)性分析

Figure5CorrelativeanalysisbetweenAGR2levelsincervicaltissueandpostoperativeserumAGR2levels.

本研究分析了血清及宮頸癌組織中AGR2水平與臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果顯示，宮頸癌血清及組織中AGR2水平與腫瘤大小、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與年齡、病理類(lèi)型、分化程度無(wú)關(guān)。表明，AGR2與惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系。Zhang等[17]研究發(fā)現(xiàn)，AGR2與胃癌腫瘤大小、侵襲深度、TNM分期顯著相關(guān)。白小英等[18]研究發(fā)現(xiàn)，卵巢上皮性癌及卵巢交界性腫瘤血清AGR2水平、AGR2蛋白陽(yáng)性表達(dá)均明顯高于卵巢良性腫瘤及健康體檢者，卵巢上皮性癌血清AGR2水平及癌組織中AGR2的陽(yáng)性表達(dá)率均與臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。劉麗娜等[19]研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌組織中AGR2陽(yáng)性表達(dá)率較癌旁正常組織顯著性增高，AGR2的陽(yáng)性表達(dá)率與腫瘤分化程度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著相關(guān)，AGR2在結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。Lacambra等[20]研究發(fā)現(xiàn)，AGR2表達(dá)的預(yù)后影響可能與雌激素受體陽(yáng)性乳腺癌的治療結(jié)果和/或其轉(zhuǎn)移促進(jìn)作用有關(guān)。它可能是臨床實(shí)踐中潛在可利用的重要腫瘤生物標(biāo)志物和陰性預(yù)后因素。以上研究表明，AGR2水平參與了不同腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移。

4 結(jié)論

本文資料顯示，宮頸癌患者血清AGR2增高與腫瘤大小、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，并參與了宮頸癌發(fā)生、侵襲及轉(zhuǎn)移過(guò)程，也為手術(shù)療效的判斷和腫瘤治療提供了新的靶點(diǎn)。但尚需大樣本多指標(biāo)綜合研究，以闡明AGR2與宮頸癌預(yù)后的關(guān)系。

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