劉兆春 劉曉婉 趙 霞

(石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦科，新疆 石河子 832000)

壓力性尿失禁(SUI)是尿失禁中最常見的類型，約占尿失禁患者總數(shù)的49%〔1，2〕。由于男女尿路解剖結(jié)構(gòu)不同，SUI患者絕大部分為女性，且多為絕經(jīng)后的女性。女性在絕經(jīng)后生理上最大的改變?yōu)槁殉补δ苊黠@下降，同時(shí)其雌激素分泌量也明顯降低，進(jìn)而導(dǎo)致一系列的代謝紊亂，雌激素受體(ER)在其中發(fā)揮了重要的作用，因此可以推測絕經(jīng)期的女性發(fā)生SUI可能與ER的變化有關(guān)〔3〕。轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β1是一種具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和分化功能的蛋白肽，能促進(jìn)合成以膠原為主的間質(zhì)蛋白質(zhì)。Ⅰ型膠原蛋白(Collagen Ⅰ)是筋膜、皮膚、肌鍵中的主要成分，其含量可影響盆底結(jié)構(gòu)。相關(guān)研究顯示〔4〕，TGF-β1能增加體外培養(yǎng)細(xì)胞Ⅰ型和Ⅲ型膠原mRNA的表達(dá)，另有研究顯示〔5〕，SUI的發(fā)生與Ⅰ型和Ⅲ型膠原的含量有關(guān)，因此可以推測TGF-β1可能影響了SUI的發(fā)生發(fā)展。本研究通過探討中老年女性SUI患者盆底組織TGF-β1及ER的表達(dá)及臨床意義，進(jìn)一步研究SUI的發(fā)生發(fā)展機(jī)制。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015年5月至2017年6月在石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院接受治療的中老年女性SUI患者200例作為SUI組，納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)均符合《壓力性尿失禁的診斷》中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)〔6〕；(2)年齡≥40歲；(3)臨床病歷資料齊全。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)近3個(gè)月內(nèi)服用過激素類藥物者；(2)合并有嚴(yán)重器質(zhì)性疾病者；(3)患有惡性腫瘤者。選取同期收治的盆腔臟器脫垂(POP)患者50例納入POP組，另外選取無POP的良性子宮病變患者50例納入對照組，兩組均無尿失禁癥狀。三組患者一般資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。具有可比性。研究對象對本次研究涉及內(nèi)容均知情同意，且本研究獲醫(yī)院倫理委員會審批通過。

表1 三組年齡、產(chǎn)次、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)比較

1.2方法

1.2.1組織標(biāo)本 對照組和POP組患者在進(jìn)行陰式子宮切除術(shù)或開腹子宮切除術(shù)時(shí)獲取陰道前壁12點(diǎn)處組織，SUI組患者在進(jìn)行經(jīng)陰道無張力尿道中段懸吊術(shù)或Burch手術(shù)時(shí)獲取陰道前壁12點(diǎn)處組織。用生理鹽水沖洗離體后組織上的血跡，之后將其置入10%甲醛液中固定24 h，再進(jìn)行脫水、石蠟包埋、切片處理。

1.2.2蘇木素-伊紅(HE)染色 采用二甲苯對組織切片進(jìn)行脫蠟處理，后置于梯度酒精中HE染色約10 min，置于分化液鹽酸乙醇30 s，水洗終止分化。用自來水浸泡返藍(lán)5 min，伊紅復(fù)染3 min，后用自來水沖洗，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，鏡檢。

1.2.3免疫組化法檢測ER、TGF-β1、Collagen I的表達(dá) 采用60℃恒溫烤箱對切片進(jìn)行融蠟，二甲苯脫蠟，后置于梯度酒精中，磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗3次，每次3 min，0.3%過氧化氫孵育10 min，PBS沖洗3次，每次3 min，置入枸櫞酸鹽緩沖液中進(jìn)行抗原修復(fù)，PBS沖洗3次，每次3 min，滴加牛血清白蛋白(BSA)封閉20 min，滴加稀釋好的一抗(兔抗人TGF-β1多克隆抗體、鼠抗人ER多克隆抗體，鼠抗人Collagen I多克隆抗體)，4℃過夜。PBS沖洗3次，每次3 min，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，在顯微鏡下對顯色情況進(jìn)行觀察，顯色結(jié)果滿意后終止反應(yīng)，自來水沖洗，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，鏡檢。

1.3判斷標(biāo)準(zhǔn) 在400倍高倍鏡下觀察每張切片的細(xì)胞染色情況。TGF-β1陽性著色為胞質(zhì)或胞膜呈棕黃色，計(jì)算每組切片中陽性細(xì)胞的占比，若陽性細(xì)胞≤10%判為陰性(-)；若陽性細(xì)胞在11%～30%則判為弱陽性(+)；若陽性細(xì)胞在31%～70%判為陽性()，若陽性細(xì)胞>70%判為強(qiáng)陽性()，陽性表達(dá)率=〔(+)例數(shù)+()例數(shù)+()例數(shù)〕/總例數(shù)×100%。ER陽性著色為細(xì)胞核呈棕黃色，由于ER陽性細(xì)胞少，均以同種細(xì)胞中ER陽性率表示染色情況。以乳腺癌作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。Collagen I陽性著色為胞質(zhì)呈黃色，利用圖像分析儀測量其灰度值。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料三組比較采用單因素方差分析，采用Spearman相關(guān)性分析研究ER、TGF-β1、Collagen Ⅰ的相關(guān)性。

2 結(jié) 果

2.1三組TGF-β1、ER陽性率比較 SUI組TGF-β1陽性率為22.00%(44例)，且均為+；POP組TGF-β1陽性率為18.00%(9例)，且均為+；對照組TGF-β1陽性率92.00%，+11例，22例，13例。SUI組、POP組TGF-β1陽性率低于對照組(P<0.05)，SUI組和POP組之間TGF-β1陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。SUI組、POP組、對照組的ER陽性率分別為0.50%(1/200)、2.00%(1/50)、4.00%(2/50)，SUI組、POP組ER陽性率低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.014，2.810；P=0.014，0.032)，SUI組和POP組之間ER陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.862，P=0.089)。

2.2三組Collagen Ⅰ灰度值比較 SUI組、POP組及對照組的Collagen Ⅰ灰度值分別為(96.36±0.31)、(98.61±0.40)、(101.14±0.24)，SUI組、POP組的Collagen Ⅰ灰度值低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.151，3.742，P=0.015，0.023)，而SUI組和POP組之間的Collagen Ⅰ灰度值比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.018，P=0.083)。

2.3ER與Collagen Ⅰ相關(guān)性分析 ER與Collagen Ⅰ表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.267，P=0.028)。

3 討 論

SUI是泌尿外科常見的老年性疾病，同時(shí)常合并POP〔7〕。國際尿控協(xié)會(ICS)將SUI定義為一種在進(jìn)行大笑、咳嗽、噴嚏或提重物等腹壓增高活動時(shí)出現(xiàn)不自主的尿液溢出的疾病〔8〕。SUI雖然不會對患者的生命構(gòu)成威脅，但會對患者日?；顒釉斐蓢?yán)重的影響，并可導(dǎo)致患者出現(xiàn)抑郁、焦慮、自尊感下降等心理疾病。女性盆底主要由封閉骨盆出口的肌肉和筋膜組成，當(dāng)尿道支持系統(tǒng)及括約肌關(guān)閉系統(tǒng)異常時(shí)將會出現(xiàn)控尿問題，同時(shí)完整的下尿路神經(jīng)纖維支配也對控制排尿有重要的作用，因此SUI患者常伴有膀胱括約肌或神經(jīng)功能受損〔9〕。絕經(jīng)后的女性SUI發(fā)生率明顯高于未絕經(jīng)的女性，這提示SUI的發(fā)生與雌激素及其受體ER有關(guān)〔10〕。相關(guān)研究結(jié)果顯示〔11〕，SUI女性患者的盆底支持組織膠原蛋白含量明顯降低，使得盆底支持組織出現(xiàn)彈性下降，盆底肌收縮功能異常，出現(xiàn)盆底松弛。TGF-β1是一種關(guān)鍵性的生長因子，可抑制膠原酶等金屬蛋白酶的分泌，同時(shí)增加金屬蛋白酶抑制劑的活性，進(jìn)而抑制膠原降解。因此，TGF-β1水平可直接影響盆底支持組織的功能，進(jìn)而影響SUI發(fā)生與發(fā)展〔12〕。

本研究結(jié)果顯示，SUI和POP的發(fā)生或與TGF-β1、ER含量降低有關(guān)。對上述結(jié)果進(jìn)行分析，雌激素通過與ER發(fā)生作用，能改善盆底血液循環(huán)、促進(jìn)盆底組織修復(fù)、增加盆底肌力等。中老年女性由于卵巢功能減退，導(dǎo)致雌激素含量降低，出現(xiàn)盆底血供減少，陰道黏膜上皮退化，盆底肌肉組織退化萎縮，尿道上皮萎縮，黏膜下血管減少，上述變化綜合導(dǎo)致尿道閉合障礙，進(jìn)而發(fā)生SUI〔13〕?？到ㄆ嫉取?4〕的研究表明，妊娠晚期SUI患者孕激素受體(PR)和ER的含量低于無尿失禁者，這與本研究結(jié)果類似，同時(shí)也說明PR的含量也與SUI有關(guān)。TGF-β1隸屬具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和分化能力的TGF-β家屬，能促進(jìn)膠原合成，增加以膠原為主的間質(zhì)蛋白質(zhì)合成，并且可以影響平滑肌中Smad2及基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)，從多個(gè)方面影響盆底組織的功能〔15〕。SUI患者盆底組織中的TGF-β1含量降低，可導(dǎo)致盆底組織中的總膠原蛋白含量降低，出現(xiàn)盆底組織松弛，無法維持正常尿道閉合壓，出現(xiàn)尿失禁〔16〕。本文結(jié)果說明SUI患者盆底組織的Collagen Ⅰ含量較低，筋膜、皮膚、肌鍵、韌帶中均富含Collagen Ⅰ，膠原的總含量、構(gòu)成可影響盆底結(jié)締組織的張力和松弛性，進(jìn)而影響到尿道閉合功能。因此，SUI的發(fā)生與Collagen I含量降低有直接的關(guān)系。本研究結(jié)果說明二者存在一定的聯(lián)系，通過協(xié)同作用影響SUI的發(fā)生與發(fā)展，但其聯(lián)系的內(nèi)在機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

4 參考文獻(xiàn)

1鄒艷芬，洪 莉，譚愛麗，等.不同治療方式對產(chǎn)后壓力性尿失禁的療效評估〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2016；16(32)：6256-60.

2楊冬來，艾 浩.絕經(jīng)后壓力性尿失禁患者盆底肌電圖特征研究〔J〕.實(shí)用婦產(chǎn)科雜志，2016；32(8)：589-92.

3鄭文力，鄭斌嬌，陳雙忠，等.妊娠期壓力性尿失禁與雌、孕激素受體表達(dá)的相關(guān)性分析〔J〕.中國婦幼保健，2016；31(11)：2268-70.

4高 亮，陳 默，岳 萍，等.溫針灸對膝骨關(guān)節(jié)炎兔膝關(guān)節(jié)軟骨轉(zhuǎn)化生長因子β1和胰島素生長因子Ⅰ水平的影響〔J〕.針刺研究，2015；40(3)：229-32.

5Tang J，Liu C，Min J，etal.Potential therapeutic role of punicalagin against mechanical-trauma-induced stress urinary incontinence via upregulation of Nrf2 and TGF-β1 signaling：Effect of punicalagin on mechanical trauma induced SUI〔J〕.Int Urogynecol J，2017；28(6)：947-55.

6楊 欣，談 誠，安 方，等.尿動力學(xué)檢查與陰道前壁重度脫垂患者手術(shù)前后膀胱過度活動癥癥狀關(guān)系的前瞻性研究〔J〕.中華婦產(chǎn)科雜志，2014；49(11)：829-33.

8羅曉梅，駱迎春，楊 靜，等.仿生物理治療聯(lián)合補(bǔ)中益氣丸對子宮全切術(shù)患者盆底功能康復(fù)效果的影響〔J〕.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2015；24(20)：2171-3，2178.

9戴 星.生物反饋治療絕經(jīng)后婦女壓力性尿失禁的效果〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2016；36(24)：6214-5.

10劉 娟，曾 潔，王海蘭，等.生物反饋盆底肌訓(xùn)練治療壓力性尿失禁的療效分析〔J〕.中華婦產(chǎn)科雜志，2014；49(10)：754-7.

11盧燕燕，蔣美萍.多種因素對女性壓力性尿失禁的影響研究〔J〕.中國婦幼保健，2014；29(17)：2705-7.

12張旭勇，夏 杰，楊 濤，等.TGFβR Ⅰ和TGFβR Ⅱ在肝細(xì)粒棘球蚴外囊壁中的表達(dá)〔J〕.醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2016；29(1)：66-9.

13姜 麗，王霞紅，吳氫凱，等.妊娠期發(fā)生盆底功能障礙的影響因素分析〔J〕.國際婦產(chǎn)科學(xué)雜志，2014；41(2)：204-6.

14康建萍，沈 霞，耿茂林，等.雌、孕激素相關(guān)受體表達(dá)和松弛素水平與妊娠晚期壓力性尿失禁相關(guān)性研究〔J〕.中國婦幼保健，2016；31(11)：2285-7.

15Sj?str?m M，Umefjord G，Stenlund H，etal.Internet-based treatment of stress urinary incontinence：1-and 2-year results of a randomized controlled trial with a focus on pelvic floor muscle training〔J〕.BJU Int，2015；116(6)：955-64.

16馬雙玲，王魯文，馬學(xué)玲，等.TGF-β1/CTGF信號傳導(dǎo)通路在女性壓力性尿失禁發(fā)生中的研究〔J〕.中國婦幼保健，2014；29(11)：1763-6.