吳迎春 呂 剛 依力潘·凱賽爾 孫 輝

(新疆醫(yī)科大學附屬中醫(yī)醫(yī)院骨一科，新疆 烏魯木齊 830000)

研究發(fā)現(xiàn)，遺傳學因素在骨性關節(jié)炎發(fā)病中起到重要作用，白細胞介素(IL)-6、生長分化因子(GDF)-5等多種細胞因子的基因多態(tài)性與其易感性相關〔1〕。近年研究發(fā)現(xiàn)，IL-17在骨性關節(jié)炎發(fā)生、發(fā)展中具有重要影響〔2〕；通過微衛(wèi)星分析顯示，其易感基因位于染色體7p-13.4-q14，而IL-17A與IL-17F基因也位于該染色體位點〔3〕。IL-17A與IL-17F基因在遺傳性學上具有較高的相似性，兩者均表達多種趨化因子、細胞因子，提示其可能在調(diào)控作用方面具有重疊性〔4〕。本研究采用等位基因聚合酶鏈反應-單鏈構(gòu)型多態(tài)性(PCR-sscp)檢測骨性關節(jié)炎患者外周血IL-17A G-289A(rs3386824)和IL-17F T-8599(rs874891)基因多態(tài)性，探討IL-17基因多態(tài)性與新疆地區(qū)老年人群骨性關節(jié)炎易感性的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2012年1月至2017年1月在新疆醫(yī)科大學附屬中醫(yī)醫(yī)院骨科行全膝關節(jié)置換術的膝關節(jié)骨性關節(jié)炎患者400例為骨性關節(jié)炎組。均符合膝關節(jié)終末期骨性關節(jié)炎診斷標準；排除合并糖尿病、其他慢性炎癥性疾病、腫瘤、感染及有糖皮質(zhì)激素治療史的患者。另取年齡、性別相匹配的健康志愿者260例為健康對照組。骨性關節(jié)炎組中男198例，女202例；年齡57～75〔平均(68.91±5.17)〕歲。對照組中男125例，女135例；年齡58～77〔平均(69.17±4.85)〕歲。兩組性別構(gòu)成比、年齡比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本次研究已通過該院倫理委員會審批，入選對象均簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1基因組DNA提取 收取兩組對象外周靜脈血4 ml，3 000 r/min離心，靜置10 min，收集Buffy層的白細胞聚團，使用QIAGEN DNA血液微型試劑盒(北京諾博萊德科技有限公司)提取基因組DNA。分光光度法獲取DNA的純度和濃度。

1.2.2PCR-sscp檢測 檢測基因組DNA中的IL-17A、IL-17F基因型。IL-17A(rs3386824)的引物序列：正義鏈5′-TTGTTCATTCTTACTTTTCTCCTGTACCA-3′，反義鏈5′-GGGGGTTACTCCAGTATCTTCTTAGTTC-3′。IL-17F T-8599(rs874891)的引物序列：正義鏈5′-CACATCCTTGAACCCGACGTAGTTAG-3′，反義鏈5′-TCACCTATACGTGGAGAATGACGTGT-3′。反應體系含cDNA 1 μl、引物1 μmol/L、dNTP 0.5 μmol/L、MgSO42 mmol/L，蒸餾水增加至10 μl，進行標準PCR擴增步驟。對混合反應物進行變性處理，共40個循環(huán)(95℃ 40 s變性，60℃ 30 s退火，72℃ 40 s延伸)，之后在72℃ 5 min最終擴增。將產(chǎn)物轉(zhuǎn)入含甲酰胺/NaOH(1∶1)標本緩沖液中95℃變性5 min，將變性產(chǎn)物加入含200 g/L甘油的sscp凝膠(上海超研生物科技有限公司)中，電泳產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到Whatman濾紙上干燥，進行射線拍照，使用分析儀進行PCR產(chǎn)物測序。

1.3統(tǒng)計學方法 應用SPSS15.0軟件，計數(shù)資料進行χ2檢驗，對組間差異有統(tǒng)計學意義的資料計算OR值和95%可信區(qū)間(CI)；基因頻率在人群中分布情況進行Hardy-Weinberg(H-W)定律檢驗。

2 結(jié) 果

2.1IL-17A G-289A(rs3386824)基因多態(tài)性的基因型及等位基因分布情況 骨性關節(jié)炎組各基因型及等位基因分布頻率與健康對照組之間差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，見表1。IL-17A G-289A基因型OR值分別為，AA：1.000(95%CI=1.000)，AG：1.873(95%CI=0.718～1.125)，GG：1.368(95%CI0.956～1.748)；IL-17A G-289A等位基因OR值分別為，A：1.714(95%CI=0.688～0.942)，G：1.358(95%CI=1.225～1.483)對基因頻率在人群中分布情況進行H-W定律檢驗顯示，骨性關節(jié)炎組基因遺傳不平衡(P=0.000)，健康對照組基因遺傳平衡(P=0.358)。

2.2不同性別IL-17A G-289A(rs3386824)基因多態(tài)性的基因型分布情況 根據(jù)受試者性別進一步分層分析，結(jié)果顯示，骨性關節(jié)炎組與健康對照組的IL-17A G-289A基因多態(tài)性分布差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表1 IL-17A G-289A(rs3386824)基因型及等位基因分布情況〔n(%)〕

與健康對照組比較：1)P<0.01；下表同

2.3不同年齡段IL-17A G-289A(rs3386824)基因多態(tài)性的基因型分布情況 低年齡組中骨性關節(jié)炎組與健康對照組IL-17A G-289A基因型分布差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；高年齡組中骨性關節(jié)炎組與健康對照組基因型分布差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，其中OR值分別為，AA：1.000(95%CI=1.000)，AG：1.152(95%CI=0.845～1.418)，GG：1.957(95%CI=0.683～1.386)。見表3。

表2 不同性別IL-17A G-289A(rs3386824)基因型分布情況〔n(%)〕

表3 不同年齡段IL-17A G-289A(rs3386824)基因型分布情況〔n(%)〕

2.4IL-17F T-8599(rs874891)基因多態(tài)性的基因型及等位基因分布情況 骨性關節(jié)炎組各基因型及其等位基因分布頻率與健康對照組之間差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表4。H-W定律檢驗顯示，骨性關節(jié)炎組與健康對照組基因遺傳不平衡(P=0.000，0.005)。

表4 IL-17F T-8599基因型及等位基因分布情況〔n(%)〕

3 討 論

骨性關節(jié)炎是老年人群常見病之一，病因仍未明確。研究已發(fā)現(xiàn)骨性關節(jié)炎是一種復雜的關節(jié)軟骨和滑膜的炎性疾病，炎性因子影響了軟骨細胞的合成與代謝，在病情發(fā)展中起到重要的調(diào)控作用〔5〕。相關研究發(fā)現(xiàn)，體內(nèi)IL-17A水平增加可引發(fā)關節(jié)軟骨退行性病變，其在T細胞相關炎性反應中發(fā)揮關鍵作用，可誘發(fā)基質(zhì)細胞分泌多種生長因子和炎性細胞因子，促進軟骨退變、抑制軟骨修復〔6〕。近年來研究發(fā)現(xiàn)，IL-17A可上調(diào)骨性關節(jié)炎軟骨中一氧化氮(NO)、NO合酶(NOS)表達水平，誘發(fā)滑膜細胞、軟骨細胞分泌IL-6、IL-1β等多種促炎細胞因子〔7〕；而在趨化反應中IL-17A上升水平是IL-17F的5倍〔8〕，且攜帶289A等位基因的健康人群T細胞受刺激生成的IL-17水平明顯高于未攜帶289A等位基因的人群；同時，與289G等位基因相比，289A等位基因可刺激T細胞產(chǎn)生更高的蟲熒光色酶活性〔9〕。

本研究結(jié)果提示新疆地區(qū)老年人群中IL-17A G-289A多態(tài)性與骨性關節(jié)炎易感性相關，陽性位點rs3386824等位基因G/A、G/G為骨性關節(jié)炎的高風險因素，而A/A為低風險因素，對該位點的等位基因進行篩查可用于65歲以上人群骨性關節(jié)炎患病風險的監(jiān)測。

4 參考文獻

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