陳曉斐 徐志豪 董大鵬

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院呼吸內(nèi)科，浙江 杭州 310009)

社區(qū)獲得性肺炎(CAP)患者的預(yù)后與多種因素相關(guān)，目前多采用肺炎嚴(yán)重指數(shù)(PSI)評(píng)分評(píng)估患者的病情及預(yù)后，但老年患者的臨床表現(xiàn)常不典型〔1〕。既往研究發(fā)現(xiàn)，老年CAP患者病變程度與炎癥反應(yīng)相關(guān)，C反應(yīng)蛋白(CRP)對(duì)患者的預(yù)后具有提示作用，但CRP為非特異性炎癥指標(biāo)，在外傷、心血管病等多種情況下均可上升〔2〕。白細(xì)胞介素(IL)-8通過(guò)與其趨化因子受體(CXCR)1及CXCR2結(jié)合啟動(dòng)中性粒細(xì)胞趨化反應(yīng)，募集白細(xì)胞，引起及加重炎癥反應(yīng)〔3〕。本研究旨在分析IL-8及其受體CXCR1、CXCR2在老年CAP患者病情及預(yù)后評(píng)估中的作用。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015年6月至2016年6月浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院收治的78例老年CAP患者，其中男52例，女26例，年齡61～82〔平均(71.1±9.0)〕歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合2006年中華醫(yī)學(xué)會(huì)《社區(qū)獲得性肺炎診斷和治療指南》標(biāo)準(zhǔn)〔4〕；(2)患者發(fā)病時(shí)均出現(xiàn)咳嗽、咳痰、發(fā)熱等呼吸道感染癥狀；(3)CT顯示患者肺部有炎癥陰影；(4)患者均自愿參與。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)嚴(yán)重心、肝、腎功能性損傷、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、患有肺部腫瘤，除外慢性肺部疾病如慢性支氣管炎及慢性阻塞性肺疾病(COPD)病史、間質(zhì)性肺炎、哮喘者；(2)合并自身免疫疾病及結(jié)締組織病合并肺部感染者；(3) 合并有精神神經(jīng)系統(tǒng)疾病，不能配合者。選取50名健康志愿者為對(duì)照組，其中男33名，女17名，年齡61～80〔平均(70.9±8.5)〕歲。兩組性別、年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2PSI評(píng)分 使用PSI評(píng)分對(duì)患癥狀進(jìn)行評(píng)價(jià)〔5〕，I級(jí)患者不需要進(jìn)行評(píng)分，Ⅱ～Ⅴ級(jí)患者根據(jù)PSI進(jìn)行評(píng)分，項(xiàng)目包括年齡、合并疾病(腫瘤、肝病、充血性心力衰竭、腦血管病及腎病)、體格檢查(神志狀態(tài)、呼吸次數(shù)、血壓、體溫及脈搏)及化驗(yàn)結(jié)果(血?dú)夥治鼋Y(jié)果、血尿素氮、血鈉、血糖、HCT及胸腔積液)。Ⅱ～Ⅲ級(jí)為低風(fēng)險(xiǎn)組(PSI評(píng)分≤90)21例，男14例，女7例，平均年齡(67.3±5.2)歲；Ⅳ級(jí)為中風(fēng)險(xiǎn)組(PSI評(píng)分91～130)34例，男23例，女11例，平均年齡(69.2±4.9)歲；Ⅴ級(jí)為高風(fēng)險(xiǎn)組(PSI評(píng)分>130)23例，男15例，女8例，平均年齡(76.4±4.3)歲。3組性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，年齡差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

1.3檢測(cè)CXCR1、CXCR2級(jí)IL-8水平 CAP組及對(duì)照組于清晨經(jīng)肘靜脈抽取空腹血10 ml，分別置2支含肝素(200 IU/ml的無(wú)菌eppendorf管和1支潔凈的eppendorf管),Perocll非連續(xù)密度梯度離心法分離中性粒細(xì)胞，普通管常規(guī)分離血清備檢。血清IL-8水平采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)，試劑盒由聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司提供(中國(guó))。制備中性粒細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞懸液(1×106/ml)，取100 μl細(xì)胞懸液加入抗人CXCR1抗體、抗人CXCR2抗體，抗體由上?，庬嵣锟萍加邢薰咎峁?，4℃避光孵育30 min，用染色緩沖液洗滌細(xì)胞2次，200 μl染色緩沖液重懸后上流式細(xì)胞儀FACSCalibur檢測(cè)，每個(gè)樣品至少收集1×104以上的細(xì)胞，數(shù)據(jù)采用儀器自帶的軟件分析處理。

1.4CXCR1、CXCR2及IL-8的mRNA水平檢測(cè) 使用RPMI1640完全培養(yǎng)液重懸中性粒細(xì)胞，以牛鮑氏計(jì)數(shù)板調(diào)濃度至1×106個(gè)/ml。移液器取細(xì)胞懸液300 μl，提取細(xì)胞總RNA。RT-PCR引物及試劑盒由賽默飛世爾(中國(guó))有限公司提供。PCR體系25 μl包括2.5 μl 10×PCR緩沖液(Mg2+)，2 μl dNTP混合物(各10 mmol/L)，0.25 μl TaqDNA聚合酶(5 U/μl)，1 μl上游引物(10 μmol/L)，1 μl上游引物(10 μmol/L)，2 μl cDNA，16.25 μl ddH2O。反應(yīng)條件 94℃變性5 min，55℃退火30 s，72℃延伸30 s，共30個(gè)循環(huán)，最后一次延伸持續(xù)5 min。取擴(kuò)增產(chǎn)物5 μl，進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠(含0.5 g/ml EB)電泳，電壓5～6 V/cm 15 min，紫外透射分析儀進(jìn)行觀察，凝膠分析系統(tǒng)掃描攝像定量分析，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)或單因素方差分析、χ2檢驗(yàn)及Pearson相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.1CAP患者PSI評(píng)分比較 低、中、高風(fēng)險(xiǎn)組PSI評(píng)分〔(65.2±17.9)、(114.2±24.5)、(153.2±21.6)分〕差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=7.885，P<0.05)。

2.2各組血CXCR1、CXCR2及IL-8水平比較 各組IL-8、CXCR1及CXCR2水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組血IL-8、CXCR1及CXCR2水平比較

與對(duì)照組比較：1)P<0.05；下表同

2.3各組CXCR1、CXCR2及IL-8 mRNA水平比較 各組IL-8、CXCR1及CXCR2 mRNA差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 各組IL-8、CXCR1及CXCR2 mRNA水平比較

2.4PSI與CXCR1、CXCR2及IL-8的相關(guān)性 校正性別及年齡后，PSI與血CXCR1、CXCR2及IL-8水平呈正相關(guān)(r=0.413，0.395，0.304；均P<0.05)；與CXCR1、CXCR2及IL-8 mRNA呈正相關(guān)(r=0.581，0.559，0.604；均P<0.05)。

3 討 論

隨著年齡的增長(zhǎng)及免疫力的下降，老年CAP患者的癥狀、體征及影像學(xué)檢查結(jié)果常不典型。PSI是目前臨床上常用的評(píng)價(jià)CAP患者預(yù)后的方式，Ⅰ級(jí)患者年齡較輕，且未合并并發(fā)癥，不需要進(jìn)一步進(jìn)行評(píng)分；Ⅱ～Ⅲ級(jí)患者死亡風(fēng)險(xiǎn)低于3%，僅需要門診進(jìn)行觀察；Ⅳ級(jí)患者死亡風(fēng)險(xiǎn)可達(dá)9%，需要住院；Ⅴ級(jí)患者需要長(zhǎng)期院內(nèi)管理〔6〕。本研究結(jié)果提示，高齡(≥75歲)是CAP患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，患者一般狀態(tài)較差且合并疾病較多。

CXCR1及CXCR2屬于G蛋白耦聯(lián)受體，在氨基酸序列高度相似。CXCR主要表達(dá)于中性粒細(xì)胞表面，在健康人體內(nèi)表達(dá)水平較低〔7〕。IL-8為CXCR1及CXCR2的共同配體，結(jié)合受體后激活下游通路誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞及淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞游走至病變部位，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)?；罨难仔约?xì)胞分泌溶菌酶、超氧化物等，包裹及殺滅病原體，發(fā)揮抗感染作用。但在存在嚴(yán)重感染時(shí)，大量的中性粒細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子可能造成組織損傷；同時(shí)，中性粒細(xì)胞活化增加局部組織耗氧量，加重氧化應(yīng)激反應(yīng)，產(chǎn)生大量氧自由基，加重機(jī)體損傷〔8〕。既往研究中，CXCR1及CXCR2的拮抗劑能夠有效抑制LPS誘導(dǎo)小鼠肺炎模型的炎性反應(yīng)，降低死亡率〔9〕。

PSI主要臨床表現(xiàn)對(duì)CAP患者的病情及預(yù)后進(jìn)行評(píng)估，容易受到與評(píng)估者及受試者相關(guān)的多種因素的影響。IL-8及其配體能夠更為準(zhǔn)確客觀，且與PSI相關(guān)性良好，適合作為評(píng)估CAP患者預(yù)后及病情評(píng)估的輔助檢查指標(biāo)。

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