于海濤 曲義坤 于海波 趙 斌 李 晶 趙曉蓮

(佳木斯大學(xué)第一附屬醫(yī)院,黑龍江 佳木斯 154002)

一般根治性手術(shù)切除是治療直腸癌的主要手段，但手術(shù)只能切除局部腫瘤病灶，但清除不了血液里的癌細(xì)胞即殘癌，術(shù)后極容易轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。而提高直腸癌生存率的關(guān)鍵在于早期預(yù)測、早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷與早期治療〔1〕。因此，尋找有效的早期診斷標(biāo)志物是提高患者生存率的重要手段。近年來，以糖類抗原(CA)、癌胚抗原為代表的腫瘤標(biāo)志物以其高效、無創(chuàng)的特點，在直腸癌的早期診斷及術(shù)后評估中受到廣泛關(guān)注和應(yīng)用〔2〕。由腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-7具有滅活絲氨酸蛋白酶抑制劑及活化其他MMPs成員的作用。CA242 是一種黏蛋白型唾液酸化糖脂類抗原，一般多見于胰腺、卵巢、大腸組織的惡性腫瘤中，是近年來應(yīng)用于臨床較新的一種腫瘤標(biāo)志物。通常單個標(biāo)記物的敏感性或特異性往往偏低，不能滿足臨床要求，本研究聯(lián)合檢測外周血血清MMP-7、CA242的表達(dá)水平，分析其在直腸癌診斷中作用。

1 資料與方法

1.1一般資料 佳木斯大學(xué)第一附屬醫(yī)院肛腸外科2016年1～8月收治住院和門診復(fù)查的直腸癌(經(jīng)過組織病理診斷證實、術(shù)前未經(jīng)任何放化療)患者60例為病例組，病程(2.98±1.17)年，男34例、女26例，年齡35～77〔平均(53.9±13.04)〕歲，中位年齡56歲。對照組為門診體檢健康者60例，男31例、女29例，年齡33～75〔平均(54.37±14.13)〕歲，中位年齡54歲。腸鏡檢查結(jié)果無異常者，無腫瘤史，血清腫瘤標(biāo)志物在正常參考范圍內(nèi)。兩組一般臨床資料差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)并簽署了知情同意書。

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 病例組術(shù)前未經(jīng)過放療、化療等其他輔助治療，術(shù)后均經(jīng)組織病理學(xué)確診為直腸潰瘍型癌、浸潤型癌及交界性癌等(Ⅰ期9例、Ⅱ期17例、Ⅲ期23例、Ⅳ期11例)。對照組無煙酒不良嗜好，各項常規(guī)檢查心電圖(ECG)、血、尿常規(guī)、肝腎功能、腹部B超等均正常，排除其他系統(tǒng)惡性腫瘤、糖尿病及精神神經(jīng)系統(tǒng)疾病，能夠配合研究者。

1.3標(biāo)本采集及檢測 兩組晨起空腹(隔夜空腹8 h以上)肘靜脈采非抗凝血5 ml裝于真空試管中，室溫下離心10 min(3 000 r/min)，抽取上層血清，-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｑ錗MP-7檢測用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，以放射免疫分析法檢測血清CA242，并嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行所有操作。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行t、χ2檢驗和方差分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清CA242、MMP-7水平比較 血清CA242、MMP-7水平病例組明顯高于對照組(P<0.05)，見表1。

2.2血清CA242、MMP-7診斷直腸癌的敏感度、特性度及準(zhǔn)確性 兩指標(biāo)聯(lián)合檢測可顯著提高直腸癌的診斷效能和敏感性(P<0.05)，見表2。

2.3直腸癌患者不同病理分期CA242、MMP-7水平比較 血清CA242、MMP-7水平均表現(xiàn)為Ⅳ期>Ⅲ期>Ⅱ期>Ⅰ期，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P<0.05)，見表3。

表1 兩組血清CA242、MMP-7水平比較

表2 血清CA242、MMP-7診斷直腸癌的敏感度、特異度及準(zhǔn)確性(%)

與聯(lián)合檢測比較：1)P<0.05

表3 直腸癌患者不同病理分期CA242、MMP-7水平比較

3 討 論

根據(jù)腫瘤標(biāo)志物生化或免疫特性可以識別或診斷腫瘤。腫瘤標(biāo)志物存在于腫瘤患者的組織、體液和排泄物中，能夠用免疫學(xué)、生物學(xué)及化學(xué)的方法檢測到。通常單個標(biāo)記物的特異性或敏感性普遍偏低，因而在實踐上和理論上都建議兩種或以上標(biāo)志物一次同時測定，借以提高對腫瘤診斷的特異性和敏感性?！?，4〕。

目前直腸癌的治療模式為多學(xué)科綜合治療模式，即從單純的手術(shù)切除轉(zhuǎn)變?yōu)橐允中g(shù)為主，聯(lián)合放、化療和靶向治療〔5〕。腫瘤發(fā)生時，其血清中一些標(biāo)志物會不同程度地升高，可能是由于腫瘤細(xì)胞中糖蛋白、脂蛋白等表達(dá)異常造成的〔6〕。腫瘤標(biāo)志物在腫瘤的診斷中，尤其是早期診斷中有著重要價值〔7〕。

多數(shù)情況下，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是多種因素參與、多個步驟發(fā)展的較為復(fù)雜的過程，而一般惡性腫瘤最重要的生物學(xué)特征就是浸潤和轉(zhuǎn)移，這兩個過程相對復(fù)雜，其機制也不是很清楚。其中，MMPs通過對基底膜在腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用及降解細(xì)胞外基質(zhì)等作用。MMP-7是由腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生并且能夠活化其他MMPs成員(一般都是以酶原形式分泌的，比如MMP-2、MMP-9等)及發(fā)揮滅活絲氨酸蛋白酶抑制劑的作用。通常MMPs家族的作用就是通過蛋白水解酶去除氨基末端而激活，從而對特定的細(xì)胞外基質(zhì)進(jìn)行消化，其催化機制依賴于鋅離子的催化結(jié)構(gòu)，它是一組鋅依賴肽鏈內(nèi)切酶。一般MMPs可以降解基質(zhì)的一種成分，可以在血管再生、傷口愈合、胚胎發(fā)育等生理過程及腫瘤、心血管疾病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中扮演重要角色。MMP-7即基質(zhì)溶素，是 MMPs 家族中分子量最小的并且以 28 kD酶原形式分泌，活性酶分子量 19 kD，定位于11號染色體 q21。其具有廣泛的底物特異性和高度蛋白溶解能力及消化特定細(xì)胞外基質(zhì)的作用，同時參與腫瘤新生血管的形成、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、周圍浸潤等過程〔8〕，其在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮雙重作用(具有血管生成和抗血管生成的作用)。本研究提示，直腸癌時糖蛋白、脂蛋白等表達(dá)異常，從而使MMP-7不同程度地升高；說明MMP-7可用于對直腸癌的診斷。

CA242是近年來應(yīng)用于臨床較新的一種腫瘤標(biāo)志物，其對大腸癌的敏感性可達(dá)60%～72%；也是一種唾液酸化的鞘糖脂抗原，和CA50共同表達(dá)；其生化本質(zhì)為唾液酸化的糖類結(jié)構(gòu)，屬于黏蛋白。在正常胰腺、結(jié)腸黏膜中存在，但表達(dá)極低。黏蛋白型CA也是一種糖蛋白，多數(shù)對腫瘤診斷價值較高的血清標(biāo)志物是分泌入血液循環(huán)中的黏蛋白。腫瘤標(biāo)志物水平與腫瘤負(fù)荷有關(guān)，隨病情加重、臨床分期升高、腫瘤體積增大，腫瘤標(biāo)志物水平增高。直腸癌發(fā)生時，血清CA242升高的原因可能是由于CA242逸入癌灶周圍的基質(zhì)中，進(jìn)而流入血液中造成的。CA242對直腸癌的早期診斷及臨床預(yù)后判定具有參考價值，可評價直腸癌治療效果和疾病進(jìn)展〔9〕。本研究發(fā)現(xiàn)MMP-2、CA242聯(lián)合檢測對直腸癌診斷的準(zhǔn)確性、特異性、敏感度明顯均優(yōu)于各自單項檢測。這就充分證明二者聯(lián)合檢測可以提高腫瘤的篩選、診斷的靈敏性和有效性。

4 參考文獻(xiàn)

1李元青，孫 紅.替吉奧單藥三線治療老年晚期胰腺癌 1 例報道〔J〕.實用腫瘤雜志，2014；29(1)：90-2.

2朱洪權(quán)，李 琳，徐傳和，等.聯(lián)合檢測血清 CA19-9，CA242，CEA 對胰腺癌的診斷價值〔J〕.中國實驗診斷學(xué)，2015；19(12)：2060-2.

3王傳新.腫瘤標(biāo)志物的臨床應(yīng)用與研究進(jìn)展〔J〕.中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2014；17(9)：641-4.

4張海英.血清腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測在常見惡性腫瘤篩查中的應(yīng)用價值〔J〕.中國實驗診斷學(xué)，2014；18(8)：1352-4.

5汪建平.中國結(jié)直腸癌治療現(xiàn)狀-進(jìn)步與局限并存〔J〕.中華胃腸外科雜志，2012；15(10)：989-92.

6李 策，聶彩輝，張力君，等.腫瘤標(biāo)志物的應(yīng)用及其篩選技術(shù)研究進(jìn)展〔J〕.藥學(xué)進(jìn)展，2014；38(1)：1-13.

7王柳倩，馬 為.腫瘤標(biāo)志物在肺癌的早期診斷及預(yù)后評估中的研究進(jìn)展〔J〕.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2014；22(12)：3004-7.

8張平峰，蔡 軍，吳安濤，等.MMP-7在腫瘤中的研究進(jìn)展〔J〕.實用臨床醫(yī)學(xué)，2014；15(2)：131-3.

9孔祥旭.直腸癌術(shù)前放化療的臨床研究進(jìn)展〔J〕.臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)雜志，2017；4(50)：9886-7.