孟尚文，鄭建云

乳腺癌是女性常見(jiàn)惡性腫瘤，近年其發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，嚴(yán)重影響女性健康。上皮細(xì)胞間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化與乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[1]，而異常增殖激活的Hedgehog-Gli信號(hào)通路對(duì)于上皮細(xì)胞間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化非常重要，能夠?qū)е履[瘤的發(fā)生、發(fā)展。該通路由配體蛋白、跨膜蛋白、下游轉(zhuǎn)錄因子Gli組成[2]。脊椎動(dòng)物存在3種Gli，其中Gli1是一種活性很強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄激活因子，其表達(dá)能夠直接反映通路的活性狀態(tài)[3]。本研究旨在探討Gli1在乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用及病理學(xué)意義，為研究乳腺癌提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 病例資料 西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院2010年1月～2016年1月采取根治性腋窩淋巴結(jié)切除術(shù)的女性乳腺癌患者共566例，隨機(jī)選取其中191例的病例資料進(jìn)行回顧性分析，年齡25～75（55.3±6.5）歲。均完整實(shí)施腫瘤切除和腋窩淋巴結(jié)清掃，術(shù)后切除的淋巴結(jié)組織標(biāo)本送病理學(xué)檢查。

1.2 Gli1蛋白免疫組織化學(xué)染色 送檢病理標(biāo)本通過(guò)固定-包埋-切片-脫蠟-水化-修復(fù)-阻酶-封閉-富裕-顯色-復(fù)染-脫水-透明-封片等步驟，進(jìn)行Gli1蛋白免疫組織化學(xué)染色。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果通過(guò)雙盲評(píng)分法進(jìn)行評(píng)分。在高倍視野（×400）下，隨機(jī)選取5個(gè)視野，分別統(tǒng)計(jì)陽(yáng)性染色細(xì)胞所占百分比和著色強(qiáng)度。著色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：由淺至深無(wú)色、淺黃色、黃色、棕黃色分別記 0、1、2、3 分；陽(yáng)性染色細(xì)胞所占百分比評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：由少到多0、0%～10%、11%～50%、51%～80%、＞80%分別記 0、1、2、3、4分?？偡?著色強(qiáng)度評(píng)分×百分比評(píng)分?？偡郑?分為Gli1蛋白染色陰性，≥6分為陽(yáng)性。

1.3 方法 統(tǒng)計(jì)Gli1蛋白免疫組化染色結(jié)果，分析腫瘤病理特征與Gli1表達(dá)的關(guān)系，以及淋巴結(jié)跳躍式轉(zhuǎn)移與病理特征的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SAS 9.0軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用例和百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)；采用Logistic回歸分析進(jìn)行多因素分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Gli1蛋白免疫組化染色結(jié)果 191例中，淋巴結(jié)組織中Gli1陽(yáng)性表達(dá)率為21.47%（41/191）。陽(yáng)性染色呈棕黃色顆粒，染色部位位于細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)。

2.2 Gli1陽(yáng)性表達(dá)與病理特征的關(guān)系 Gli1陽(yáng)性表達(dá)與患者年齡、是否絕經(jīng)、原發(fā)腫瘤分期、腫瘤位置、區(qū)域淋巴結(jié)分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、分子分型等無(wú)關(guān)，但Gli1表達(dá)陽(yáng)性組的ER、BRCA1、E-cadherin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率均顯著低于Gli1陰性組（P ＜ 0.01）。 見(jiàn)表 1。

2.3 淋巴結(jié)跳躍式轉(zhuǎn)移與病理特征的相關(guān)性 腫瘤大小、區(qū)域淋巴結(jié)分期、TNM分期、Gli1表達(dá)、乳腺癌分子分型均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方式有一定相關(guān)性。跳躍式轉(zhuǎn)移組腫瘤明顯小于正常順序轉(zhuǎn)移組，區(qū)域淋巴結(jié)分期N0-1、TNM分期Ⅰ+Ⅱ期患者比率明顯高于正常順序轉(zhuǎn)移組，Gli1表達(dá)陽(yáng)性比率明顯高于正常順序轉(zhuǎn)移組，乳腺癌分子分型Luminal A型比率均明顯低于正常順序轉(zhuǎn)移組（P＜0.05～P＜0.01）。見(jiàn)表2。

????????????????? ? ? ? ? ????? ??? ??? ??? ?? ?!!??"? ???#??? ??? ?$? ??? ? ?%&’(?)*?? ? $ $?+? $?? ? ??+? ??? ? ,? ???-.???/0?1?? ? ? ? ? ?2?-?? ??? ??? ??? ?? ?????,? ???2?? ??? ??? ??? ? ?2$? ?!? ?!? ??? ? ?32 4/0?1?? ? ? ? ? ?567? ??? ??? ??? ?? ?!???,? ???869? ??? ?!? ??? ? ?:;? ? ? ? ? ??@? ??? ??? ??? $? ?????,? ???A@? !?? ?!? ??? ? ?/B/C?1?? ? ? ? ? ?DE*C? ??? ??? ??? ? ?OAC? ??? ??? ??? ? ??

???????????? ??? ????????n??????????????n??????????????? ???? ??? ??? ?????????????????? ??? ??? ? ?!"#? !? ??? ?$? ?????????????????? ??? ? ?%&’(?)? *?? ??? ??? ??????????????*?? ??? ??? ? ??*?? ??? ??? ? ?’(+,? -./0? ??? ??? ??????????????-1/0? ??? ??? ? ??2./0? ??? ??? ? ??21/0? ??? ??? ? ??34? ??? ??? ? ?56? ???? $?? ??? ???????7????????? ??? ??? ? ?86? ??? ??? ??? ????????????????? ??? ??? ? ?8??? ??? $?? ??? ????$???????????? ???? ??? ? ?96:;?? ??? ???? ??? ??$$???7????????? ???? ??? ? ??@AB?C? ??? ?$?? ??? $??????7????????? ???? ??? ? ?DEFGH?)?I?? ???? ??? ??????????????I?? ???? ??? ? ??I?? ???? ?$? ? ??I?? ???? ??? ? ?*I J?)? KLM? ???? ??? ??$???????????NLO? ???? ??? ? ?FGHPQ? ??? ???? ?$? ??$?????????????? ???? ??? ? ??R?S? TUV?C>??;S? ???? ??? ??????????????TUV?C>??9?WAB-?X?S? ???? ??? ? ??TUV?C>??9?WAB-?L?S? ???? ??? ? ??WAB-?YZ[S? ???? ??? ? ???S? ???? ??? ? ?

多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，Gli1陽(yáng)性表達(dá)（OR=20.122，95%CI=4.712，P ＜ 0.01）及區(qū)域淋巴結(jié)分期（OR=0.312，95%CI=0.148，P ＜ 0.05）是影響乳腺癌腋窩淋巴結(jié)跳躍式轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

3 討論

乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移與上皮細(xì)胞間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化（EMT）密切相關(guān)，E-cadherin表達(dá)下調(diào)是EMT最重要的標(biāo)志[4]。本研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織中Gli1的表達(dá)與E-cadherin有明顯相關(guān)性，Gli1表達(dá)陽(yáng)性組 E-cadherin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯低于Gli1陰性組。提示Gli1表達(dá)陽(yáng)性可導(dǎo)致E-cadherin的表達(dá)下調(diào)，這可能是Gli1導(dǎo)致乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移能力得到增強(qiáng)的一個(gè)重要機(jī)制。本研究發(fā)現(xiàn)，Gli1表達(dá)陽(yáng)性組ER蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于Gli1陰性組，提示Gli1的高表達(dá)與ER陰性表達(dá)密切相關(guān)，這可能也是Gli1調(diào)控乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要機(jī)制，與Boelens等[5]的研究結(jié)果一致。本研究還發(fā)現(xiàn)，Gli1表達(dá)陽(yáng)性組BRCA1蛋白（抑癌基因）表達(dá)陽(yáng)性率明顯低于Gli1陰性組，進(jìn)一步證實(shí)了Gli1促進(jìn)乳腺癌發(fā)生的病理生理作用。

乳腺癌腋窩淋巴結(jié)跳躍式轉(zhuǎn)移現(xiàn)象的原因目前尚不完全清楚，本研究結(jié)果顯示，腫瘤大小、區(qū)域淋巴結(jié)分期、TNM分期、Gli1表達(dá)、乳腺癌分子分型均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方式有一定相關(guān)性。多因素分析結(jié)果顯示，區(qū)域淋巴結(jié)分期和Gli1的陽(yáng)性表達(dá)是影響乳腺癌腋窩淋巴結(jié)跳躍式轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。這將為臨床評(píng)估乳腺癌患者腋窩淋巴結(jié)狀態(tài)提供新的檢測(cè)目標(biāo)。

綜上所述，Gli1表達(dá)陽(yáng)性可增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力，且Gli1是影響乳腺癌腋窩淋巴結(jié)跳躍式轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。因此，Gli1可能作為預(yù)測(cè)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的指標(biāo)，為降低乳腺癌患者淋巴轉(zhuǎn)移提供治療靶點(diǎn)。