張中華，趙亞蘭

甘肅省中醫(yī)院藥學部，甘肅 蘭州 730050

黃連為毛茛科植物黃連(Coptis.chinensis Franch.)、三角葉黃連(Copfis.deltoidea C.Y.Chenget Hsiao)或云連(Coptis.teeta wall)的干燥根莖，作為中藥始載于東漢《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品［1］。其性寒味苦，可清熱燥濕，瀉火解毒?！睹t(yī)別錄》記載黃連可“止消渴”；《本草綱目》也有“治消渴，用酒蒸黃連”的記載。而黃連苦寒能瀉上、中、下三焦之火，火去則津液無煎，消渴自止。黃連苦寒，善清心火，火去則不吸爍真陰，腎水得復，況黃連苦寒亦可厚腸胃以堅陰，故消渴者，黃連何畏［2］。黃連為我國傳統(tǒng)中草藥，有著長期的藥用歷史以及豐富的民間用藥經(jīng)驗，它含小檗堿、黃連堿、甲基黃連堿、巴馬亭，藥根堿等多種生物堿，并含黃酮(已發(fā)現(xiàn)的苷元有槲皮素與金合歡素)、黃柏內(nèi)酯等［3］。有學者研究表明，從黃連中提取的小檗堿、黃連堿、巴馬亭以及黃連的醇提取物均能有效地促進5-氟尿嘧啶的透皮吸收，增加極性藥物在皮膚中的濃度，與表面活性劑一樣具有增加皮膚滲透性的作用［4］。天然透皮吸收促進劑以起效快、效果好、副作用小等優(yōu)點，正日益引起人們的重視。因此，從天然產(chǎn)物中尋找透皮吸收促進劑，具有廣闊的應(yīng)用前景［5］。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 UV-1800PC型紫外分光光度計；BT 125D分析天平(感量0.01 mg)；JY4001型電子秤(上海精科天平儀器廠)；PTHW型調(diào)溫電熱套(2000ML，420 W鞏義市予華儀器有限責任公司)；通一牌DW 1 000 ML型套式調(diào)溫電熱套(500 W江蘇通州市電熱器廠)；循環(huán)水多用真空泵(SHB-3型鄭州杜甫儀器廠)；恒溫水浴鍋(金壇市大地自動儀器廠)；HC-TP11-5架盤藥物天平(感量0.5 g上海第二天平儀器廠)；SB-5200 DTD超聲波清洗機(寧波新芝生物科技股份有限公司)；CS101型電熱鼓風干燥箱(中國重慶試驗設(shè)備廠)。

1.2 試藥 黃連飲片(購自蘭州復興厚藥材有限責任公司)，甘肅中醫(yī)藥大學藥學系中藥藥劑教研室魏舒暢副教授鑒定為藥典收載品種；鹽酸小檗堿(對照品，購自中國藥品生物制品鑒定所，批號：110713-200609，鹽酸小檗堿含量98.1%)。硫酸、鹽酸、氫氧化鈣、氨水、95%乙醇，均為分析純。

2 方法與結(jié)果［2-6］

2.1 黃連提取物的制備

2.1.1 黃連總生物堿的提取 取500 g黃連粗粉，加22倍量70%乙醇回流提取3次，每次1小時，提取液回收乙醇，將稠膏在水浴鍋上濃縮至干燥；同法再提取黃連粗粉1 000 g。得干膏419.2 g，出膏率為27.9%。將干膏(提取物Ⅰ)置干燥器內(nèi)，待進一步分離純化小檗堿用。

2.1.2 黃連總生物堿的純化 取100.4 g干膏置1 000 mL燒杯內(nèi)，加10倍量0.5%H2SO4溶解，靜置，過濾，得酸水液；在酸水液中加石灰乳調(diào)PH至9，過濾，得濾液A；在濾液A中加濃鹽酸調(diào)PH至1，加入藥液量8%的氯化鈉鹽析，放置，過濾，得沉淀A與濾液B；將在沉淀A溶于1 000 mL熱水，調(diào)PH至9，趁熱過濾，在濾液中，并將沉淀水洗至中性，得母液(提取物Ⅱ)與鹽酸小檗堿粗品；在濾液B中加氨水調(diào)PH至9，放置，過濾，得沉淀，并將沉淀用乙醇重結(jié)晶，得小檗胺(提取物Ⅲ)。同法再處理200 g干膏。最后將得到的鹽酸小檗堿粗品再溶于熱水，加鹽酸調(diào)PH至3，放置，過濾，得較純鹽酸小檗堿(提取物Ⅳ)。

2.2 黃連總生物堿的含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對照品1.18mg，置于10mL容量瓶中，用0.05mol H2SO4溶解并定容至刻度，搖勻；從上述溶液中精密移取2.5 mL至10 mL容量瓶中，用0.05 mol H2SO4定容至刻度，搖勻，得對照品貯備液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿供試品7.0 mg，置于100 mL容量瓶中，用0.05 mol H2SO4溶解并定容至刻度，搖勻；從上述溶液中精密移取1.0 mL至10 mL容量瓶中，用0.05 mol H2SO4定容至刻度，搖勻。

2.2.3 測定波長的確定 取對照品儲備液與供試品溶液，以0.05 mol H2SO4為空白，波長自200～800 nm，掃描間隔為1 nm，對對照品與供試品進行最大波長掃描，在最大吸收峰處確定測定波長為264 nm，掃描圖譜見圖1。

圖1 鹽酸小檗堿對照品和供試品最大波長掃描圖譜

2.2.4 供試品的含量測定 精密稱取鹽酸小檗堿標準供試品7.0 mg，置于100 mL容量瓶中，用0.05 mol H2SO4溶解并定容至刻度，搖勻；精密量取供試品液1.0mL至10 mL容量瓶中，用0.05 molH2SO4定容至刻度，搖勻，以0.05molH2SO4硫酸為空白對照，在264nm波長處測定吸光度。

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 精密量取對照品儲備液0.2、0、0.8、1.2、1、2、3.0 mL 分別至 10 mL 容量瓶中，用0.05 mol H2SO4定容至刻度，搖勻，以0.05 mol H2SO4為空白對照，在264 nm處測定吸光度，其吸光度值見表1。

表1 對照品濃度與對應(yīng)的吸光度值

以吸光度A為縱坐標，濃度C為橫坐標，繪制標準曲線，見下圖。

線性方程為 A=79.617C-0.022，r=0.999 9，鹽酸小檗堿在0.579～8.682 μg/mL范圍內(nèi)，濃度與吸光度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.3.2 穩(wěn)定性實驗 取同一批次的供試品溶液，分別于 0﹑1、2﹑3﹑5、8 小時進樣測定，測定結(jié)果的穩(wěn)定性好，結(jié)果見表2。

表2 不同時間測定樣品中總生物堿的吸光度值

2.3.3 精密度實驗 取供試品溶液，在264 nm處重復測定其吸光度，結(jié)果表明儀器精密度良好。見表3。

表3 精密度試驗結(jié)果

2.3.4 重復性試驗 取同批供試品5份，每份取樣量依次為 13.0、9.0、8.0、7.0、7.0 mg，分別按供試品溶液制備方法操作測定，計算鹽酸小檗堿含量，結(jié)果表明試驗重復性良好。見表4。

2.3.5 加樣回收試驗 取已知含量(71.4%)的供試品7.0 mg，按供試品溶液制備項下方法操作，制備供品溶液，精密吸取5 mL，置10 mL量瓶中，精密加入鹽酸小檗堿對照品儲備液(0.0236mg/mL)1 mL用0.05 M硫酸定容至刻度，搖勻，分別測定其吸光度，結(jié)果表明回收率及RSD值可確定加樣回收率符合規(guī)定。見表5。

2.4 供試品含量測定 取不同批號的供試品，按測定法項下的方法操作并測定。供試品的測定結(jié)果表明黃連中提取的總生物堿中鹽酸小檗堿的含量為92.84%，可供透皮實驗用。見表6。

表4 重復性室驗結(jié)果

表5 回收率測定結(jié)果

表6 供試品中鹽酸小檗堿的含量測定結(jié)果

3 結(jié)論

供試品中總生物堿的純度較高，鹽酸小檗堿的含量可達92.84%。采用紫外可見分光光度法測定黃連中總生物堿的含量，在測定波長過程中可能還有其他物質(zhì)的吸收，會導致測定結(jié)果偏高［6］。

生物堿與黃酮等物質(zhì)在70%的乙醇中溶解度都較好，因此藥材粗粉用70%的乙醇提?。恍￠迚A的硫酸鹽在水中溶解度較大(1∶30)，其鹽酸鹽在水中溶解度較小(1∶500)，因此將干膏用0.5%H2SO4溶解使生物堿成硫酸鹽溶于水中。

酸水液中加石灰乳調(diào)至pH 10～12，一是吸附雜質(zhì)，二是調(diào)堿性；堿液中加鹽酸調(diào)至pH 1～2使生物堿的硫酸鹽轉(zhuǎn)變成鹽酸鹽，再加入藥液量6%～10%氯化鈉使鹽酸鹽反應(yīng)完全［7］；析出的鹽酸鹽溶于熱水，加石灰乳調(diào)至pH 8.5～9，是進一步除雜，在此堿液中加鹽酸調(diào)至pH 2～3使生物堿以鹽酸鹽的形式再次結(jié)晶析出，對其進行純化。

參考文獻

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：303-305．

［2］林漢欽，蔡培俊.淺談黃連在糖尿病治療中的作用［J］.中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育，2010，8(22)：45-46．

［3］匡海學，黃小萍，石任兵，等.中藥化學［M］.北京：中國中醫(yī)藥出版社，2008:350-352.

［4］張仲源，張惠生，張麗敏.透皮促進吸收的中藥材(三)［J］.中國外治雜志，2010，19(4):63-64.

［5］張慧，肖莉，許建辰，等.天然透皮吸收促進劑的研究進展［J］.中國藥房，2005，16(4):303-304.

［6］龔濤，孫冰.黃連提取工藝的研究［J］.中草藥，2008，29(7):446-448.