項冰倩，高 慧，郝卯林，戴雍月，王萬鐵

（溫州醫(yī)科大學缺血／再灌注損傷研究所，浙江溫州325035）

肺缺血 ／再灌注損傷（ischemia／reperfusion injury，I／RI）是肺溶栓治療、肺移植、肺切除等手術常見的病理過程。肺缺血／再灌注引發(fā)急性肺損傷的同時還可誘發(fā)遠隔器官損傷，如腦、心臟、肝及腎臟等。心臟血流量和耗氧量大，對缺血缺氧較為敏感，是較易受累的器官。肺缺血再灌注引起的缺血、缺氧可誘發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激（endoplasmic reticulum stress，ERS），內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激是指當機體發(fā)生缺血、缺氧，氧化應激，葡萄糖／營養(yǎng)物質(zhì)匱乏，異常糖基化反應和鈣離子穩(wěn)態(tài)失衡等時，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)未折疊蛋白明顯增多，當超出內(nèi)質(zhì)網(wǎng)處理能力時，細胞會激活未折疊蛋白反應、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)超負荷反應和Caspase 12介導的凋亡通路等信號途徑，來應對條件的變化和恢復內(nèi)質(zhì)網(wǎng)良好的蛋白質(zhì)折疊環(huán)境。適度的ERS可恢復細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)和維持細胞存活，但持續(xù)過強的ERS則會導致細胞凋亡甚至死亡，在缺血／再灌注損傷中起重要作用［1-3］。前期的研究結果表明，過度內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激參與了肺缺血／再灌注損傷，且抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激能減輕肺I／R損傷［1，4］，但其是否參與了肺 I／R誘發(fā)的心肌損傷目前尚未見有關報道。因此本研究在肺缺血／再灌注模型上通過使用ERS激動劑衣霉素及抑制劑4-苯丁酸來探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激在肺缺血再灌注小鼠心肌損傷中的作用，為臨床防治肺I／R引起的遠隔器官損傷提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

1.1.1 主要試劑 二甲基亞砜（dimathy sulfoxide，DMSO）（上海申工生物技術有限公司）；衣霉素（tunicamycin，TM）和 4-苯丁酸（4-phenylbutyric acid，PBA）（Sigma公司）；氯胺酮和塞拉嗪（中國福建古田藥業(yè)有限公司）；Caspase 3酶活性檢測試劑盒和BCA蛋白定量試劑盒（碧云天生物技術研究所）；TUNEL試劑盒（瑞士 Roche公司）；肌酸激酶同工酶（creatine kinase-MB，CK-MB）及乳酸脫氫酶（lactic dehydrogenase，LDH）試劑盒（南京建成生物工程研究所）；逆轉錄試劑盒（Thermo公司）；葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（glucose regulated protein 78，GRP78），c-Jun氨基末端激酶（c-JunN-terminalkinase，JNK），p-Jun氨基末端激酶（p-JunN-terminalkinase，p-JNK），天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-12（cysteinylaspartate specific proteinase 12，Caspase 12）和 CCAAT增強子結合蛋白同源蛋白（CCAAT／enhancer-binding protein homologous protein，CHOP）一抗（Cell Signaling Technology公司，美國）；辣根酶標記山羊抗兔二抗（中國博蘊）；一抗稀釋液（碧云天生物技術研究所）；PVDF膜（德國 Millipore公司）；胎牛血清（美國 Gibco公司）；脫脂奶粉（美國BD公司）。

1.1.2 主要儀器 UV-800全自動凝膠成像分析系統(tǒng)（溫州奧利生物醫(yī)學儀器廠）；光學顯微鏡（Nikon，日本尼康）；高速冷凍離心機（Thermo，美國）；全自動生化分析儀（7600-020，日本日立公司產(chǎn)品）；紫外分光光度計（Ultrospec 2100pro Amersham BioSciences，美國）；PCR熱循環(huán)儀（LifePro，杭州博日科技有限公司）；多功能酶標儀（Thermo，美國）；蛋白電泳／轉膜儀（BIO-RAD，美國）；電熱恒溫水溫箱（上海賀德試驗設備廠）；DYY-5型穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀（北京市六一儀器廠）。

1.2 動物模型與干預

1.2.1 實驗動物與模型建立 雄性健康 SPF級C57BL／6J小鼠40只，體質(zhì)量 20～24 g，8～10周齡，由溫州醫(yī)科大學實驗動物中心提供【SYXK（浙）2012-075】。依據(jù)文獻采用C57BL／6J小鼠在體左側肺門夾閉制備缺血／再灌注（I／R）模型［5］。腹腔注射 100 mg／kg氯胺酮和塞拉嗪 10 mg／kg麻醉，維持體溫36.5℃～37.5℃。消毒胸頸部皮膚后切開并分離皮下組織和肌肉，暴露氣管T型切開，氣管插管后接呼吸機行機械通氣，呼吸機參數(shù)為：吸呼比2∶3，呼吸頻率 120 counts／min，100%氧濃度，潮氣量 0.6～0.8 ml／min。于左胸部3～5肋間處開胸并游離左側肺門，用動脈夾阻斷左肺門，30 min后松開動脈夾再灌注180 min制備肺缺血再灌注模型。Sham組僅行開胸處理，不夾閉肺門，機械通氣210 min；TM組、4-PBA組分別于造模前30 min腹腔注射衣霉素1 mg／kg和 4-苯基丁酸 400 mg／kg，再制備肺缺血／再灌注模型。

1.2.2 動物分組與干預 采用隨機數(shù)字表法，將其分為 4組（n＝10）：假手術組（Sham組）、缺血／再灌注組（I／R組）、ERS通路激動劑衣霉素（Tunicamycin，TM）組，ERS通路抑制劑4-PBA組。TM組、4-PBA組分別于造模前30 min腹腔注射衣霉素1 mg／kg和4-PBA 400 mg／kg，再制備肺缺血／再灌注模型。

1.3 檢測方法

1.3.1 光鏡下心肌組織形態(tài)學觀察 開胸取出心肌組織后，取約0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm大小心肌組織，經(jīng)4%甲醛固定，常規(guī)進行石蠟包埋切片，HE染色后光鏡下觀察各組標本組織學改變。

1.3.2 心肌酶檢測 再灌注180 min時，眼眶取血，于-80℃冰箱保存。按照CK-MB及 LDH試劑盒操作說明書用全自動生化分析儀檢測血清CK-MB及LDH的濃度。

1.3.3 TUNEL法檢測心肌細胞凋亡指數(shù) 石蠟包埋心肌組織并切片，依次經(jīng)染色、二甲苯、無水乙醇、95%和75%乙醇、PBS漂洗后加入蛋白酶K溶液去除組織蛋白，蒸餾水漂洗后按照TUNEL試劑盒操作說明書進行操作，光學顯微鏡（×400）下觀察心肌細胞凋亡情況。細胞核呈現(xiàn)棕黃色者為陽性細胞，即凋亡細胞。每張切片400倍光鏡下隨機選擇10個視野并記錄總細胞數(shù)和陽性凋亡細胞數(shù)，計算凋亡指數(shù)（apoptosis index，AI），AI＝（凋亡細胞數(shù)／總細胞數(shù)）×100%。

1.3.4 Caspase 3酶活性檢測 按每3～10 mg心肌組織加入100μl裂解液的比例加入裂解液，冰上研磨成勻漿，轉移到1.5 ml離心管中冰中裂解5 min。4℃，20 000 r／min離心 10～15 min后轉移上清液，按照Caspase 3活性檢測試劑盒操作說明書進行操作，采用分光光度計法檢測心肌組織中Caspase 3酶活性。

1.3.4 Western blot分析 取心肌組織，低溫下充分研磨，400μl RIPA（含 4μl PMSF）裂解組織，混勻后取勻漿液4℃離心取上清，BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度并繪制標準曲線。將蛋白樣品制成2 μg／μl，煮沸 10 min變性。凝膠電泳，上樣量 20μl，濕轉至PVDF膜，5%脫脂奶粉室溫封閉2 h，TBST漂洗，JNK、GRP78、CHOP一抗（1∶1 000）、GAPDH、Caspase12一抗（1∶800），4℃孵育過夜。TBST洗滌 3次，每次7 min，加入二抗室溫孵育1 h。TBST洗滌3次，每次5 min，加ECL工作液反應2 min，暗室曝光，顯影、定影后，凝膠分析軟件分析蛋白吸光度值。p-JNK條帶灰度值和JNK條帶灰度值之比表示p-JNK蛋白相對含量，Caspase 12、CHOP、GRP78條帶灰度值和內(nèi)參GAPDH灰度值之比表示Caspase 12、CHOP、GRP78蛋白相對含量。

1.3.4 RT-PCR分析 取心肌組織加液氮研磨，Trizol法提取總RNA，測定RNA濃度，按照RT-PCR試劑盒說明書進行cDNA合成及擴增。PCR參數(shù)，預變性：94℃，3 min；變性：94℃，30 s；退火：JNK（56℃），Caspase 12（58℃），CHOP（54℃），GRP78（49℃），GAPDH（58℃），30 s；延伸：72℃，1 min；終止延伸：72℃，5 min；循環(huán)33次。RT-PCR以GAPDH為內(nèi)參。引物序列見表1。結果用Quantity One分析。JNK、Caspase 12、CHOP、GRP78 mRNA條帶灰度值和內(nèi)參GAPDH條帶灰度值的比值表示 JNK、Caspase 12、CHOP、GRP78 mRNA相對含量。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS19.0軟件進行分析，正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析。

Tab.1Sequences of the primers

2 結果

2.1 小鼠肺缺血／再灌注損傷后光鏡下心肌組織形態(tài)學觀察

光學顯微鏡結果顯示：Sham組心肌組織結構和細胞層次清晰可見，細胞排列整齊緊密，形態(tài)正常。I／R組心肌細胞間隙和細胞體積稍增大，胞質(zhì)疏松、淡染，水腫較明顯。TM組細胞明顯水腫，伴有部分細胞壞死。4-PBA組細胞排列尚規(guī)則，體積稍大，呈輕度水腫改變（圖1）。

Fig.1 Morphologic changes of heart tissue in each group（HE×200）

2.2 小鼠肺缺血／再灌注損傷后血清 CK-MB和LDH活性觀察

與Sham組相比，其余3組CK-MB和LDH活性均明顯升高（P＜0.01）；與 I／R組相比，TM組 CKMB和LDH活性明顯升高（P＜0.01），4-PBA組則明顯下降（P＜0.01）；與 TM組相比，4-PBA組明顯下降（P＜0.01，表 2）。

Tab.2 The change of CK-MB and LDH（U／L，±s，n＝10）

Tab.2 The change of CK-MB and LDH（U／L，±s，n＝10）

Sham：Sham group；I／R：Ischemia／reperfusion injury group；TM：Tunicamycin group；4-PBA：4-phenylbutyric acid group；CKMB：Creatine kinase-MB；LDH：Lactic dehydrogenase**P＜0.01 vs sham group；##P＜0.01 vs I／R group；△△P＜0.01 vs TM group

group CK-MB LDH Sham 526.16±30.70 1540.91±51.07 I／R 1511.02±57.44** 6252.77±63.72**TM 2254.69±66.18**##6953.00±79.87**##4-PBA 925.15±69.83**##△△ 5335.47±71.40**##△△

2.3 小鼠肺缺血／再灌注損傷后心肌細胞凋亡指數(shù)觀察

TUNEL染色結果顯示：與Sham組相比，其余3組細胞凋亡指數(shù)均明顯升高（P＜0.01）；與 I／R組相比，TM組細胞凋亡指數(shù)明顯升高（P＜0.01），4-PBA組則明顯下降（P＜0.01）；與 TM組相比，4-PBA組細胞凋亡指數(shù)明顯下降（P＜0.01，表 3，圖 2）。

Fig.2 Cell apoptosis index of heart tissue in each group（TUNEL×200）

2.4 小鼠肺缺血／再灌注損傷后心臟組織中Caspase 3酶活性觀察

Caspase 3酶活性結果顯示，與Sham組相比，其余3組Caspase 3酶活性均明顯升高（P＜0.01）；與I／R組相比，TM組Caspase 3酶活性明顯升高（P＜0.01），4-PBA組則明顯下降（P＜0.01）；與 TM組相比，4-PBA組明顯下降（P＜0.01，表 3）。

Tab.3 Change of cell apoptosis index and Caspase 3 enzymatic activity（±s，n＝10）

Tab.3 Change of cell apoptosis index and Caspase 3 enzymatic activity（±s，n＝10）

Sham：Sham group；I／R：Ischemia／reperfusion injury group；TM：Tunicamycin group；4-PBA：4-phenylbutyric acid group**P＜0.01 vs sham group；##P＜0.01 vs I／R group；△△P＜0.01 vs TM group

Caspase 3 Sham 13.05±3.40 37.74±7.16 I／R 75.85±4.49** 127.74±8.72**TM 86.63±4.24**## 220.61±14.69**##4-PBA 60.18±4.14**##△△ 83.58±8.10**##Group Apoptosis index（%）△△

2.5 小鼠肺缺血／再灌注損傷后心肌組織 JNK、Caspase 12、CHOP、GRP78 mRNA表達水平的變化

與Sham組相比，其余 3組 JNK、Caspase 12、CHOP和GRP78 mRNA表達水平均明顯升高（P＜0.01）；與 I／R組相比，TM組 JNK、Caspase 12、CHOP和GRP78 mRNA表達水平明顯升高（P＜0.01），4-PBA組則明顯下降（P＜0.01）；與 TM組相比，4-PBA組mRNA表達水平明顯下降（P＜0.01，表4）。

2.6 小鼠肺缺血／再灌注損傷后心肌組織p-JNK、Caspase 12、CHOP、GRP78蛋白表達水平的變化

與Sham組相比，其余 3組 p-JNK、Caspase 12、CHOP和GRP78蛋白表達水平均明顯升高（P＜0.01）；與 I／R組相比，TM組 p-JNK、Caspase12、CHOP和GRP78蛋白表達水平明顯升高（P＜0.01），4-PBA組則明顯下降（P＜0.01）；與 TM組相比，4-PBA組蛋白表達水平明顯下降（P＜0.01，表5）。

3 討論

I／R是臨床常見的病理過程，器官 I／R時細胞內(nèi)信號轉導涉及多條途徑，其中ERS和JNK信號轉導通路在臟器I／R中起重要作用［1］。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激發(fā)生時，ERS既能誘導GRP78、GRP94等內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶表達而產(chǎn)生保護效應，亦能獨立地誘導細胞凋亡。

Tab.4 Expression levels of JNK，Caspase 12，CHOP and GRP78 mRNA in each group（±s，n＝10）

Tab.4 Expression levels of JNK，Caspase 12，CHOP and GRP78 mRNA in each group（±s，n＝10）

Sham：Sham group；I／R：Ischemia／reperfusion injury group；TM：Tunicamycin group；4-PBA：4-phenylbutyric acid group；JNK：c-JunN-terminalkinase；Caspase 12：Cysteinylaspartate specific proteinase-12；CHOP：CCAAT／enhancer-binding protein homologous protein；GRP78：Glucose regulated protein 78**P＜0.01 vs Sham group；##P＜0.01 vs I／R group；△△P＜0.01 vs TM group

Group JNK Caspase 12 CHOP GRP78 Sham 0.14±0.04 0.15±0.05 0.16±0.05 0.14±0.05 I／R 0.48±0.06** 0.55±0.03** 0.57±0.06** 0.45±0.06**TM 0.59±0.07**## 0.69±0.06**## 0.69±0.02**## 0.58±0.06**##4-PBA 0.39±0.02**##△△ 0.44±0.07**##△△ 0.45±0.07**##△△ 0.34±0.03**##△△

Tab.5 Expression levels of p-JNK，Caspase 12，CHOP and GRP78 protein in each group（±s，n＝10）

Tab.5 Expression levels of p-JNK，Caspase 12，CHOP and GRP78 protein in each group（±s，n＝10）

Sham：Sham group；I／R：Ischemia／reperfusion injury group；TM：Tunicamycin group；4-PBA：4-phenylbutyric acid group；JNK：c-JunN-terminalkinase；Caspase 12：Cysteinylaspartate specific proteinase 12；CHOP：CCAAT／enhancer-binding protein homologous protein；GRP78：Glucose-regulated protein 78**P＜0.01 vs Sham group；##P＜0.01 vs I／R group；△△P＜0.01 vs TM group

Group p-JNK Caspase 12 CHOP GRP78 Sham 0.18±0.03 0.26±0.07 0.23±0.05 0.27±0.06 I／R 0.77±0.06** 0.74±0.04** 0.77±0.03** 0.61±0.02**TM 0.89±0.08**## 0.83±0.03**## 0.86±0.07**## 0.72±0.05**##4-PBA 0.64±0.05**##△△ 0.60±0.08**##△△ 0.67±0.04**##△△ 0.48±0.08**##△△

ERS通路激動劑衣霉素是N-乙酰葡糖胺磷酸轉移酶的抑制劑，可抑制N-蛋白質(zhì)糖基化作用的第一步催化反應，引起蛋白質(zhì)糖基化障礙，誘導未折疊蛋白積聚，導致體內(nèi)外發(fā)生廣泛的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應［6-8］。是目前體外用于誘導內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激較經(jīng)典的藥物［9，10］。ERS抑制劑 PBA是一種化學性分子伴侶，可通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激減輕非折疊蛋白反應并進一步減輕組織損傷。

本實驗中GRP78的急速上調(diào)被認為是ERS最敏感的標志物［11，12］。JNK信號通路是 ERS的凋亡途徑之一。有研究表明，在臟器I／R損傷過程中，JNK發(fā)生過度激活，而在缺血或再灌注前抑制JNK激活可明顯減少細胞凋亡，減輕臟器 I／R損傷［13-15］。Caspase 12廣泛存在于小鼠的各組織中，是ERS的主要凋亡信號分子之一，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)鈣離子平衡的失調(diào)或者內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白積累過多都會導致Caspase 12的表達。過度的ERS可引起其他Caspase家族如Caspase 9和Caspase 3的活化，引起一系列的級聯(lián)反應，最終導致細胞凋亡的發(fā)生［16，17］。CHOP是促凋亡的重要信號分子，是ERS特異的轉錄因子，在正常情況下表達水平很低，而在ERS時，其表達量大大增加，被認為是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的標志物［18］。細胞凋亡是程序性細胞死亡（programmed cell death，PCD），可被多種細胞信號激活，主要信號通路有線粒體途徑與死亡受體途徑。細胞內(nèi)的凋亡信號通常激活線粒體途徑，釋放線粒體促凋亡蛋白及凋亡誘導因子（apoptosis inducing factor，AIF）等，激活 Caspase級聯(lián)反應，誘發(fā)細胞凋亡。

本實驗光鏡結果說明肺缺血／再灌注引發(fā)了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激并造成心肌損傷，而ERS通路抑制劑4-PBA能明顯降低心肌組織損傷性因子的表達，減輕心肌組織學損傷性結構的改變，對心肌組織起到了有效的保護作用，其機制可能與抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激通路有關。鄒麓等［19］研究表明大鼠離體心肌細胞的損傷與ERS相關的凋亡密切相關，缺血后處理能減輕大鼠離體心臟缺血／再灌注損傷，可能與抑制PERK通路介導的ERS相關凋亡相關。除此之外，梁向艷等人的研究［20］亦表明血管鈉肽可減輕糖尿病大鼠缺血／再灌注心臟損傷，可能是通過cGMPPKG信號通路抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激及細胞凋亡促進心臟功能恢復。

綜上所述，過度內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激參與肺缺血／再灌注心肌損傷，抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激能減輕心肌組織損傷。

【參考文獻】

［1］ 郝卵林，趙 珊，陳海娥，等.siRNA沉默過度內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激下JNK基因在缺血／再灌注肺損傷中的作用［J］.中國應用生理學雜志，2014，30（1）：48-53.

［2］ Zhang ZZ，Tong NT，Gong YY，et al.Valproate protects the retina from endoplasmic reticulum stress-induced apoptosis after ischemia-reperfusion injury［J］.Neurosci Lett，2011，504（2）：88-92.

［3］ Yousefi H，Ahmadiasl N，Alihemmati A，et al.Effect of renal ischemian-reperfusion on lung injury and inflammatory responses in male rat［J］.Iran J Basic Med Sci，2014，17（10）：802-807.

［4］ 羅梓垠，郭長滿，項冰倩，等.右美托咪定對肺缺血／再灌注損傷小鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關分子Caspase-12表達的影響［J］.中國應用生理學雜志，2016，32（2）：164-168.

［5］ 萬占海，張 紅，冷玉芳，等.右美托咪定對大鼠肺缺血再灌注損傷的影響［J］.中華麻醉學雜志，2014，34（9）：1066-1068.

［6］ Rutkowski DT，Arnold SM，Miller CN，et al.Adaptation to ERstress is mediated by differential stabilities of prosurvival and pro-apoptotic mRNAs and proteins［J］.PLoS Biol，2006，4（11）：e374.

［7］ Rutkowski DT，Wu J，Back SH，et al.UPR pathways combine to prevent hepatic steatosis caused by ERstress-mediated suppression of transcriptional master regulators［J］.Dev Cell，2008，15（6）：829-840.

［8］ Hosoi T，Noguchi J，Takakuwa M，et al.Inhibition of inducible nitric oxide synthase and interleukin-l Bexpression by tunicamycin in cultured glial cells exposed to lipopolysaccharide［J］.Brain Res，2014，1558：11-17.

［9］ Lefterova MI，MullicanSE，Tomaru TA，et al.Endoplasmic reticulum stress regulates adipocyte resistin expression［J］.Diabetes，2009，58（8）：1879-1886.

［10］Yacoub Wasef SZ，Robinson KA，Berkaw MN，et al.Glucose，dexamethasone，and the unfolded protein response regulate TRB3 mRNA expression in 3T3-L1 adipocytes and L6 myotubes［J］.Am J Physiol Endocrinol Metab，2006，291（6）：E1274-1280.

［11］Wu H，Tang Q，Yang J，et al.Atorvastain ameliorates myocardial ischemia／reperfusion injury through attenuation of endoplasmic reticulum stress-induced apoptosis［J］.Int J Clin Exp Med，2014，7（12）：4915-4923.

［12］Ye Z，Wang N，Xia P，et al.Parecoxib suppresses CHOP and Foxol nuclear translocation，but increases GRP78 levels in a rat model of focal ischemia［J］.Neurochem Res，2013，38（4）：686-693.

［13］Bogoyevitch MA，Ngoei KR，Zhao TT，et al.c-Jun N-terminal kinase（JNK）signaling：recent advances and challenges［J］.Biochim Biophys Acta，2010，1804（3）：463-475.

［14］Ishii M，Suzuki Y，Takeshita K，et al.Inhibition of c-Jun NH2-terminal kinase activity improves ischemia／reperfusion injury in rat lungs［J］.J Immunol，2004，172（4）：2569-2577.

［15］邱曉曉，戴雍月，宋張娟，等.SP600125對大鼠肺缺血，再灌注損傷的保護作用及機制［J］.中國應用生理學雜志，2012，28（3）：255-258.

［16］ Poone GK，Hasseldam H，Munkholm N，et al.The hypothermic influence on CHOP and Erol-αin an endoplasmic reticulum stress model of cerebral ischemia［J］.Brain Sci，2015，5（2）：178-187.

［17］Lakshmanan AP，Thandavarayan RA，Palaniyandi SS，et al.Modulation of AT-1R／CHOP-JNK-Caspase12 pathway by olmesartan treatment attenuates ERstress-induced renal apoptosis in streptozotocin-induced diabetic mice［J］.Eur J Pharm Sci，2011，44（5）：627-634.

［18］Oyadomari S，Mori M.Roles of CHOP／GADD153 in endoplasmic reticulum stress［J］.Cell Death Differ，2004，11（4）：381-389.

［19］鄒 麓，吳 楠，李曉巖，等.缺血后處理抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激PE RK通路減輕大鼠離體心臟缺血／再灌注損傷［J］.解剖科學進展，2017，23（4）：370-373.

［20］梁向艷，鐵 茹，蘇菲菲，等.血管鈉肽抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激減輕糖尿病大鼠缺血／再灌注心肌損傷［J］.心臟雜志，2016，28（6）：651-655.