詹曉丹

摘要：大豆作為重要的副食品原材料、油料以及飼料原材料，其中除了含有大量的蛋白質(zhì)和油脂之外，還含有一定量的可溶性糖類，最近的研究表明，這些糖類可以起到促進(jìn)內(nèi)源性雙歧桿菌活動(dòng)的作用，可以使內(nèi)源性雙歧桿菌活性增強(qiáng)，起到更好的抑制結(jié)腸內(nèi)腐敗菌生長(zhǎng)的積極作用。本實(shí)驗(yàn)對(duì)大豆低聚糖國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法中的流動(dòng)相比例以及液相色譜條件，包括柱溫和檢測(cè)器溫度等進(jìn)行了一定程度的調(diào)整，回歸曲線獲得了較好的線性表現(xiàn)，回收率也達(dá)到87%—111%，為實(shí)驗(yàn)室工作人員找尋更加快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)的大豆低聚糖檢測(cè)方法提供一些參考和幫助。

關(guān)鍵詞：大豆；低聚糖；高效液相色譜；反相色譜

中圖分類號(hào)：S5 65.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：2095-9737（2018）03-0014-01

大豆低聚糖一般在酸性條件下的熱穩(wěn)定性較佳，目前我國(guó)對(duì)于大豆低聚糖的檢測(cè)分析一般是使用色譜法，常用方法一般包括定性以及粗略定量的紙色譜法、薄層色譜法及準(zhǔn)確定量的氣相色譜法、離子交換色譜法以及高效液相色譜檢測(cè)方法。

目前，我國(guó)檢測(cè)大豆低聚糖一般采用國(guó)家推薦性標(biāo)準(zhǔn)《GB/T 22491-2008大豆低聚糖》中附錄A規(guī)定的高效液相色譜法，采用反相鍵合相色譜進(jìn)行檢測(cè)。但在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，這一國(guó)標(biāo)推薦的方法存在檢測(cè)時(shí)間比較長(zhǎng)，基線穩(wěn)定性不佳，數(shù)據(jù)精密度不高，重復(fù)率達(dá)不到理想效果，回收率不穩(wěn)定等問(wèn)題。針對(duì)以上所述國(guó)標(biāo)方法中存在的種種問(wèn)題，為了達(dá)到縮短檢測(cè)時(shí)間，使待測(cè)組分達(dá)到更好的分離效果，同時(shí)提高精密度和準(zhǔn)確度的目的，本實(shí)驗(yàn)對(duì)大豆低聚糖檢測(cè)方法的某些步驟和參數(shù)進(jìn)行了一定程度的調(diào)整，為實(shí)驗(yàn)室工作人員找尋更加快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)的大豆低聚糖檢測(cè)方法提供一些參考和幫助。

1 實(shí)驗(yàn)原理

高效液相反相鍵合相色譜法測(cè)定大豆中低聚糖含量的原理如下：色譜的固定相配體交換樹脂選用經(jīng)過(guò)高強(qiáng)度磺化處理過(guò)的陰離子交換樹脂，具有極強(qiáng)的電負(fù)性，而其上帶有活潑性較強(qiáng)的金屬元素，這些金屬元素極容易失去電子，形成金屬陽(yáng)離子。金屬陽(yáng)離子與樹脂上強(qiáng)電負(fù)性的磺酸基發(fā)生作用，由于正負(fù)電荷的吸引力作用，金屬離子能夠牢固的被固定在樹脂上不至于被洗脫。大豆低聚糖分子一般帶有負(fù)電荷，實(shí)驗(yàn)時(shí)與表面帶有金屬離子的樹脂發(fā)生作用，低聚糖中的負(fù)電荷與金屬離子的正電荷發(fā)生作用，從而留存于樹脂表面，但低聚糖與金屬離子的相互作用沒有金屬離子與磺化樹脂的作用力那么強(qiáng)，因此在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中逐步被流動(dòng)相洗脫，進(jìn)而達(dá)到與其他組分分離的目的。

2 實(shí)驗(yàn)材料與方法

2.1 儀器及試劑

蔗糖標(biāo)準(zhǔn)樣品；棉籽糖標(biāo)準(zhǔn)樣品；水蘇糖標(biāo)準(zhǔn)樣品；乙腈（色譜純）；無(wú)水乙醇（色譜純）；分析天平（d=0.O01 g）；高效液相色譜（附示差折光檢測(cè)器）；一級(jí)實(shí)驗(yàn)室用水。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：用蔗糖標(biāo)準(zhǔn)樣品、棉籽糖標(biāo)準(zhǔn)樣品和水蘇糖標(biāo)準(zhǔn)樣品用60%的乙腈溶液配置成0.01 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；再分別配制成一定濃度的蔗糖、棉籽糖、水蘇糖標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，經(jīng)過(guò)0. 45 μm濾膜過(guò)濾備用。分別使用國(guó)標(biāo)方法和優(yōu)化方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，依次進(jìn)樣分別得到各濃度低聚糖的峰面積，以配置濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3 實(shí)驗(yàn)條件

國(guó)標(biāo)法參考條件：色譜柱：Kromasil- 100氨基柱；流動(dòng)相：80%乙腈=20%去離子水；流速：1 mL/min；檢測(cè)器：RID示差折光檢測(cè)器；色譜柱溫度：30℃；檢測(cè)器溫度：30℃；進(jìn)樣量：10 μL。

優(yōu)化方法參考條件：色譜柱：島津Inertsil氨基柱；流動(dòng)相：65%乙腈=35%去離子水；流速：1 mL/min；檢測(cè)器：RID示差折光檢測(cè)器；色譜柱溫度：35℃；檢測(cè)器溫度：40℃；進(jìn)樣量：10 μL。

4 數(shù)據(jù)及分析處理

國(guó)標(biāo)方法檢測(cè)三種大豆低聚糖的回歸曲線分別為：C=0. 009236A+O. 227： C=0. 009865A+0. 297； C=0. 008988A+0. 346。采用優(yōu)化方法檢測(cè)三種大豆低聚糖的回歸曲線分別為：C=0. 009769A+O. 289； C=0. 009932A+0. 381； C=o.009645A+O.312。重復(fù)進(jìn)樣檢測(cè)精密度，國(guó)標(biāo)方法精密度平均為RSD=0.82%，優(yōu)化方法平均為0.89%。國(guó)標(biāo)方法檢測(cè)過(guò)程中，出現(xiàn)了倒峰的現(xiàn)象，并且實(shí)驗(yàn)時(shí)間較長(zhǎng)為30 min，優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中降低了流動(dòng)相中乙腈的含量的情況下，各峰能夠較好的分離并且全部峰都能夠在15 min內(nèi)完成出峰。

5 回收率試驗(yàn)

在已知低聚糖含量的大豆粉碎樣品中定量加入三種低聚糖的標(biāo)準(zhǔn)品，按照優(yōu)化后的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算回收率，蔗糖回收率在89%—96%，棉籽糖的回收率為87%—108%，水蘇糖的回收率為92% -111%均達(dá)到回收的要求。

6 結(jié)論

優(yōu)化后的大豆低聚糖檢測(cè)方法能夠達(dá)到實(shí)驗(yàn)的精度要求，并且改善了大豆低聚糖出峰的分離，并且有效縮短了試驗(yàn)時(shí)間，提高了效率，能夠準(zhǔn)確的測(cè)定大豆中各類低聚糖的含量。